| 人神经菌毛素-1基因重组腺病毒的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 郑见宝,耿智敏,陈 强,等.人神经菌毛素-1基因重组腺病毒的构建及鉴定[J].西安交通大学学报(医学版),2014(3):415-418. |
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| 作者姓名： | 郑见宝 耿智敏 陈 强 等 |
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| 作者单位： | ;1.西安交通大学医学院第一附属医院普通外科;2.西安交通大学医学院第一附属医院肝胆外科 |
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| 摘 要： | 目的构建含有人神经菌毛素-1(NRP-1)基因和3Flag标签蛋白基因的腺病毒载体,为研究该基因对肿瘤细胞与其周围间质细胞的相互作用的影响提供实验基础。方法应用AgeⅠ和NheⅠ限制性内切酶酶切含有人NRP-1基因的质粒,再将其与酶切线性化的pDC315-3Flag载体片段连接,构建穿梭质粒pDC315-NRP-1-3Flag;应用腺病毒骨架质粒pBHGlox△E13Cre与此穿梭质粒共转染HEK293细胞,产生重组腺病毒,进而对重组腺病毒进行扩增、纯化及滴度测定;用PCR和基因测序方法验证穿梭质粒pDC315-NRP-1-3Flag的构建;再通过荧光显微镜和Western blot方法,分别检测质粒pDC315-NRP-1-3Flag和重组腺病毒转染HEK293细胞后NRP-1蛋白的表达情况。结果经PCR和测序分析,证实穿梭质粒pDC315-NRP-1-3Flag与设计一致;穿梭质粒pDC315-NRP-1-3Flag和重组腺病毒分别转染HEK293细胞后,经Western Blot均检测出在95130ku处有条特征带,其大小和NRP-1-3Flag融合蛋白(104ku)相吻合;滴度测定为2.00E+11PFU/mL。结论成功构建了人NRP-1基因重组腺病毒载体,并能在HEK293细胞中表达。
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| 关 键 词： | NRP-1基因 重组腺病毒载体 肿瘤微环境 |
Construction and identification of recombinant adenovirus vector of human neuropilin-1 gene |
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