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| 人永生化表皮细胞HaCaT电转染条件的优化 | |
| 作者单位： | ;1.西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科;2.西安交通大学医学院环境和疾病相关基因教育部重点实验室 |
| 摘 要： | 目的比较不同电转染条件下,人永生化表皮细胞HaCaT的转染效率,探讨影响HaCaT电转染率和存活率的主要因素,筛选出HaCaT细胞最佳的电转染条件。方法应用电穿孔仪,设定不同的电压(180、360、540、720V)、脉冲时间(40、60、80、100、120μs)、脉冲周期(1、2、3、4、5次)和温度(室温和4℃)等条件,将质粒(pGPU6/GFP/nev)电转染至HaCaT细胞。电转染24h后,荧光镜下和光镜下分别计算绿色荧光阳性细胞数和总细胞数,并随机取3个视野算平均值,计算电转染率;MTT法检测电转染后细胞的存活率。结果当HaCaT细胞浓度为1.5×106/mL,pGPU6/GFP/nev质粒浓度为2.0μg/mL,HaCaT细胞的最佳电转染条件为540V/60μs/Pulse1/RT,此时细胞生长状态最佳,电转染率可达到33.23%,细胞存活率为61.22%。结论本实验优化了HaCaT细胞电转染的最佳条件,提高了HaCaT细胞电转染效率,为后续基因功能的研究奠定了基础。 |
| 关 键 词： | HaCaT 电转染 转染条件 |
Optimization of electrotransfection conditions for the immortal human keratinization HaCaT cell line |
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