芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

专业力量齐发力 复工复产有实招——北海航海保障中心抗疫情保复工侧记

疫情阻击战到了最关键的阶段,保复工、稳发展迫在眉睫。北海航海保障中心(简称“中心”)主动作为,有效履职,积极加强与属地海事、引航、气象、港口等单位的协调沟通,针对辖区LNG、煤炭能源运输提供定制化优先服务,保障各类导助航设施、系统平稳正常运行。新冠肺炎疫情期间,共计为辖区1.7万余艘次船舶航行和13.5万人次旅客安全运送提供了及时、高效的航海保障服务。     

海上无线电气象传真系统构成及技术扩展

海上无线电气象传真业务是船舶接收海上气象信息的重要手段之一,能够为国家履行国际公约及加强航海保障能力提供强有力的支持。本文结合海上无线电气象传真系统工程建设实践,重点介绍了该系统的构成及工作流程,分析了工程建设中关注的几个问题,并对后续系统功能技术扩展提出了建议。     

总后直属供应保障局组织汽车专业岗位练兵比武活动

总后直属供应保障局坚持以胡主席“着眼战略全局大抓军事训练”重要指示为指导，以军委新时期军事战略方针为统揽，以汽车专业技术兵训练与考核大纲为依据，认真贯彻落实全军和总后军事训练工作会议精神，为积极探索汽车专业训练的新路子，不断提高汽车专业队伍整体素质和能力，于2006年10月24日组织了汽车专业岗位练兵比武活动。     

浅论军事交通运输

根据形势的需要，将军事交通建设项目纳入国家整体的交通建设中通盘规划、同步设计、统一施工，十分必要。     

揭秘汽车制动力检测

汽车具有良好的制动功能，在正常行驶时，可以提高行车的安全保障；遇到紧急情况时，可以化险为夷。汽车制动性能的好坏，是安全行车最重要的因素之一，因此也是汽车检测的重点。[编者按]     

从劳动者8项权利浅谈职业病防治维权监督的重点

已颁布实施的《职业病防治法》赋予了劳动者免受职业病危害 ,保障自身合法权益的 8项权利。这 8项权利分别是知情权 ,培训权 ,特殊保障权 ,拒绝冒险权 ,检举、控告权 ,参与决策权 ,职业健康权 ,损害赔偿权。针对这 8项权利 ,对职业病防治法授权的卫生监督部门如何有重点地开展维权监督作一简要探讨 :1　知情权的监督职业病防治法规定 ,用人单位与劳动者订立劳动合同 (含聘用合同 )时 ,应当将工作过程中可能产生的职业病危害及其后果 ,职业病防护措施和待遇等如实告之劳动者 ,并在劳动合同中写明 ,不得隐瞒或者期骗。因此 ,对劳动合同的内容…     

车辆装备保障一体化训练应注意三个问题

完善信息化指挥系统 信息化条件下作战，战场情况多变难测，只有实施高度集中统一和灵活的指挥，才能充分发挥整体信息化保障能力的优势。为此，首先要使装备的组织指挥纳入作战指挥系统，实施统一的决策、计划、控制和协调；其次要尽快实现师（旅）、团装备指挥系统与集团军、战区装备信息化保障指挥系统联网，形成纵横交错、上下沟通的指挥网络体系。     

高等教育大众化进程中的质量观和质量保障体系

高等教育质量现对高等教育大众化进程有着重要影响．在我国高等教育大众化进程中，要确立发展的质量观、多样化的质量观、整体性的质量观．同时要真正建立高等教育质量评估和保障体系，只有建立教育质量体系，才能进入到真正意义上的高等教育大众化．