人胃癌细胞热耐受性与热休克蛋白70的关系

观察４１℃６０ｍｉｎ温热作用后人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３热耐受性和ＨＳＰ７０表达的变化。方法 ４１℃６０ｍｉｎ温热作用后不同时间，测定时间４３℃６０ｍｉｎ温热再作用的克隆形成率，并进行细胞ＨＳＰ７０免疫组化分析。结果：１．４０℃诱导后即时细胞已形成较高的热耐受性，４ｈ有所降低，８ｈ达到高峰。２４ｈ恢复近原有水平；２．ＢＧＣ－８２３细胞常温下表达少量ＨＳＰ７０，并且主要分布于胞浆内；４１℃诱导后即时Ｈ     

热休克蛋白与细胞周期调控

无论原核生物还是真核生物，对于外界环境突然改变，如热、射线、重金属、毒素等，均能引起热休克蛋白（heat shock proteins,HSP)合成增加，其他蛋白合成减少。ＨＳＰ是一组在进化上高度保守的蛋白质，约占细胞内蛋白质总量的２％－５％，存在于几科所有细胞内腔障中。根据分子量、诱导方式及功能，ＨＳＰ可分为ＨＳＰ１００、９０、７０、６０及小分子ＨＳＰ（sHSP）。ＨＳＰ作为细胞在生理条件下生存所必须，不仅在抵抗应激损伤和保护细胞中发挥重要作用，还参与几乎所有细胞生理过程：如细胞分裂，ＤＮＡ复制、转录、蛋白质运输、折叠、聚集、降解，维持细胞骨架及膜功能等。最近研究发现，ＨＳＰ与细胞周期也存在密切关系：如ＨＳＰ７０、ＨＳＰ９０与细胞周期调控有关，可能在细胞周期调控及其正常运转中发挥关键作用。本文旨在对ＨＳＰ与细胞周期关系的最新进展作一简要介绍。     

基因重组人HSC73在大肠杆菌中的表达和纯化

目的 用基因工程方法表达人的热休克类似蛋白７３（ＨＳＣ７３）并提纯ＨＳＣ７３蛋白,为研究该蛋白提供条件。方法 用人ＨＳＣ７３基因构建原核细胞表达载体ｐＥＴＨＳＣ７３,在大肠杆菌ＢＬ２１中用异丙基硫代－β－Ｄ半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达,ＡＴＰ亲和层析法提取ＨＳＣ７３。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、３．ａ．３抗体Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ作ＥＣＬ检测。结果 人ＨＳＣ７３基因构建的载体ｐＥＴＨＳＣ７３能很好地在大     

Zfhag的锌指结构和同结构域的基因重组、表达和功能研究

报道了成功地亚克隆Ｚｆｈａｇ的锌指结构和同结构域基因，并将其在细菌体内表达成麦芽糖结合蛋白的融合蛋白的方法和结果，使用这些表达蛋白进行了蛋白－ＤＮＡ相互作用的研究。结果表明：ＭＢＰ－ＺＤ１和ＭＢＰ－ＺＤ２蛋白能与糖蛋白激素的α亚基基因、鼠生长激素（γ－ＧＨ）基因和促甲状腺激素β亚基（ＴＳＨ－β）基因的甲状腺激素反应成分（ＴＲＥ）结合，而不能结合含有天然ＴＲＥ的ＭＨＣ和Ｆ２Ｈ基因，及含有合成ＴＲＥ的ＤＲ４和ＰＡＬ寡核苷酸。     

全脑缺血再灌注损伤后JUN蛋白在大鼠海马的表达及热休克预处理对其表达的影响

目的研究全脑缺血再灌注损伤后JUN蛋白在大鼠海马的表达及热休克预处理对其表达的影响。方法以四血管法建立全脑缺血再灌注模型。将大鼠置于42℃中15 min行热休克预处理,全脑缺血6 min后行2 h、6 h、12 h、24 h3、d、5 d再灌注后处死,取海马脑组织行HE染色、JUN蛋白免疫组化染色,TUNEL法检测凋亡细胞。结果缺血再灌注后2 h JUN蛋白在CA1区开始表达,6 h达到高峰,5 d时仍有表达;CA3区JUN蛋白的表达弱于CA1区(P<0.05);同时CA1区细胞损伤明显。热休克预处理组JUN蛋白表达在CA1和CA3区相应时点减弱(P<0.05),细胞损伤轻微,凋亡细胞减少(P<0.05)。结论全脑缺血再灌注损伤后JUN蛋白过度表达参与了神经元损伤过程,热休克预处理通过下调JUN蛋白过度表达具有脑保护作用。     

P~(53)蛋白和PCNA在恶性纤维组织细胞瘤中的表达与预后的关系

为探讨恶性纤维组织细胞瘤（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｆｉｂｒｏｕｓｈｉｓｔｉｏｃｙｔｏｍａ,ＭＦＨ）中Ｐ５３蛋白和增殖细胞核抗原（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ,ＰＣＮＡ）的表达强度与预后的关系,应用免疫组化ＬＳＡＢ法及彩色图像分析系统定量检测了４６例ＭＦＨ细胞中Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ的表达强度。结果显示ＭＦＨ的Ｐ５３蛋白与ＰＣＮＡ表达间呈正相关,Ｐ５３蛋白阳性表达组ＰＣＮＡ的表达强度高于Ｐ５３蛋白阴性表达组（Ｐ＜０．０５）。Ｐ５３蛋白表达阳性和ＰＣＮＡ表达强度值高组较Ｐ５３表达阴性和ＰＣＮＡ表达强度值低组的生存期短、肿瘤转移率高、组织学分级高（Ｐ＜０．０５）;肿瘤位置深在组Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ表达强度高于肿瘤位置浅表组（Ｐ＜０．０５）。结果提示定量检测ＭＦＨ的Ｐ５３蛋白和ＰＣＮＡ对于评估ＭＦＨ患者的预后具有较可靠的应用价值。     

热疗对膀胱癌细胞BIU-87/HCPT耐药相关基因的影响

目的观察热疗对耐羟基喜树碱膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT多药耐药的逆转作用,并探讨其逆转肿瘤多药耐药的机制。方法不同温度条件下热疗、化疗、热疗联合化疗处理耐药膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT后,用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、P-gp、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、谷胱甘肽硫-转移酶π(GST-π)和survivin表达的变化。结果热疗对BIU-87/HCPT细胞具有抑制作用,呈温度依赖性且在43℃时最强。热疗可显著增加羟基喜树碱对BIU-87/HCPT细胞的抑制率,作用呈温度依赖性,热疗明显增加化疗的作用。热疗联合化疗明显减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达并呈温度依赖性。结论热疗可促进膀胱癌细胞株BIU-87/HCPT凋亡,增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌细胞的耐药性,减少P-gp、MRP1、GST-π和survivin的表达。     

bcl-2基因蛋白在外阴营养不良及外阴癌的表达

利用细胞凋亡抑制基因ｂｃｌ－２单克隆抗体及免疫组化ＬＳＡＢ法,对正常外阴皮肤、慢性外阴营养不良、不典型增生和外阴癌组织进行标记,发现ｂｃｌ－２蛋白在正常外阴皮肤基底层中有弱阳性表达;在增生型营养不良、不典型增生及外阴癌组织中表达率有不同程度增高,与外阴硬化苔癣型和混合型营养不良有显著差异（Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）;而增生型与不典型增生ｂｃｌ－２基因蛋白表达无明显差异（Ｐ＞０．０５）;外阴癌的表达率最高;该基因蛋白表达与外阴癌细胞分化程度有关,与临床分期无关。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因表达对人肝癌细胞的生长抑制

使用转导有单纯疱疹Ⅰ型病毒胸苷激酶（ＨＳＶ１－ＴＫ）基因的人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞株建立了裸鼠移植瘤模型，并进行了在体和体外试验性无环鸟苷（ＡＣＶ）治疗。结果发现基因转导后的肝癌细胞表现出对ＡＣＶ的敏感性，肝癌细胞生长抑制与ＡＣＶ的剂量有关；用药组裸鼠除平均瘤重明显低于对照组外，还可见细胞核分裂指数降低，伴有细胞变性和坏死。结果表明：ＨＳＶ１－ＴＫ基因经逆转录病毒转导后，用ＡＣＶ诱导表达明显抑制了人肝癌细胞的生长。     

对苯二甲酰氯的纯度分析

１）用氯离子选择性电极测定活氯方法对对苯二甲酰氯进行了纯度分析,与熔点法,气相色谱法,示差扫描量热法（ＤＳＣ）比较对照,证明该法准确可靠,重复性好,简便,快速,易行;２）用ＤＳＣ考虑了高纯度对苯二甲酰氯的热行为,与文献（４）不同的是发现其在５９￣７０℃之间有２个小的吸热峰,通过热重分析（ＴＧＡ）,Ｘ－射线等确定了这２个峰为不可逆晶形转变峰,初步认为可作为纯度分析的依据。     

重组人突变型471TNF—α及野生型TNF—α表达及活性初步鉴定

目的 采用原核表达系统，表达人突变型471TNF－α蛋白，并检测其生物学活性。方法 采用PCR技术扩增突变型471TNF－α及野生型TNF－α cDNA片段，克隆入中间载体pUCm-T中，并测序证实。以限制性内切酶切下目的片段，克隆入pBV220中，转入大肠杆菌DH5α，温度诱导表达野生型及突变型471TNF－α蛋白。初步纯化蛋白后，采用MTT法评估两者对L929细胞的杀伤作用。结果 ①获得了测序正确的野生型TNF－α及突变型471TNF－α的cDNA克隆；②构建了正常人野生型TNF－α及突变型471TNF－α重组表达质粒；③经温度诱导，TNF－α及突变型471TNF－α蛋白均获得了表达；④初步的生物学活性研究表明，突变型471TNF-α蛋白的杀伤作用显著高于野生型。结论 突变型471-α的生物学活性优于野生型TNF－α，为进一步开展TNF－α的基础及临床研究奠定了基础。     

人足甲状腺激素受体的制备及其敏感性测定

探索一项简便、经济的提取人甲状腺促甲状腺激素受体－Ｇｓ蛋白－脾苷酸环化酶信息传递系统及检测ＴＳＨ受体敏感性的方法。方法用高速离心法，从低温保存的人甲状腺组织提取细胞膜蛋白ＴＳＨ受体及与之偶联的Ｇｓ蛋白－腺苷酸环化酶，以腺苷酸环化的活性反映ＴＳＨ受体与配基ＴＳＨ结合的敏感性。     

pSVL/GM-CSF真核表达质粒的构建及其表达活性观察

以真核瞬时表达质粒ｐＳＶＬ为载体构建ｐＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ真核表达质粒，用电穿孔法导入Ｃｏｓ－７细胞，以ＧＭ－ＣＳＦ依赖株ＴＦ１为靶细胞，检测其生物学活性；将不同剂量的ＰＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ质粒直接注射Ｂａ１ｂ／Ｃ小鼠股四头肌，动态观察小鼠血清中ＧＭ－ＣＳＦ的表达；将ｐＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ质粒导入Ｋ５６２细胞，观察ＧＭ－ＣＳＦ对瘤细胞生长状态的影响。结果表明：构建的ｐＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ真核表达质粒可在Ｃｏｓ－７细胞中有效表达ＧＭ－ＣＳＦ；小鼠骨骼肌直接注射ｐＳＶＬ／ＧＭ－ＣＳＦ（１００μｇ／及２００μｇ），在血清中可检出ＧＭ－ＣＳＦ，在１０～１５ｄ达高峰（８Ｕ／ｍｌ），为临床应用提供了实验基础；导入ＧＭ－ＣＳＦ基因的Ｋ５６２细胞可表达ＧＭ－ＣＳＦ，且经ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰的Ｋ５６２细胞增殖状态明显优于对照组，提示对造血细胞肿瘤单用ＧＭ－ＣＳＦ应慎重，而与其它细胞因子联合应用可能是一个合理的方案。     

用流式细胞测定仪测定AITD患者TRAb

以人工重组ＴＳＨ受体表达的中国仓鼠卵细胞（ＣＨＯ－ＴＳＨＲ）为靶细胞,用流式细胞（ＦＡＣＳ）测定技术,对４５例自身免疫性甲状腺病（ＡＩＴＤ）患者血清中ＳＨ受体抗体（ＴＲＡｂ）进行测定。结果显示：３６例ＧＤ患者阳性细胞结合的百分数为１．９％～７７．４％。阳性率为９１．６６％。其均值２６．１３９％与正常人均值６．１６３％相比有显著性差异（Ｐ＝０．０００１）。９例桥本（ＨＴ）甲减患者５例阳性,阳性率为５５．５６％。证实以ＣＨＯ－ＴＳＨＲ细胞为靶细胞用ＦＡＣＳ进行ＴＲＡｂ汕测定不失为一种敏感简便的新方法。     

两组全麻用药对手术病人血浆CGRP,ET的影响

目的 通过检测血浆ＥＴ、ＣＧＲＰ，观察不同全麻用药对机体内环境的影响。方法 ２４例上腹部手术病人，ＡＳＡⅠ～Ⅱ，随机分为两组，异丙酚组（Ｐ组）１２例和硫贲妥钠级Ｓ组）１２例：采用放免法测定诱导前、插管后、术中、术毕时的血浆ＥＴ、ＣＧＲＰ、ＡＣＴＨ值。结果 Ｓ组ＥＴ在插管后和术毕均较诱导前显著下降（Ｐ〈０．０１），ＣＧＲＰ在插管后、术中、术毕三个点都较诱导前显著性升高（Ｐ〈０．０５），Ｓ组和Ｐ组ＡＣ     

人颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达导致HeLa细胞凋亡

目的　观察诱导表达的颗粒酶B融合蛋白对HeLa细胞形态和生长的作用。方法　用重组PCR法将活性型颗粒酶B基因序列的 5’端连接绿脓杆菌外毒素 (PE)的部分转位肽编码序列。所获融合蛋白基因克隆入pIND诱导表达载体后 ,与辅助质粒pVgRXR共转染HeLa细胞 ,经G4 18和zeocin筛选建系。间接免疫荧光检测蜕皮激素诱导后目的蛋白的表达 ,并通过电镜、TUNEL染色、细胞计数等方法观察细胞的形态和生长速度的变化。结果　建立了可诱导表达人颗粒酶B融合蛋白基因的HeLa细胞系。蜕皮激素诱导后检测到目的蛋白的表达 ,同时观察到细胞出现多核巨细胞的异常形态 ,细胞生长受到抑制。电镜和TUNEL分析表明 ,颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达使部分细胞呈现凋亡的典型特征。结论　颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达导致HeLa细胞凋亡     

轫致辐射显像的实验研究

以一个内含３７ＭＢｑ／１０ｍｌ３２Ｐ胶体的玻璃圆盘作为实验模型，用ＮＥ８９００型γ相机及ＳＯ－ＰＨＹＤＳ７ＳＰＥＣＴ系统在不同条件下进行显像，结果发现轫致辐射最大光子分布在７０ｋｅｖ。γ相机以中能准直器、ＳＰＥＣＴ以高能准直器，能量范围及窗宽分别置于７０ｋｅｖ－６０％或８０ｋｅｖ－６０％，准直器与源间距离较短时显像，所获影像清晰，对比度好。动物实验显像效果满意。表明现有核医学成像仪器可用作轫致辐射显像。     

用表达重组TSH受体的CHO细胞测定Graves'甲亢病人血清中的TSAb

用表达重组人ＴＳＨ受体的中国仓鼠卵细胞（Ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙｃｅｌ,ＣＨＯ）细胞代替传统的ＦＲＴＬ－５细胞测定Ｇｒａｖｅｓ甲亢病人的血清甲状腺刺激抗体（ＴｈｙｒｏｉｄＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｙ,ＴＳＡｂ）水平,方法相对简单,特异性强,敏感性高,未治疗的Ｇｒａｖｅｓ病人９２．７％阳性,治疗后迅速下降,恢复期的阳性率为３５％,该方法对Ｇｒａｖｅｓ甲亢的诊断、治疗后效果的判断有重要意义。     

人白细胞介素18cDNA的克隆及序列测定

获取人ＩＬ－１８ｃＤＮ克隆。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人外周血单个核细胞中获取人ＩＬ－１８ｃＤＮＡ，将其克隆至天然蛋白表达载体ＰＢＶ２２０中，并进一步亚克隆至融合蛋白表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，对其进行酶切分析及序列测定。结果测序结果表明克隆至ＰＢＶ２２０中的ＩＬ－１８ｃＤＮＡ包含成熟ＩＬ－１８蛋白的全部编码序列，酶切分析表明一约４７０ｂｐ的基因片段克隆至ＰＧＥＸ－４Ｔ－３中，与理论预计的一致。结     

结构陶瓷的抗热震性能研究

通过一系列陶瓷材料的抗热冲击性能实验，证明添加ｗ（ＺｒＯ２）＝２０％可使Ａｌ２Ｏ３复合陶瓷的热震温度达到３１０℃；如果添加ｗ（ＳｉＣｗ）＝２０％可使Ａｌ２Ｏ３复合材料的热震温度达到４３０℃，使Ｓｉ３Ｎ４复合材料的热震温度达到６５０℃；如果采用ｗ（ＳｉＣｗ）＝２０％，同时添加Ａｌ２Ｏ３，Ｙ２Ｏ３等烧结助剂，由于强化晶界的作用，可使Ｓｉ３Ｎ４复合材料的热震温度达到７００￣７５０℃，还对各添加剂使陶瓷材