芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

制备工艺对冷拌环氧沥青相容性的影响研究

冷拌环氧沥青因其可以常温施工、力学性能优良、养护时间短、节能环保等优点在钢桥面铺装上受到越来越多的关注,然而冷拌环氧沥青的不同制备工艺对其性能影响较大.通过粘度测试、荧光显微镜观察和拉伸试验来研究不同搅拌温度、搅拌速率和搅拌时间对冷拌环氧沥青相容性的影响.结果表明:搅拌温度和搅拌时间对B组分及混合物的粘度和沥青的分散特...     

喷水推进高速三体滑行艇数值自航研究

为了验证计算流体力学(CFD)方法预报滑行艇自由液面粘性流场的精确度,判断为某三体滑行艇设计的喷水推进器能否满足快速性要求,采用CFD方法对某喷水推进高速(1Fr_L1.8)三体滑行艇进行两相流的数值自航,并与试验值比较。运用切割体网格技术并基于RANS VOF求解,首先计算了五个不同速度下的裸艇阻力。结果表明:阻力系数最大误差8.3%,最小误差0.5%,达到了较好的计算精度;采用等推力系数法,在模型尺度下进行"滑行艇+喷泵"的数值自航,将结果推算到实尺度艇,结果表明该喷泵可以达到设计航速;高速航行时推力减额为负的主要原因是艇首尾压差阻力的显著降低。计算结果显示,考虑自由液面时滑行艇底部会出现不合理的水气分布,这影响到滑行艇的阻力性能和喷泵的推进性能,通过局部网格加密可以显著减少艇底非正常水气分布,但艇底气水层难以完全消除,这可能是CFD方法预报滑行艇阻力精度难以控制的原因之一。     

可扭转的特殊电缆

用于扭转运动的带屏蔽电缆经常会失效。易格斯研发出了一种带屏蔽的三维电缆,其单芯芯线可承受高度扭转。与传统的抗损坏铜屏蔽不同,该电缆使用了可抗扭转的镀锡铜屏蔽护套,由扭转运动产生的大部分压力都可被护套、屏蔽和绝缘材米斗之间的滑行缓冲元件所吸收。外护套材料也是由耐磨损性能极佳的高品质TPE混合物制成的。     

德国EROCKIT 首批高速电动自行车目前正式批量推向市场

"eROKITs"高速电动自行车现已批量投产德国EROCKIT生产的首批"eROKITs"高速电动自行车目前已从货栈运出,正式批量推向市场。据介绍,这种高速电动自行车在穿越马路时可将接近十字路口交通指挥灯旁的汽车一下子甩在后面。称之为"人性化-混合物"的此种高速电动自行车,其实在几年前就已推出。今天,交通管理部门已准许其投放城市交通,并可批量上市销售。     

思想麻痹酿成惨剧

<正>1.油船油罐卸油期间的防火安全应比其装油时更为重要油船油罐卸油时较之其装油时较少产生静电,更不易在内罐内、舱内积聚静电,鉴于这一点,人们往往认为"卸油比装油安全"。其实不然,油船油罐在卸货过程中会使舱内、罐内吸入大量新鲜空气而形成大量爆炸性混合物,随着有限空间不断增大,爆炸混合物也相应增多,从而使之爆炸危险性增大,综合破坏力也相对增强。特别是货油接近卸空和进行扫线扫舱过程中,如操作不当、压力控制不妥,同样会产生大量静电,还会发生泵     

岩质坡面喷混快速绿化新技术

传统的绿化方法对高等级公路开挖后裸露的岩质边坡难以直接绿化.喷混绿化新技术利用特制喷混机械将土壤、肥料、有机质、保水材料、植物种子、水泥等混合干料加水后喷射到岩面上,由于水泥的粘结作用,上述混合物可在岩石表面形成一层具有连续空隙的硬化体,种子可以在空隙中生根、发芽、生长,而一定程度的硬化又可防止雨水冲刷,从而达到恢复植被、改善景观、保护环境的目的.     

揭秘汽车及其主要部件工作原理(一)

<正>汽车发动机工作原理汽油发动机的目的在于将汽油转换为运动,以便汽车能够开动。目前将汽油变成运动的最简单方法是在发动机中燃烧汽油。因此,汽车发动机是一种"内燃发动机"——燃烧发生在内部。内部燃烧。目前几乎所有汽车都使用四冲程燃烧循环来将汽油转化为运动。四冲程方式又称作"奥托循环",以此纪念1867年发明它的尼克劳斯?奥托(Nikolaus Otto)。     

浅淡汽油发动机混合气扰流增力节能减排改进装置

<正>化油器式汽油发动机油气雾化原理现有的化油器式汽油发动机的油气混合雾化工作主要是在化油器的泡沫管内和发动机喉管混合气进气通道内完成的。汽油在发动机气缸活塞运动时抽吸空气的负压吸力下,从化油器主量孔10首先进入泡沫管内2,在流动的汽油的负压吸力下,与从微型通气孔8进入泡沫管内的空气进行首次混合后形成泡沫状混合物,然后再进入喉管。泡沫状油气混合物在由空气滤清器进入的高速气流冲击下,与空气进行二次混合并雾化,最后进入发动机气缸燃烧室由火花塞点燃产生高温高压瞬爆气体,驱动活塞,