核苷磷酸化酶的工程菌构建

使用PCR扩增技术对来源于AEM0812菌株的核苷磷酸化酶基因进行扩增。利用克隆载体pD18-T进行连接，构建重组质粒pMD18-T-deoD,再将其导入Escherichia coli DH5α菌体内，克隆目的基因。利用表达载体pET-28a与目的基因构建重组质粒pET-28a-deoD,导入E.coli BL21(DE3)菌体内，获得工程菌E.coli(deoD)。利用IPTG进行诱导表达，采用SDS-PAGE方法检测到在大约27 KD处出现了明显的蛋白条带，其分子量与已知的嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)的分子量(25.82 KD)一致，这表明在E.coli(deoD)中成功表达出deoD基因，同时表明成功构建了嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)工程菌。