芳香硫酸酯酶定点饱和突变方案的比较

目的比较随机引物与精确引物PCR扩增实施绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(Pseudomonas aeruginosa arylsulfatase, PAAS)定点饱和突变的整体效率及成本,以建立高效实用的定点饱和突变方案。方法以大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase, ECAP)与PAAS融合表达质粒为模板,分别用针对PAAS目的位点的随机引物、精确引物等量混合物及单个精确引物,进行全质粒PCR扩增构建定点饱和突变体库;碱裂解细胞后高通量测定PAAS突变体与ECAP活性比值进行筛选,比较3种定点饱和突变建库方案需筛选的单克隆数量、所获突变体种类、整体耗时、整体成本及影响因素。结果用随机引物PCR对M72位定点饱和突变有明显密码子偏好性,筛选超600个单克隆仅获得10种预期突变体,但对G138位定点饱和突变未见明显的密码子偏好性且筛选不到150个单克隆获得18种预期突变体;精确引物等量混合物对M72位实施定点饱和突变,筛选不超过190个克隆成功获得19种预期突变体;单个精确引物对M72位逐个PCR实施定点饱和突变,仅各筛选2个单克隆就获得19种预期突变体。单个精确引物逐个PCR实施定点突变所获饱和突变体库完整,需筛选的单克隆数最少,总耗时和总成本最低;相比之下,用随机引物和精确引物等量混合物实施定点饱和突变时,所需筛选的单克隆数、整体耗时及成本均显著增加。结论解析序列-活性关系时,用单个精确引物逐个PCR实施定点饱和突变有显著整体成本和效率优势;仅筛选阳性突变体时,用精确引物等量混合物进行PCR建库在成本和效率上更有优势。     

库区液化标准船型设计

库区化学品船标准船型设计理念　三峡成库后,川江及三峡库区航运条件和通航环境发生重大变化.重庆至丰都为自然航道;丰都至三峡大坝为库区航道;三峡和葛洲坝枢纽之间为二坝间航道;葛洲坝水利枢纽以下为坝下航道.而中游荆江段将成为枯水期主要碍航段之一.航行于重庆至长江口的库区标准船舶将受到众多通航建筑物的限制,除近40座大桥外,主要是三峡和葛洲坝水利枢纽工程.     

液化石油气船

液化石油气（LPG）船大致可以分为四种不同类型。船型最小的是从事沿海运输的全加压式LPG船，舱容一般为3000-7000立方米，最大可达11000立方米。通常运输丁烷和丙烷，有时也运输乙烯基氯化物单体，货物可被压缩至18巴。这种船不能提高或降低货物温度，一般在气候较为温暖的地中海地区和印度沿海航行。     

电容法测定砂土含水量的试验研究

介绍电容法测量砂土含水量的方法，通过对自制湿度传感器的室内标定实验，得出传感器电容值随砂土含水量的变化规律，拟和出了相关公式，应用实例表明湿度传感器可以准确的测试砂土含水量，是一种用于长期监测路基，堤坝等防渗工程砂土含水量的有效方法。     

挤密砂桩消除地基液化的应用与体会

通过振动沉管挤密砂桩消除地基液化的工程实践，介绍该挤密砂桩施工工艺，及工程地基液化处理应用效果与施工体会。     

液化砂土层覆盖下岩溶区桩基施工技术

分析液化砂土的特性 ,在施工实践中解决深厚液化砂土层覆盖下岩溶地区桩基施工易塌孔的难题     

车用LPG蒸发调压器的原理与功能分析

通过对车用液化石油气（LPG）蒸发调压器结构的剖析，分析了蒸发调压器的工作原理及各部分的功能，并展望了其开发前景。