芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

基于多维网络的增开列车条件下高速铁路列车运行图调整

研究增开列车条件下高速铁路列车运行图的调整问题,并综合考虑列车车站进路的影响。通过构建Time-Station-Track三维时空扩展网络,刻画列车对铁路时空资源的占用。将原多目标优化问题转化为求解列车占用网络弧段最小费用单目标问题,并构建基于Time-Station-Track网络的0-1整数规划模型。针对模型特点,设计拉格朗日松弛算法,将问题进一步分解为求解单列车网络最短路径子问题,由于问题被松弛后求得的解可能不可行。因此,提出基于列车优先序列的启发式策略对对偶解进行可行化。最后以宝兰客运专线为例,验证模型的正确性和算法的可行性。     

铁路独柱支承弯梁桥扭矩调整

利用空间有限元分析方法，对预应力等代荷载采用一种比较近似、简单、有效的处理，旨在通过合理的调整预应力束来调整扭矩。最后通过实桥模型试验对预应力束配置做出调整，并对结果做了相应的分析。     

上海大众车系电脑匹配码

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如何测量与调整船舶主机功率

文章介绍了船上测量和估算主机功率的方法，并阐明了主机功率发挥不正常的原因及调整措施。同时扼要地总结了主机日常管理中的注意事项。     

影视歌三栖明星任贤齐牵手2006年中国警察摩托车拉力赛

每个赛季开始前，钟情于摩托运动的车迷们就迫切地想了解这一年的摩托比赛会翻出什么新花样。继越野锦标赛拉开激烈较量的帷幕后，公路锦标赛的调整方案也终于尘埃落定，悄然揭晓。可以肯定地告诉各位，今年的公路赛看点多多，相当诱人。精彩指数五颗星!     

调整方式，加强对造船业的补贴和支持

船舶工业作为我国的重点出口产业,在国民经济中占重要的地位,关系着国计民生,但却依然存在着结构不合理、科技创新能力不足、船用配套设备国产化水平低、组织管理相     

北京BJ3364矿用汽车液压转向机的改进

液压转向机是重型汽车的重要部件之一，对汽车安全行驶，维修费用有重要的影响，根据较长期的生产实践，验证了油泵最高限定油压，供油量，滑阀顶开缝隙，最大密封重合度等参数调整改进的必要性及改进后的效果。