芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

深部引水隧洞交岔口稳定性仿真计算分析

深部隧洞交岔口稳定性受围岩性质、隧洞断面等诸多因素影响,围岩的力学特性复杂。依托山西省中部引黄工程,基于ABAQUS有限元软件对隧洞交岔口进行仿真分析,研究了断面突变交岔口的三角区围岩应力场与位移场的演变规律。结果表明,交岔口三角区侧围岩存在明显的应力集中,易受挤压破裂,需提高支护参数;交岔口断面突变处的衬砌连接处是薄弱部位,局部混凝土会出现拉裂现象,在施工过程中可采取控制弯曲变形措施,尽量修圆衬砌避免倒角。     

GZ6113型客车豪华刮水器控制线路的设计

主要介绍GZ6113型客车豪华刮水器线路的工作原理及优点。     

车用雪崩整流二极管反向重复峰值浪涌电流的测试

分析车用雪崩整流二极管反向重复峰值浪涌电流IRSM测试的必要性，介绍测试原理和方法。     

地电动自行车用铅蓄电池充电器的研究

介绍电动自行车电池充电的特殊要求，分析市场充电器优缺点，以及、三段式”充是惨数的确定：列举了理想充电对电极反应状态的检测的几 种方法。     

多段桥相控电力机车谐波的模拟计算

本文考虑牵引网的影响，通过建立机车换相等效电路模型，导出了较为完善的谐波计算数学模型，又利用付里叶分散，对机车电流进行了谐波分析，结合韶山７型电力机车的具体参数，对在不同运行工况下的机车谐波特性进行了模拟计算。     

电压电流同步式相序仪的研制

对新型相序仪的提出，研制要求，设计方案的确定分别进行了叙述。     

DF4型机车电流互感器开路故障分析及防范措施

分析了ＤＦ４型机车电流互感器开路造成的机破起因，并提出了防范措施和建议。