| 应用抑制性消减杂交技术筛选NS5ABP37的反式调节基因 |
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| 引用本文： | 张雷,马清涌,孟宪魁,李康,成军. 应用抑制性消减杂交技术筛选NS5ABP37的反式调节基因[J]. 西安交通大学学报(医学版), 2009, 30(4) |
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| 作者姓名： | 张雷 马清涌 孟宪魁 李康 成军 |
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| 作者单位： | 1. 西安交通大学医学院第一附属医院普通外科,陕西西安,710061
2. 北京地坛医院传染病研究所,北京,100011 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，国家重点基础研究项目(973项目) |
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| 摘 要： | 目的 应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建NS5ABP37反式激活相关基因差异表达的cDNA文库,筛选NS5ABP37蛋白反式激活相关基因.方法 以表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ABP37转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,从转染后的细胞裂解液中提取mRNA并合成cDNA,经RsaⅠ酶切消化后将实验组cDNA分成两组,分别衔接两种不同接头,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR反应;第2次PCR产物与pGEM-T easy克隆载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR鉴定后进行测序及同源性分析.结果 成功构建了人NS5ABP37蛋白反式激活相关基因差异表达的cDNA文库.扩增后得到60个200～1000bp插入片段的克隆,随机挑选其中20个测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得9种已知功能编码基因.结论 NS5ABP37基因功能涉及细胞生长调节、信号转导和能量代谢.
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| 关 键 词： | 抑制性消减杂交 丙型肝炎病毒 cDNA文库 |
Cloning and screening of transregulated genes of NS5ABP37 by SSH |
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| ZHANG Lei,MA Qing-yong,MENG Xian-kui,LI Kang,CHENG Jun. Cloning and screening of transregulated genes of NS5ABP37 by SSH[J]. Journal of Xi‘an Jiaotong University:Medical Sciences, 2009, 30(4) |
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| Authors: | ZHANG Lei MA Qing-yong MENG Xian-kui LI Kang CHENG Jun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | NS5ABP37 |
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