分子印迹磁性纳米粒的制备及其在蛋白质分离纯化中的应用

目的发展一种分子印迹磁性纳米粒用于分离纯化目标蛋白质的新策略。方法水热法制备Fe_3O_4磁性纳米粒,溶胶凝胶法制备分子印迹聚合物,动力学、等温、特异性吸附考察分子印迹磁性纳米粒吸附性能。结果所得聚合物可以在30min内达到吸附平衡,吸附量高达44.51mg/g,印迹因子和选择性因子分别为3.50和2.92,对牛血中的牛血红蛋白质有良好的特异性识别能力。结论所制备的分子印迹磁性纳米粒及其良好的选择性吸附性能为目标蛋白质的分离纯化提供了一条有效的途径。     

Preparation of recombinant firefly luciferase by a simple and rapid expression and purification method and its application in bacterial detection

A simple and rapid expression and purification method of recombinant firefly luciferase was developed for bacteria detection. A modified luciferase gene from North American firefly Photinus pyralis was cloned into pET28a expression vector and the recombinant protein was produced in Escherichia coli BL21. The recombinant luciferase, equipped with a polyhistidine affinity tag, was purified by immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC). The approach generated an abundant expression and an efficient purification of a recombinant luciferase with final yield 1.995mg/L of cell culture. Experiments on the recombinant luciferase also showed that the relative light units (RUL) of the enzyme were 5.8×108, and the specific activity was 2.9×1010 RLU/mg. By applying adenosine triphosphate (ATP) bioluminescence to detection of the coin bacteria using the recombinant protein, the ATP content of bacteria was 9.48×10-16mol/mL, and was identical to the bacteria counts (4500CFU/mL) in order of magnitude. Taken together, our results provided a simple and efficacious method of the preparation of recombinant luciferase, which could be applied in the determination of bacteria via ATP bioluminescence.     

不含氨基末端的PIF1解螺旋酶的纯化和初步功能研究

目的 从分子水平阐述人类PIF1解螺旋酶的生理功能,纯化只含有解螺旋酶模序,不含N-末端的PIF1蛋白--PIF1△N,并对其生物化学活性进行检测.方法 以Hela细胞的cDNA文库为模版,PCR扩增得到PIF1的540～1 923的cDNA序列,在cDNA的5′端引入六聚组氨酸标签后插入pET20b表达载体,得到重组质粒pET20-PIF1△N.通过共转化此重组质粒和一个编码稀有rRNA的质粒,PIF1△N蛋白在大肠杆菌中得到表达.在4 ℃通过一系列亲和层析柱,用高效液相纯化系统纯化了PIF1△N蛋白,并检测其生物化学活性.结果 从Hela 细胞的cDNA文库中克隆了PIF1蛋白的540～1 923的基因片段,使其在大肠杆菌中成功表达.建立了纯化PIF1△N蛋白的亲和层析方法, 并检测了其ATP酶活性.结论 不含N-末端的PIF1蛋白-PIF1△N,具有依赖镁离子和DNA的ATP酶活性.     

三氟甲基磺酸的生产工艺综述

三氟甲基磺酸作为一种有机超强酸,除了具备一般超强酸的基本功能外,还具有极强的耐氧化、耐还原特性,并且在强亲核剂的存在时,也不会游离出氟离子,故有无卤液体有机超强酸的功能。基于这一特殊性质,近年来其应用范围逐渐扩大,在各个相关领域发挥着重要的作用,特别是在化工领域的作用日益突出,对该产品的需求量也不断增加。对其尽快开发出一种经济可行的工业制法势在必行。本文介绍了三氟甲基磺酸的制备方法及当前对产品的质量要求,并简要介绍了它的纯化方法。     

六氟化硫制备与纯化技术

本文概述了六氟化硫(SF6)的制备方法—直接化合法、电解法及纯化方法—吸收法和吸附法。通过上述方法,可以得到满足市场需求的SF6产品气体。     

含增生结节鼠肝谷胱甘肽转硫酶的纯化和性质研究

含增生结节鼠肝GST活性在纯化过程各步均较正常肝明显增高,经DEAE-52和CM-52柱层析分离得阴离子同工酶A-1和A-2以及阳离子同工酶C-1,C-2,C-3和C-4,用等电聚焦电泳测定等电点分别为6.7,6.3,7.4,7.9,8.3和8.6。SDS-PAGE结果显示,含增生结节肝GST在正常大鼠肝GSTYa,Yb和Yc区带相应的位置,出现3条区带,各亚基分子量分别为26,000,27,000和28,600道尔顿,但活性增高明显的C-3和C-4只出现1条相当于Yc亚基的区带。含增生结节肝GST6种同工酶的带电性质及亚基组成与正常肝无明显差别。阳离子同工酶C-3和C-4活性占上柱总活性的70%,说明含增生结节肝GST活性增高以阳离子同工酶为主。     

高纯六氟化钨的生产工艺综述

六氟化钨在电子工业中有着广阔的应用前景,本文介绍了目前工业化生产高纯六氟化钨(WF6)的方法,六氟化钨的质量标准及分析检测方法等方面的内容,概述了六氟化钨的发展前景。     

百合多糖的分离纯化及抗肿瘤作用

目的 从百合粗多糖中分离纯化出纯化的百合多糖,并观察其抗肿瘤作用.方法 用水提醇沉法从植物百合中提取百合粗多糖,经透析、除蛋白、冷冻干燥后,采用DEAE-阴离子交换纤维素分段洗脱对其进行分离纯化,得到纯化的百合多糖;将纯化的百合多糖用于H22荷瘤小鼠,测定其对荷瘤小鼠免疫功能的影响及抗肿瘤作用.结果 分离出了纯化的百合多糖,经纯度鉴定表明成分均一;该多糖能增强H22荷瘤小鼠的免疫功能,抑制H22肿瘤的生长.结论 纯化的百合多糖成分均一,具有抗肿瘤作用.     

法国梧桐花粉的部分纯化及其主要变应原免疫活性分析

目的　对法国梧桐花粉变应原进行部分纯化并对其主要变应原免疫活性进行分析。方法　采用凝胶层析法分离纯化法国梧桐花粉变应原 ,经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测收集到的主要峰段的蛋白质分子质量 ,并对 7例法国梧桐花粉过敏支气管哮喘患者血清进行免疫印迹分析。结果　法国梧桐花粉变应原粗制液经SephadexG 10 0层析柱洗脱得两个洗脱峰 ,第一峰及第二峰升段富含蛋白 ;收集各段进行SDS PAGE电泳 ,第一峰升段、峰段、降段电泳图相似 ,主要含分子质量为 2 2～ 71ku之蛋白质 ,第二峰升段以分子质量为 14～ 16ku之蛋白质为主。电泳结果清晰显示 6条蛋白区带 ,分子质量分别为 71、5 0、35、39、2 2、16ku。免疫印迹分析可见 4条sIgG反应带 ,分子质量为 5 0、39、2 2、16ku。结论　法国梧桐花粉变应原含 6种主要蛋白成分 ,第一峰蛋白质含量高 ,为主要致敏组分 ;第二峰蛋白质含量少 ,为次要致敏组分。