胎儿SRY基因用于产前诊断的初步研究

采用ＰＣＲ技术，对５０例胎儿组织ＤＮＡ进行了Ｙ染色体特异的ＳＲＹ基因扩增。扩增片段长度为２５０ｂｐ。结果显示：３２例早孕绒毛ＤＮＡ中，有１７例扩增出特异性片段．１５例未扩增出特异性片段，有、无特异性片段比例为１．１３３：１，接近胎儿自然出生性别之比；１８例中孕引产胎盘ＤＮＡ中８例阳性，１０例阴性，与引产胎儿实际性别完全一致。因ＰＣＲ扩增胎儿ＳＲＹ基因特异性强、灵敏度高，可用于早期胎儿性别的产前诊断。     

聚合酶链反应检测弓形虫核酸的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，设计了一对寡核苷酸引物，对弓形虫Ｂ１基因的保守序列进行体外扩增，显示该引物只对弓形虫核酸扩增，可对４个或４个以上弓形虫扩增出明显条带，检测弓形虫核酸的最低量为２．５ｐｇ。该ＰＣＲ对急性感染弓形虫的小鼠，于４８ｈ后就可从部分小鼠（２／５）的外周血中检测到弓形虫核酸，９６ｈ后全部小鼠（５／５）外周血中均检测到弓形虫核酸，而感染２４ｈ后可从其肝、脾、肾等组织中扩增到弓形虫核酸。对３４例孕妇外周血分别用ＥＬＩＳＡ及ＰＣＲ平行检测，ＥＬＩＳＡ测ＩｇＭ阳性者３例，ＰＣＲ扩增阳性者６例（其中３例ＩｇＭ亦阳性），表明ＰＣＲ具有较高的敏感性和特异性。     

自人脑胶质瘤cDNA文库克隆与鼠SH2—B同源基因片段

自人脑胶质瘤文库克隆新的表达序列标签。方法以人脑胶质瘤文库为模板,利用生长休止特异基因的５’特异引物与载体特异引物组合进行ＰＣＲ扩增,对目的片段进一步克隆,测序。结果扩增出一个３２８ｂｐ的片段,同源性分析发现该片段与鼠ＳＨ２－Ｂ有８６％的同源性。     

阴道超声扫描对多囊卵巢综合征的诊断价值

对比２２例多囊卵巢综合征（ＰＣＯＳ）妇女经腹部及阴道超声扫描卵巢的声像图，以评价阴道超声对ＰＣＯＳ的诊断价值。结果表明：用阴道超声比腹部超声更易探及卵巢髓质回声异常及多囊改变（卵巢髓质回声异常分别为６８．１％及９．１％，Ｐ＜０．０１）；多囊改变分别为７７．３％及４０．９％，Ｐ＜０．０５）。提示使用阴道超声诊断ＰＣＯＳ其敏感性及准确性明显优于腹部超声。     

PCR法检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA

采用ＰＣＲ法检测了７７例乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶＤＮＡ，２７例阳性，总阳性率为３５．１％。慢性活动性肝炎（９／２１，４２．９％），肝炎后肝硬化（９／１９，４７．４％）及重型肝炎（８／１６，５０．０％）患者ＰＢＭＣＨＢＶＤＮＡ阳性率明显高于慢迁肝（１／１４，７．１％）和急肝（０／７）患者。结果提示ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ的存在在乙肝发病机理中具有一定意义。     

用PCR法检测胸液中结核杆菌DNA

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３２例结核性渗出性胸膜炎和２０例非结核性疾病患者胸液中结核杆菌的６５ＫＤａ抗原蛋白编码基因的特异ＤＮＡ片段。结果表明，其检出率为７８．１３％，并具高度特异性。提示ＰＣＲ扩增ＤＮＡ技术对结核性渗出性胸膜炎是高度敏感和特异的早期、快速诊断方法。     

散发性帕金森病α—synuclein基因突变的检测

目的 探讨α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ基因右突变与散发性帕金森病人的关系。方法 分离ＰＤ组和对照组的外围血基因组ＤＮＡ，采用α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎｘ基因特异引物对其第四外显子进行ＰＣＲ扩增，扩增产物用Ｔｓｐ４５Ⅰ酶切鉴定。结果 两组ＰＣＲ均可扩增出２１６ｂｐ的片段，ＰＣＲ产物不能被Ｔｓｐ４５Ⅰ酶切。结论α－ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ基因已知点突变与散发性帕金森病可能无明确关系。     

血清中结核菌DNA的PCR扩增及其意义

血清中结核菌ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增及其意义王香玲，李妙羡，何谦，田增爵（西安第二附属医院检验科西安７１０００４）近年来应用ＰＣＲ技术诊断结核病的报道越来越多，但用血清作为标准来源较少，为此我们对临床确诊的６３例结核病患者的血清用ＰＣＲ技术扩增其结核菌特异...     

超声心动图产前诊断胎儿心血管畸形的临床分析

为了在产前能够诊断胎儿心血管发育异常，评估其超声诊断价值，我们联合应用Ｍ型及二维超声心动图对孕１６周以上的孕妇３１０例进行产前检查，其检出先天性心脏病胎儿１１例，经引产尸解及生后随访证实。并发现从有高危因素的孕妇中检出率（５．５％）明显高于无高危因素的孕妇（０．７％），两组检出率有显著差异（Ｐ＜０．０５）。本文认为对具有高危因素的孕妇产前应用超声心动图检查胎儿心脏，诊断胎儿心血管发育异常有重要的实用价值。     

套式RT-PCR检测肾综合征出血热病毒方法的建立及应用

针对汉坦病毒（Ｈａｎｔａｎｖｉｒｕｓ,ＨＶ）中国代表株（Ａ９、Ｒ２２）Ｍ基因片段设计分型引物（Ⅰ、Ⅱ型）,采用改进的异硫氰酸胍酚一步法（胍酚法）提取汉坦病毒ＲＮＡ,套式ＲＴ－ＰＣＲ检测稀释病毒上清,模拟病人血清和２０例急性期（１～７ｄ）血清样本。结果：能检测到模拟血清中少至几个ＰＦＵ病毒ＲＮＡ,敏感性５～１０ｆｇ。检测过程可在５ｈ内完成。２０例急性期患者血清检测阳性率为１００％,并能进行临床分型。扩增产物经打点杂交证实其特异性。而正常及非ＨＦＲＳ患者血清结果均为阴性。提示：套式ＲＴ－ＰＣＲ基因诊断技术优于传统的ＭａｃＥＬＩＳＡ、ＩＦＡＴ和ＲＰＨＩ诊断法。     

一种新的孕早期诊断母儿血型不合方法—绒毛血型物质测定

ABO系统母儿血型不合是我国引起新生儿溶血病的主要原因。为了在孕早期对可疑母儿血型不合的胎儿血型作出产前诊断,我们用吸收放散法测定了40例孕6～12周绒毛组织的血型物质,同时测定了其父母血型,40例标本的血型物质与其父母血型按遗传规律所可有的子女的血型相符。20例标本曾重复测定,两次测定结果均一致。这一方法提示可经宫颈吸取微量绒毛测定血型物质以鉴定胎儿ABO血型,为孕早期产前诊断母儿血型不合提供了一种新的途径。     

3例嵌合型Turner综合征的分子遗传学分析

3例嵌合型Turner综合征,除45,X细胞系外,还含有第二个细胞群46,X+mar。PCR分析证实,标记染色体为异常Y染色体,对此异常Y染色体进一步研究表明,存在睾丸决定因子(TDF)基因SRY,而Y长臂末端高度串联重复序列DYZ1发生了缺失。本文还讨论了该病的分子病因和人类性别决定机制。     

米非司酮对早孕绒毛组织EGFR、C-myc蛋白表达的影响

目的　观察米非司酮对早孕绒毛组织表皮生长因子受体 (EGFR)、C myc蛋白表达的影响 ,探讨米非司酮的作用机制。方法　采用免疫组织化学SP法 ,对 30例人工流产早孕妇女和 30例服用米非司酮药物流产的早孕妇女的绒毛组织EGFR、C myc蛋白的表达进行检测。 结果　EGFR在药物流产组的表达强度较人工流产组为弱 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。C myc蛋白在药物流产组与人工流产组的表达强度无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　米非司酮可能通过抑制早孕绒毛组织EGFR的表达 ,促使妊娠终止。     

孕早期绒毛膜GLOI多态性研究及西安地区298例GLOI分型调查

用淀粉/琼脂糖混合凝胶平板电泳法对42例孕早期绒毛膜及其父母血液的乙二醛酶Ⅰ(Glyoxalase Ⅰ)多态性进行了研究。同时对西安地区298例献血员红细胞GLOI进行了分型调查。42例绒毛膜中38例显示出GLOI的三种普通表型:GLOI 1—1型、GLOI 2—1型、GLOI 2—2型,其酶活性与血液无明显差异,其余4例经反复电泳,未能显示出GLOI活性区带。西安地区GLOI的三个普通表型分布为:GLOI 1—1型4.36％、GLOI 2—1型27.85％、GLOI型2—2型67.79％,其基因频率为GLOI~1=0.1828,GLOI~2=0.8172,识别能力(DP)值为0.4610。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-3与胎儿宫内生长迟缓的关系

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)与胎儿宫内生长的关系,及其在胎儿宫内生长迟缓(IUGR)发病中的作用,从而对IUGR的病因作进一步的探讨。方法 选取20例分娩IUGR儿、10例分娩巨大儿及20例正常产妇,分娩后抽取母静脉血及脐静脉血,分离血清(各组产妇均无产科及内外科合并症)。用免疫放射法测定血清中IGFBP-3的浓度。结果 ①母血IGFBP-3浓度显著高于脐血(P＜0..01),且二者之间无相关关系(r=-0.18,P＞0.05)。②脐血中IGFBP-3浓度在IUGR组显著低于对照组(P＜0..01),但巨大儿组与对照组之间无显著差别(P＞0..05),脐血IGFBP-3的浓度与新生儿出生体重及胎盘重量呈正相关关系(r=0.63,r=0.48,P均＜0..01)。③各组母血中IGFBP-3浓度无明显差别(P＞0..05)。结论 ①母血及脐血IGFBP-3的来源不同,母血中的IGFBP-3不能通过胎盘屏障。②胎儿自身分泌的IGFBP-3与胎儿生长关系密切,其浓度降低可能是导致IUGR的重要原因之一。     

ATP结合体转运子基因单核苷酸多态性与脑梗死的相关性

目的探讨高密度脂蛋白代谢相关基因ATP结合体转运子(ABCA1)单核苷酸多态性与脑梗死发病的关系。方法调查经CT确诊的脑梗死患者96例,男76例,女20例,平均年龄(59±10)岁;健康对照组90例,男48例,女42例,平均年龄(55±11)岁。提取外周血白细胞全基因组DNA。以聚合酶链式反应(PCR)、限制性片段长度多态性(RFLP)结合测序的方法检测ABCA1 596G→A单核苷酸多态性(SNP)。结果脑梗死及对照组ABCA1-A与G等位基因频率分别为66.1%、33.9%及51.7%和48.3%,两组间等位基因频率分布存在显著性差异(2χ=8.99,P<0.05)。AA基因型与脑梗死发病率增高有关(RR=2.68,95%CI1.5-3.6,P<0.05)。血脂分析提示等位基因A携带者血浆HDL胆固醇水平明显低于等位基因G携带者(1.1±0.3vs.1.3±0.4,P=0.009),而甘油三酯明显升高(2.1±1.2vs.1.8±1.2,P=0.027)。结论ABCA1基因596G→A变异明显会增加脑梗死发病的危险性,其致病机制可能与G→A变异导致HDL降低及TG升高有关。     

脐血胰岛素样生长因子-2和印记基因H19与胎儿生长受限的关系

目的探讨脐血胰岛素样生长因子-2(IGF-2)和H19印记状态与胎儿生长受限(FGR)的关系。方法采用放射免疫法测定42例FGR孕妇(研究组)和晚期正常妊娠妇女30例(对照组)脐血中IGF-2水平,同时采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术,检测胎盘组织中H19基因印记状态。结果①研究组脐血IGF-2水平为(1.52±0.20)μg/L,明显低于对照组的(1.97±0.21)μg/L(P<0.05)。②研究组中杂合子20例,其中9例双等位基因表达;对照组中杂合子14例,均为单等位基因表达;研究组H19基因印记丢失明显高于对照组(P<0.05)。③研究组H19双等位基因表达的病例脐血IGF-2水平均明显低于H19杂合性丢失和H19单等位基因表达病例(P<0.05);H19杂合性丢失和H19单等位基因表达病例脐血IGF-2水平无显著性差异。结论妊娠晚期IGF-2减低是导致FGR发生的原因之一;H19基因印记丢失下调IGF-2基因间接影响胎儿生长发育。     

流动注射-光度法测定亚硝酸盐

为快速测定微量亚硝酸盐,建立了一种新的测定亚硝酸盐的方法--流动注射-催化光度法.该方法结合流动注射技术,以亚硝酸盐对氯酸钠与亚甲基蓝发生的褪色反应有催化作用的研究结果为基础.最优试验条件下,在5～150 μg/L和150～1 000 μg/L范围内吸光强度与NO_2~-的质量浓度呈良好的线性关系,该方法的检出限为1 μg/L.对质量浓度为10和100 μg/L的NO_2~-分别进行了11次连续测定,相对标准偏差分别为3.1%和4.6%.用此方法检测河水和地下水水样中的亚硝酸盐,标准偏差为1.1%～3.4%,加标回收率为97.6%～100.3%.     

以孕妇血清PAPP-A及其它妊娠蛋白为指标筛查异常胎儿

测定629例妊娠5～40周孕妇血清妊娠相关血浆蛋白A（PAPP－A）、甲胎蛋白（AFP）和人绒毛膜促性腺激素β亚基（β-hCG）。结果发现：无脑儿孕妇血清PAPP－A水平在妊娠早、中期均明显降低；在妊娠早、中期，胎儿21三体孕妇血清PAPP-A和AFP水平均下降，β-hCG水平升高。胚胎死亡和宫内死胎孕妇血清PAPP－A和β-hCG水平降低。提示此三种妊娠蛋白可在妊娠中期尤其是在妊娠早期作为筛查胎儿异常的重要指标，特别是对胎儿染色体异常和神经管缺陷（NTDs）的筛查。