芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

补偿密度测井仪探测器设计与密度补偿值的关系的探讨

本文从理论和实践的角度，讨论了补偿密度测井仪密度补偿值出现负值的问题，提出了长短源距探测器的选配关系。     

岩顶隧道不良地质段的施工

岩顶隧道出口段为１类围岩，软弱且富水。采用短管栅、桩板墙、护壁、普通药包锚杆等办法较为顺得地通过了软弱地层。其排水和加固地层的方法有一定的参考价值。     

利用孔压静探确定软土地基的强度

将孔压探头贯入近似为孔穴扩张的过程，通过对探头的受力分析，得到了由孔压静探确定的饱和软粘土的不排水剪切强度值，采用此方法对广东西部沿海高速公路二标段软土地基的强度进行了估算，并与十字板试验的测试值作了对比，验证了方法的可行性。     

蠕动地层增建二线隧道围岩注浆加固技术

本文针对蠕动地层增建二级隧道围岩的变形特征，提出围岩注浆的力学模型，进行数值模拟分析，确定围岩注浆厚度和力学参数，并对运营隧道围岩注浆控制做了深入的研究。本文中大量的实测数据为保证运输安全情况下注浆施工提供了参考依据，本文还对注浆效果做了综合性的评价。     

米家园则榆溪河特大桥钻孔桩穿过小煤窑采空区地层施工技术

在小煤窑采空区地层施工钻孔桩基础是一件较困难的工作，特别是多层采空区尤应注意。该文从深入分析地质和水文资料入手，拟定了在小煤窑采空地层施工桩基础的方案。经试桩实践后组织施工，取得了较好成果。同时通过对路基段小煤窑采空区灌浆加固施工工艺的总结，以及对国外同类施工技术的研究和借，摸索出一套桥梁桩基础穿过小煤窑采空区地层灌浆加固处理施工工艺，并取得了显著效果。     

中船重工第七一五研究所海底剖面仪课题通过验收

由中船重工第七一五研究所牵头承担的“十五”国家863计划海洋资源开发技术主题一“超宽频海底剖面仪”课题，日前在杭州通过专家组的验收，这标志着我国在海洋地层剖面仪研究领域已经达到了国际先进水平。随着该课题的研究成果正式投入实际应用，将加快我国剖面仪的国产化进程。     

错时:高峰小时会错出,也有错进

<正>错时是错开上下班高峰时间。一般上学高峰时间与上班高峰时间是错开的,且就近或住校读书居多,上学客流较小,高峰小时供求矛盾并不突出;而职工上下班量大,时间集中,设施容量饱和甚至超饱和,确实需要错时。错时,实际也是交通需求管理的措施之一。