芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

原子荧光法同时测定自来水中痕量砷和汞的方法探讨

本文应用原子荧光光谱法,同时测定自来水中的痕量砷和汞,选择了最佳的仪器条件,进行了样品处理方法及酸度、干扰离子的研究,做了方法的检出限、线性范围、精密度、加标回收率等方法学的研究。本方法操作简便,灵敏度高,便于推广,适用于水中砷、汞的测定。     

电容法测定砂土含水量的试验研究

介绍电容法测量砂土含水量的方法，通过对自制湿度传感器的室内标定实验，得出传感器电容值随砂土含水量的变化规律，拟和出了相关公式，应用实例表明湿度传感器可以准确的测试砂土含水量，是一种用于长期监测路基，堤坝等防渗工程砂土含水量的有效方法。     

一种船舶吃水差的精确计算方法

此文通过分析纵倾状态下船舶吃水差传统计算方法中的误差，提出了一种适合于纵倾，特别是在较大纵倾状态下船舶吃水差的精确计算方法，该方法通常可以在具备一定船舶资料的条件下采用，也可以在船舶装载软件的设计中采用。     

生物测定学的未来

《主办城市》与Smartex集团董事长Richard Poynder谈论关于生物测定学技术发展的对话实录.[编者按]     

由测定接触力诊断接触网

以评价集电系的接触性能和提高维修接触网设备的效率为目的，铁路综合技术研究所对接触网、受电弓之间作用的接触力的测定方法和对接触力波形基础上的接触网设备的论断方法一直在进行研究。关于接触力的测定方法，相比原方法实现可测定频率范围大幅扩大。且作为接触力测定结果充分使用方法，提出能推测接触力波形基础上的接触导线的变形和能鉴别接触导线波动传播速度。     

铁路货场门式起重机检验方法要点解析

铁路货场门 (桥 )式起重机制造特许证是由铁道部科技司技术监督处批准 ,每五年换发一次。根据ＴＢ/Ｔ 135 7- 1992《铁路货场门式起重机技术条件》、ＧＢ/Ｔ 14 4 0 5 - 1993《通用桥式起重机》及铁道部质检中心制订的铁路货场门 (桥 )式起重机制造特许证换 (发 )证实施细则规定 ,检验分为硬件 (整机检验 )和软件 (质量体系检验 )两部分。硬件部分门式起重机检验项目有 10 1项 ,其中 12项为关键项点 ,判定合格率为 10 0 % ;89项为普通项点 ,判定合格率为 85 %。桥式起重机检验项目有 87项 ,其中 9项为关键项点 ,78项为普通项点。在结果判定…