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| sh-Set7/9表达载体的构建及其在HepG2细胞中的功能 | |
| 作者单位： | ;1.兰州大学第二医院中心实验室;2.兰州市第二人民医院骨科;3.兰州大学第二医院药剂科 |
| 摘 要： | 目的构建sh-Set7/9表达载体并筛选稳定转染HepG2细胞株,考察其干扰效果,为后续研究Set7/9基因的功能及其在肝癌细胞系中的作用提供实验基础。方法寻找靶向序列,设计siRNA片段,构建针对人Set7/9基因的shRNA和对照载体,将干扰载体和载体稳定转染肝癌细胞HepG2,Real-time PCR检测细胞中Set7/9基因的表达水平;同时利用Western blot方法在蛋白质水平进行检测,确定该基因的干扰效果。结果成功构建载体Set7/9-shRNA;Real-time PCR结果显示该基因表达水平明显被抑制(P<0.05),同样Western blot检测表明其蛋白表达也显著下调。此外,与其相关的Sirt1蛋白表达水平提高8.4倍,Suv39h1蛋白表达水平升高1.1倍。结论构建稳定转染株后,可以显著下调Set7/9基因的表达,同时影响与其相关的Sirt1和Suv39h1蛋白表达水平,提示对肝癌HepG2细胞活性产生影响。 |
| 关 键 词： | Set7/9 HepG2细胞 Western blot 甲基转移酶 载体构建 肝癌 |
Construction of shSet7/9 vector and its function in HepG2 |
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