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| 磁珠固定多抗预测最大吸附活性识别阳性突变体 | |
| 作者单位： | ;1.重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室 |
| 摘 要： | 目的考察磁珠固定多抗吸附细胞裂解液中酶/突变体,分析吸附酶活性对样品蛋白量响应曲线预测最大吸附活性(Vs)用于比较识别阳性突变体的可靠性。方法纯化重组表达大肠杆菌碱性磷酸酶(ECAP)及绿脓杆菌芳香硫酸酯酶(PAAS)为免疫原;兔抗血清用33%硫酸铵分级和DEAE-纤维素层析纯化得多抗。磁珠羧基活化后固定多抗;用对硝基酚显色底物,碱终止后测定405nm吸收增量反映酶活性;分析吸附响应曲线预测Vs。结果多抗磁珠吸附酶的容量约2.0mg/g磁珠。ECAP比活性超过PAAS比活性70倍。ECAP突变体R168K较野生型比活性提高约50%,用2.5μg多抗磁珠反应10min即可预测Vs识别此阳性突变体;用PAAS突变体G138S为起始酶,用10μg多抗磁珠测定吸附酶反应20min后吸收预测Vs,能识别活性提高20%以上的PAAS弱阳性突变体。结论只要被吸附酶活性能可靠测定,优化磁珠固定多抗的用量能预测低活性酶/突变体Vs进行比较识别阳性突变体。 |
| 关 键 词： | 多抗 突变体 最大吸附活性 预测 磁珠 |
Prediction of maximum absorption activities with polyclonal antibodies immobilized on magnetic submicron particles to recognize positive mutants |
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| Keywords: | |