| 含hITF基因cDNA的腺病毒载体的构建及其感染肠上皮细胞的研究 |
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| 引用本文： | 孙勇,陈宝君,勒娟,潘晓峰,张方.含hITF基因cDNA的腺病毒载体的构建及其感染肠上皮细胞的研究[J].西安交通大学学报(医学版),2014,35(6):795-799. |
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| 作者姓名： | 孙勇 陈宝君 勒娟 潘晓峰 张方 |
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| 作者单位： | 1. 徐州医学院附属淮海医院烧伤科,江苏徐州,221004
2. 中国人民解放军第九七医院烧伤科,江苏徐州,221004 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，南京军区医学科研课题重点项目(12Z10) Supported by the National Natural Science Foundation of China，the Scientific Research Funds of Nanjing Military Command |
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| 摘 要： | 目的构建含有人肠三叶因子基因cDNA的腺病毒载体,并观察其对肠上皮细胞的感染能力。方法利用PCR技术扩增hITF基因cDNA全长序列,测序后亚克隆至腺病毒穿梭质粒,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1大肠杆菌株BJ5183感受态细胞中进行同源重组,内切酶PmeⅠ线性化后转染HEK293细胞进行病毒包装及扩增,并进行滴度测定。将重组腺病毒感染肠上皮细胞(HT-29),荧光显微镜观察感染效果。结果成功构建出重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hITF,PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,PacⅠ酶切鉴定后命名为Ad-hITF;重组腺病毒载体在HEK293细胞中包装,获得重组腺病毒颗粒;根据Karbers公式计算病毒颗粒滴度为2×109 pfu/mL;重组腺病毒可以感染肠上皮细胞(HT-29),感染效率较高。结论成功构建含hITF基因cDNA的重组腺病毒载体并获得大量子代重组腺病毒,为腺病毒介导hITF基因治疗的应用打下基础。
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| 关 键 词： | 肠三叶因子 腺病毒 肠上皮细胞 基因治疗 |
Construction of recombinant adenovirus vector containing hITF and infection of intestinal epithelial cells |
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| SUN Yong,CHEN Bao-jun,LE Juan,PAN Xiao-feng,ZHANG Fang.Construction of recombinant adenovirus vector containing hITF and infection of intestinal epithelial cells[J].Journal of Xi‘an Jiaotong University:Medical Sciences,2014,35(6):795-799. |
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| Authors: | SUN Yong CHEN Bao-jun LE Juan PAN Xiao-feng ZHANG Fang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | intestinal trefoil factor adenovirus intestinal epithelial cell gene therapy |
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