丹参酮ⅡA对人结肠癌HT29细胞TGF-β1、Bcl-2表达和细胞生长的影响

目的观察丹参酮ⅡA对人结肠癌细胞HT29生长及其对转化生长因子β1(TGF-β1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)基因表达的影响,为结肠癌治疗提供理论基础。方法分别采用不同浓度的丹参酮ⅡA处理人结肠癌HT29细胞,MTT法检测细胞生长情况;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测不同处理组所收集细胞TGF-β1和Bcl-2 mRNA表达;小鼠腋下接种HT29细胞制备小鼠结肠癌移植瘤模型,随机分为对照组和丹参酮ⅡA处理组,每周测量肿瘤体积1次,4周后摘取肿瘤称重并保存肿瘤;Western blot检测提取自HT29细胞和肿瘤组织内TGF-β1、Bcl-2蛋白表达。结果随着丹参酮ⅡA浓度升高,HT29生长抑制率增加;丹参酮ⅡA浓度增加对TGF-β1和Bcl-2 mRNA及蛋白表达产生抑制作用;丹参酮ⅡA对小鼠结肠癌移植瘤的体积抑制率为28.63%;Western blot结果表明,与对照组比较,丹参酮ⅡA组肿瘤体积内TGF-β1、Bcl-2蛋白水平降低。结论丹参酮ⅡA对结肠癌细胞HT29及其裸鼠模型移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与丹参酮ⅡA下调TGF-β1和Bcl-2表达有关。     

竹叶提取物通过调控Akt/HIF-1α通路抑制低氧条件下人乳腺癌MCF-7细胞的恶性生长

目的探究竹叶提取物对低氧条件下人乳腺癌MCF-7细胞恶性生长的影响及分子机制。方法将培养的人乳腺癌MCF-7细胞随机分为正常组、低氧组以及0.2、0.4、0.8μg/mL竹叶提取物组和0.8μg/mL竹叶提取物组+IGF-1组。CCK-8法检测各组细胞的增殖活性变化,RT-PCR和Western blot检测细胞增殖标记蛋白PCNA、Ki-67和MCM2表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和survivin表达;并探讨Akt/HIF-1α通路在竹叶提取物抑制癌细胞生长中的作用。结果竹叶提取物处理后,低氧下MCF-7细胞的增殖活性和PCNA、Ki-67和MCM2的表达显著性降低并呈现剂量依赖性(P<0.01);而细胞G2/M期比例增加(P<0.01);此外,竹叶提取物处理后细胞凋亡率明显增加,同时Bax和caspase-3表达上调,Bcl-2和survivin表达下调(P<0.01);此外,竹叶提取物组Akt/HIF-1α通路中p-Akt和HIF-1α的表达下调(P<0.01),Akt/HIF-1α通路激动剂IGF-1可逆转竹叶提取物对低氧下MCF-7恶性生长的抑制作用。结论竹叶提取物可通过下调Akt/HIF-1α信号通路抑制低氧条件下人乳腺癌MCF-7细胞恶性生长。     

白藜芦醇对胰腺癌Miapaca-2细胞侵袭转移能力影响的体外观察

目的体外观察白藜芦醇(Res)对人胰腺癌Miapaca-2细胞侵袭转移能力的影响。方法将3种不同浓度(200、100、50μmol/L)的Res分别作用于体外常规培养人胰腺癌Miapaca-2细胞,通过黏附、侵袭及迁移实验,观察Res对人胰腺癌Miapaca-2细胞侵袭转移能力的影响;同时应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法观察其对侵袭转移相关因子MMP-7和MMP-9mRNA及蛋白水平表达的影响。结果 3个浓度组Res对人胰腺癌Miapaca-2细胞的粘附、侵袭及迁移呈现明显抑制作用,呈浓度效应关系,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);3个浓度组Res对人胰腺癌Miapaca-2细胞MMP-7和MMP-9蛋白及mRNA表达水平明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01),并呈浓度效应关系。结论 Res在体外可明显抑制胰腺癌Miapaca-2细胞的侵袭转移,其抑制能力与药物浓度呈正相关,作用机制可能与下调侵袭转移相关基因MMP-7和MMP-9的表达有关。     

虎杖提取物白藜芦醇的抗白血病作用及其可能的分子机制

目的探讨白藜芦醇在体外对白血病细胞的抑制作用及其分子机制。方法MTT比色法测定细胞生长抑制率;流式细胞术、HE染色、激光共聚焦显微镜等方法观察各组白血病细胞的细胞周期与细胞凋亡情况;Western Blot-ting法测定细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平;免疫组织化学法测定白血病细胞信号转导分子p-STAT3的活性表达。结果白藜芦醇可以时间-剂量依赖的方式抑制3种白血病细胞增殖、诱导凋亡、影响细胞周期分布、减弱STAT3的酪氨酸磷酸化活性。结论白藜芦醇对不同来源的白血病细胞均具有较强的抗肿瘤活性,显著减少STAT3的酪氨酸磷酸化活性,为其进一步应用于白血病的临床治疗积累了实验依据。     

Sox2通过Wnt信号通路对宫颈癌侵袭及迁移能力的影响

目的探讨干细胞转录因子Sox2对宫颈鳞癌SiHa细胞侵袭及迁移能力的影响及其机制。方法采用RTPCR及Western blot方法分别检测本实验前期构建的稳定高表达Sox2的SiHa-Sox2细胞及对照组SiHa-EGFP细胞中Sox2的表达情况;细胞划痕实验及Transwell小室实验观察Sox2对SiHa细胞侵袭及迁移能力的影响;Western blot检测两组细胞中Wnt信号通路关键基因β-catenin的表达情况。结果稳定表达Sox2的SiHa-Sox2细胞中Sox2的mRNA及蛋白表达均明显增加;SiHa-Sox2组细胞侵袭及迁移能力增强;Western blot检测结果显示β-catenin表达上调。结论 Sox2通过上调β-catenin的表达激活Wnt信号通路,使宫颈鳞癌SiHa细胞的侵袭及迁移能力增强,从而促进宫颈鳞癌的发生发展。     

TTF-1启动子调控miR-7表达对人肺癌95D细胞体外凋亡的影响

目的观察甲状腺转录因子-1(TTF-1)启动子调控miR-7表达对人肺癌细胞体外凋亡的影响,并探讨其意义。方法将前期构建的TTF-1启动子调控miR-7真核表达载体(命名为p-T-miR-7)与对照载体p-cont分别体外瞬时转染人肺癌95D细胞,采用FCM法检测95D细胞凋亡比例;TUNEL法检测95D细胞凋亡情况;Western blot检测各组中磷酸化Caspase3和磷酸化Caspase9的蛋白的表达;共聚焦显微技术检测miR-7靶分子CGGBP1和EGFR蛋白的表达;最后,采用Western blot检测各组中磷酸化Akt和Erk蛋白的表达。结果体外转染48h后,与p-cont转染组相比,转染p-T-miR-7组细胞凋亡比例明显增加(P<0.05);磷酸化Caspase3和磷酸化Caspase9蛋白水平均显著增加(P<0.05),同时EGFR和CGGBP1蛋白表达均明显降低,且细胞中磷酸化Akt和Erk蛋白水平亦显著降低(P<0.05)。结论 TTF-1启动子调控miR-7表达可导致人肺癌细胞的凋亡。这为后续基于miR-7的人肺癌基因靶向治疗策略的开发提供了前期实验依据。     

JAK激酶抑制剂AG490阻滞乳腺癌MCF-7的侵袭和迁移

目的 探讨JAK/STAT3和MAPK/ERK1/2两条信号通路的交联作用及其对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移的影响机制.方法 在乳腺癌MCF-7中,分JAK酶抑制剂AG490未处理组和处理组,Western blot检测磷酸化和非磷酸化STAT3和ERK 1/2蛋白的变化,RT-PCR检测STAT3、ERK1/2 mRNA的变化,明胶酶谱法检测MCF-7分泌MMP-2、MMP-9的变化,同时应用Transwell小室对细胞侵袭迁移能力进行研究.结果 AG490处理MCF-7细胞后,磷酸化和非磷酸化STAT3和ERK1/2蛋白均减少,STAT3、ERK1/2 mRNA转录水平也下降,同时也观察到了AG490能使MCF-7分泌MMP-2和MMP-9减少,从而显著降低了MCF-7细胞的侵袭迁移能力.结论 AG490可阻断JAK/STAT3和MAPK/ERK1/2两条信号通路,抑制MCF-7细胞分泌MMP-2和MMP-9,从而抑制了其侵袭迁移.     

靶向沉默Notch1基因对胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭的影响

目的探讨靶向沉默Notch1基因对人胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭作用的影响及可能机制。方法通过小干扰RNA转染胃癌细胞SGC-7901,以未转染细胞为正常对照组,转染siRNA Control为阴性对照组,RT-PCR法检测靶向沉默Notch1基因的效果,MTT法检测各组SGC-7901细胞的增殖能力,Transwell小室侵袭试验检测各组SGC-7901细胞的侵袭能力,Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin A1和CDK2蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2和COX-2mRNA的表达水平。结果靶向沉默Notch1基因可明显抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,干扰24h后与正常对照组或阴性对照组比较差异有统计学意义。靶向沉默Notch1基因明显下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1和Cyclin A1,但对CDK2无影响。靶向沉默Notch1基因明显抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭能力,同时明显下调MMP-2和COX mRNA的水平。结论靶向沉默Notch1基因可抑制胃癌细胞SGC-7901增殖和侵袭,可能与其抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin A1和侵袭相关分子MMP-2和COX-2有关。     

EZH2抑制剂对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨EZH2(enhancer of zeste homolog 2)抑制剂对宫颈癌HeLa细胞增殖与转移能力的抑制作用。方法将EZH2抑制剂GSK343作用于体外培养的人宫颈癌HeLa细胞,用MTT及克隆形成率实验检测细胞生长和增殖的变化,细胞划痕实验测定细胞迁移能力的变化,Western blot检测上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达;同时以等体积GSK343溶剂DMSO为对照。结果 MTT结果显示,GSK343对HeLa细胞的生长具有明显抑制作用,呈时间依赖性;克隆形成和细胞划痕实验显示,GSK343能显著抑制HeLa细胞的增殖及迁移能力;Western blot结果显示,GSK343处理后细胞上皮标志蛋白E-cadherin表达明显增高,间质标志蛋白N-cadherin表达明显减低。结论 EZH2抑制剂GSK343可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖与迁移,其机制之一可能是通过抑制HeLa细胞上皮间质转化过程来实现的。     

紫杉醇脂质体对乳腺癌细胞SK-BR-3的放疗增敏作用及其机制

目的探索紫杉醇脂质体(力扑素)对乳腺癌细胞株SK-BR-3是否具有放疗增敏作用及其放疗增敏机制。方法利用MTT法检测放疗组、单药紫杉醇脂质体(以下简称单药组)及紫杉醇脂质体联合放疗(以下简称联合组)在不同时间对乳腺癌细胞SK-BR-3的生长抑制作用。利用流式细胞仪检测放疗组、单药组及联合组对细胞周期及凋亡的影响。利用Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax在不同处理组中的表达,探索紫杉醇脂质体放疗增敏作用的机制。结果 MTT结果显示放疗组、单药组及联合组均具有细胞生长抑制作用,与细胞对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而且联合组较单药及放疗组具有更显著的细胞生长抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡结果显示放疗组、单药组及联合组凋亡细胞均明显增加,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),并且联合组在细胞周期中均出现了明显的凋亡峰;Western blot结果显示,促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达在放疗组、单药组和联合组中均升高,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),并且联合组升高较放疗组及单药组更为显著,差异具有统计学意义(P<0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达在放疗组、单药组及联合组均减低,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),而联合组较放疗组及单药组降低更明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论紫杉醇脂质体具有明显的放疗增敏作用,并且可能通过调控凋亡相关蛋白的表达引起细胞凋亡来发挥其放疗增敏作用。