259例骨肉瘤细针吸取细胞学检查及病理学分析

目的:对259例骨肉瘤病例的针吸涂片细胞学特点、诊断和鉴别诊断进行分析,探讨细针吸取细胞学(FNAC)对骨肉瘤诊断的准确性及价值。方法:回顾性分析有完整的术前FNAC结果和术后病理组织学诊断的骨肉瘤259例,分别对其FNAC结果和组织学切片诊断进行对照观察。结果:259例标本中,对骨肉瘤诊断的准确率为73%(189/259),并发现骨肉瘤细胞学的七大特征。结论:FNAC检查能提高术前对骨肉瘤的确诊率,是一种简便、准确、创伤小的诊断方法。     

六磷酸肌醇对人骨肉瘤细胞株MG-63和原代培养成骨细胞增殖的影响

目的研究六磷酸肌醇(inositol hexaphosphate,IP6)对人骨肉瘤细胞株MG-63和原代培养成骨细胞增殖的影响,并探求其抗癌效果的最佳作用浓度。方法原代培养人成骨细胞并鉴定,复苏并常规培养人骨肉瘤细胞株MG-63,MTT法检测不同浓度IP6干预培养时两种细胞的增殖情况,确定IP6的最佳抑癌浓度,并进一步用流式细胞仪检测MG-63细胞周期及凋亡情况。结果当IP6浓度≥1mmol/L时开始抑制MG-63细胞增殖,在4mmol/L时达到最大,并呈时间-剂量依赖性;当IP6浓度为0.5、1mmol/L时,对成骨细胞增殖抑制不明显,2mmol/L时轻度抑制,4mmol/L时导致成骨细胞凋亡。结论 IP6能够抑制人骨肉瘤细胞MG-63的增殖并导致其凋亡,其抗癌的最佳作用浓度为2mmol/L。     

姜黄素对人骨肉瘤U-2OS细胞增殖的抑制作用

目的 观察不同浓度的姜黄素对人骨肉瘤U-2OS细胞增殖的抑制作用.方法 将不同浓度的姜黄素(0、10、20、40μmol/L)作用于人骨肉瘤U-2OS细胞12、24、48h,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测U-2OS细胞的增殖.结果 姜黄素可显著抑制U-2OS细胞的体外增殖,并且随着浓度增加,抑制作用明显增强(10、20、40μmol/L的r值分别为-0.9638、-0.9778、-0.9764,P均<0.05);作用时间愈长,对U-2OS细胞的抑制作用也愈明显(12、24、48h的r值分别为-0.9325、-0.9780、-0.9705,P均<0.05), 呈明显浓度和时间依赖性.结论 姜黄素能明显抑制人骨肉瘤U-2OS细胞的体外增殖,可能为临床治疗骨肉瘤提供了一种新的方法.     

血管内皮生长因子在骨肉瘤中的表达及意义

探讨骨肉瘤组织中血管内皮生长因子表达水平与骨肉瘤患者预后的关系。方法应用免疫组化技术检测４８例骨肉瘤组织标本和１０例正常骨组织中的ＶＥＧＦ表达情况，交结合临床及３６月随访资料综合分析患者年龄，发病时间，肿瘤大小、组织亚型、化疗情况及肿瘤转移与ＶＥＧＦ表达水平之间的关系。     

RNAi沉默ADM表达对人骨肉瘤细胞中β-catenin的作用及对成骨分化的影响

目的探讨通过RNAi方法沉默肾上腺髓质素(ADM)的表达对骨肉瘤细胞中β-catenin蛋白表达的作用及对骨肉瘤成骨终末分化的影响。方法细胞免疫组化方法观察ADM siRNA转染骨肉瘤细胞系F5M2后,β-catenin在0、48、72h的表达情况;应用Western blot检测ADM siRNA对F5M2细胞中β-catenin、GSK3β及其磷酸化蛋白的作用。HE染色观察ADM siRNA处理前后F5M2细胞形态的变化。观察碱性磷酸酶(ALP)染色、骨钙蛋白(OCN)的表达情况,了解ADM siRNA诱导F5M2细胞成骨终末分化的作用。结果 RNAi靶向敲低ADM的表达后,应用细胞免疫组化法观察到β-catenin蛋白从胞质逐渐向胞核内转移;Western blot结果显示ADM siRNA使磷酸化β-catenin蛋白表达降低,而磷酸化GSK3β表达升高。ADM siRNA作用骨肉瘤细胞后,细胞形态向良性分化,ALP染色加深,OCN蛋白表达升高。结论沉默ADM基因表达能诱导骨肉瘤细胞F5M2中β-catenin的活性增加及向核内转移。体外实验中,ADM siRNA通过活化β-catenin通路诱导骨肉瘤细胞的终末分化。     

ADM及β-catenin在人骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)及β-catenin在人不同分化程度骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化方法检测33例不同病理分级人骨肉瘤组织(高分化14例,低分化19例)及10例骨软骨瘤组织石蜡切片中的ADM、总β-catenin(T-β-catenin)及磷酸化β-catenin蛋白(P-β-catenin)的表达。结果 ADM在骨肉瘤细胞质内表达,在高、低分化骨肉瘤表达阳性率分别为57.1%(8/14)和100%(19/19),差异有统计学意义(P=0.003<0.05)。在高分化骨肉瘤中,T-β-catenin在胞质胞核中均有表达,阳性表达率为85.7%(12/14);而在低分化骨肉瘤中,T-β-catenin仅在胞膜上胞质内有表达,阳性表达率为94.7%(18/19);T-β-catenin在不同恶性程度骨肉瘤中阳性表达率的差异无统计学意义(P=0.561>0.05)。P-β-catenin在骨肉瘤细胞质内表达,在高、低分化骨肉瘤中表达阳性率分别为35.7%(5/14)和78.9%(15/19),差异有统计学意义(P=0.029<0.05)。ADM与P-β-catenin(r=0.424,P=0.025<0.05)之间有相关性,ADM与T-β-catenin(P=0.078>0.05)、T-β-catenin与P-β-catenin(P=0.052>0.05)之间均无显著相关性。结论 ADM、P-β-catenin蛋白表达量的高低以及总β-catenin在细胞核、细胞质内的表达差异可作为判断骨肉瘤组织恶性程度的重要指标。其为进一步研究ADM与β-catenin在骨肉瘤的关系及对骨肉瘤细胞分化的作用提供了理论依据。     

microRNA与骨肉瘤的研究进展

原发的骨恶性肿瘤的发病率约占全部肿瘤的0.2%左右，是一种较为罕见的恶性肿瘤。骨肉瘤是原发性骨恶性肿瘤中较为常见的一种，发病率约占骨恶性肿瘤的19%左右，是青少年患者的恶性肿瘤发病率中处于第三位，仅次于白血病和脑癌。骨肉瘤的治疗方式主要包括手术切除和放化疗。新辅助化疗的开展使骨肉瘤的无病生存率从不足20%提高至60%左右，总生存率达到了60%-70%。然而由于骨肿瘤容易发生转移，一旦发生转移患者预后较差。目前关于骨肉瘤的发病机理仍不十分清楚，进一步研究骨肉瘤发生和转移的机制，寻找更为有效的治疗靶点对于提高骨肉瘤的治疗效果极为关键。在过去十年中，生命科学的一个重要发现就是小RNA，包括miRNA。miRNA一种长约18-25个核苷酸的非编码小RNA，其作用机制是通过与靶基因mRNA的3‘UTR端相结合，诱导mRNA发生降解或抑制翻译，从而对生物生长，发育和分化等过程进行调控。同样，miRNA参与调控与肿瘤相关的生物过程包括增殖、细胞周期调控、凋亡、分化、迁移、侵袭和代谢。miRNA能够调控绝大多数mRNA的表达，从而进一步深入影响与肿瘤相关的信号通路。miRNA在肿瘤中可以作为癌基因和抑癌基因。近年来，广大学者的研究逐渐揭示了miRNA在骨肉瘤发生及发展过程中的作用，这一研究领域不仅为揭示骨肉瘤的发病机理提供了新的研究思路，同时也为骨肉瘤的治疗带来了新的希望。     

多中心骨肉瘤治疗及预后-附6例病例报告

目的：总结多中心性骨肉瘤的治疗效果及预后；方法：2010年3月至2014年12月间于我院诊断及治疗的多中心性骨肉瘤患者6例，其中男性4例，女性2例。4例（A组）患者在初诊时全身多处骨骼存在骨肉瘤病灶，2例（B组）患者治疗过程中先后出现多处骨肉瘤病灶。6例患者中有1例患者因经济原因放弃治疗，其余5例患者均接受化疗及手术。手术以切除最大瘤体为主，化疗方案为ADMI方案，术前新辅助化疗，术后继续化疗。结果：放弃治疗的1例患者（A1）存活5月，1例患者(A4)发病至今4个月，仍在治疗中，其余4例患者(A2、A3、B1、B2)生存时间分别为19、6、13、18个月。结论：多中心骨肉瘤预后极差，经积极的化疗及手术干预，部分患者能延长生存期。     

SELEX筛选骨肉瘤HER2适配体方法的建立

目的应用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与HER2特异性结合的寡聚核酸适配体(aptamer)。方法体外合成了长度为78个碱基并含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库,通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法制备次级ssDNA文库,且经以微孔为介质的SELEX正反筛法获得了与HER2特异性结合的DNA适配体;同时利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力,将亲和力最高的适配体群进行克隆、测序。最后利用生物学软件DNAMAN对适配体群进行了一级结构和二级结构的分析,同时将亲和性最高的适配体做了进一步的特异性的检验。结果经过12轮的筛选,获得了与HER2蛋白具有极高亲和力的适配体9号,亲和力从初始的0.18上升至0.86,提高了约5倍。特异性结果显示,9号适配体只与HER2具有较高的特异性。结论经过多轮的筛选,成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤的诊断和治疗奠定了基础。