芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

城市中心区停车设施供应研究

随着城市化进程的加快，我国机动车拥有量及道路交通量急剧增加，停车问题已成为诸多城市的难题。本文在分析了城市中心区停车设施供应的影响因素的基础上，建立了停车设施供应与停车需求关系模型以及停车设施供应与路网容量平衡关系模型，对如何合理确定城市中心区停车泊位供应量进行了探讨，并在浙江省台州市滨海工业城启动区块的停车设施供应规划中得到应用，可为我国城市中心区静态交通设施规划提供借鉴。     

北京:明天到哪里停车

相信有车一族都曾有过开着车在繁华地段转悠个把小时却找不到停车位的无奈；或者是下班驾车回家却发现小区里已经塞满了汽车，不得不把爱车停在路边，让它独自过夜；更有为了停车泊位的一纸证明而引出的无尽烦恼……尤其是像北京这样的大城市，“停车难”等问题不仅困扰着有车人，也让政府有关部门头疼。在城市机动车保有量不断攀升的情况下，人们或许会生出这样的疑问：明天在哪里停车？带着这个问题，记者来到北京市市政管理委员会，对停车设施管理处的庄建华副处长进行了专访，以期了解停车场的行业主管部门对北京市停车供求关系、解决方…     

编组站综合集成自动化系统实施过程中几个问题的探讨

本文介绍了成都北站综合自动化实施过程中遇到的道岔过电流保护设计、微机监测传输、尾部停车器逻辑设计和站场维修电话解决方案的实施经验和建议。     

我国城市机动车停车需求预测方法及其应用

本文天空并提出了我国城市机动车停车需求预测模型以及停车需求地区特征函数ｆ（ｘｉ）和交通影响函数ｆ（γＱ）的计算方法。作为应用实例，文中预测了苏州古城区停车需求，并给出了具体预测结果。     

台湾停车设备行业发展概况

台湾机械停车设备的产品概念与技术主要来自日本，台湾主要的停车设备厂商都和日商技术合作。德国的品牌间或在台湾出现，但都因为价位太高、互动较差而难以推展。