HPLC法测定健宝胶囊中淫羊藿苷含量

目的　建立健宝胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法　采用高效液相色谱法 ,色谱柱为C18(15 0mm×4.6mm) ,流动相为乙腈 0 .0 75mol·L-1磷酸溶液 (2 5∶75 ) ,流速 1.0mL·min-1,检测波长为 2 70nm。结果　淫羊藿苷进样量在 0 .0 6～ 0 .30 μm范围内 ,线性关系良好 (r=0 .9991) ,方法回收率为 98.5 0 %(n =5 ,RSD =1.2 0 %)。结论　本方法准确、简便、快速 ,适合于该药的质量分析检验。     

健脾补血片中阿魏酸的质量浓度测定

目的建立健脾补血片中阿魏酸的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法采用HPLC法。色谱柱Lichrospher C18(4.6 mm×250 mm,5μm),C18保护柱;流动相:乙腈-0.378 mol/L冰醋酸水溶液(30∶70);检测波长321 nm;流速0.8 mL/min;柱温:室温;进样量10μL。结果阿魏酸质量浓度在1.0-10.0 mg/L范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9996),平均回收率为99.8%,RSD为0.26%。结论HPLC可用于健脾补血片中阿魏酸的质量浓度测定。     

治带片中苦参碱及氧化苦参碱的HPLC法测定

目的建立治带片中苦参碱及氧化苦参碱的高效液相色谱(HPLC)测定方法。方法色谱柱:Lichrospher-NH2(4.6 mm×250 mm,5μm),C18保护柱;流动相:乙腈-无水乙醇-0.5 mol/L磷酸水溶液(80∶10∶10);检测波长212 nm;流速1.0 mL/min;柱温:室温;进样量20μL。结果苦参碱和氧化苦参碱线性范围均为1.0-10.0μg/mL,回归方程苦参碱为:C=1.201×10-4A+0.161,r=0.9992;氧化苦参碱为:C=1.366×10-4A+0.221,r=0.9996,平均回收率分别为99.9%和99.4%,RSD分别为1.48%和4.33%。结论本法简便快捷,结果准确,可用于该制剂的质量控制。     

淫羊藿提取物的雌激素样作用研究

目的 评价淫羊藿提取物的雌激素样作用.方法 采用小鼠子宫增重实验、雌激素受体阳性细胞系(MCF-7)细胞增殖及拮抗实验,评价淫羊藿及淫羊藿苷的雌激素样作用及其可能机制.结果 与阴性对照组比较,淫羊藿及淫羊藿苷能使子宫系数由0.097±0.008明显增加至0.156±0.018及0.152±0.016,且用药前、后动物体重由(18.9±1.3)g分别增至(19.8±1.3)g及(20.03±1.3)g,增幅明显高于阴性对照组(P<0.05);淫羊藿苷可使血清雌激素E2由(132.22±11.45)ng/L增高至(147.73±12.43)ng/L,FSH水平由(50.15±3.36)μg/L降低至(44.47±2.46)μg/L(P<0.05),但淫羊藿组雌激素E2水平无明显改变;在24、48、72 h,淫羊藿及淫羊藿苷对MCF-7细胞的增殖均有明显的促进作用(P<0.05),分别由0.238±0.043、0.387±0.051、0.563±0.083增至0.362±0.045、0.521±0.046、0.648±0.043及0.324±0.043、0.465±0.034、0.622±0.079;72 h加入ICI后,细胞增殖明显受到抑制,细胞增值率分别降至99.461%、94.434%.结论 淫羊藿及淫羊藿苷具有雌激素样作用,且其促细胞增殖作用可能是通过雌激素受体(ER)介导产生的.     

高效液相色谱法测定舒肤胶囊中芍药苷的含量

目的采用HPLC法对处方中主要成分芍药苷进行含量测定。方法采用高效液相色谱法,以KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,流动相为乙腈-1.5 mL/L磷酸(12∶88),流速1 mL/min,检测波长230 nm,柱温为室温。结果芍药苷回归方程:Y=83 168X+72 569(r=0.999 5,n=6),芍药苷在0.06~0.18μg范围内线性关系良好;方法的平均回收率为100.21%,精密度RSD的值为1.31%。结论本方法操作简便、快速、准确、灵敏,适用于舒肤胶囊的质量控制。     

局部注射淫羊藿苷对大鼠正畸致炎性牙根吸收的影响

目的了解局部使用淫羊藿苷对正畸致炎性牙根吸收的影响。方法建立大鼠正畸牙移动模型,分别注射200mg/kg的淫羊藿苷(淫羊藿苷组)或生理盐水(阳性对照组),左侧上颌为阴性对照组。通过SEM、HE及TRAP染色,观察牙根表面的吸收陷窝,并计算吸收陷窝率和TRAP阳性细胞数。结果淫羊藿苷组SEM吸收陷窝率和TRAP阳性细胞数明显少于阳性对照组(P<0.05);阴性对照组和阳性对照组测量值均有统计学差异(P<0.05);淫羊藿苷组和阴性对照组TRAP阳性细胞数有统计学差异(P<0.05),但SEM吸收陷窝率无统计学差异(P>0.05)。结论局部注射淫羊藿苷可降低正畸致炎性牙根吸收发生的程度。     

HPLC-荧光法测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数

目的建立测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数的高效液相色谱(HPLC)-荧光法。方法采用SHIMPACK VP-ODS色谱柱;以甲醇-水(40∶60)为流动相,流速为0.8mL/min;进样量为10μL;激发波长为320nm,发射波长为410nm,测定土大黄苷在37℃水和不同pH值介质中的平衡溶解度以及在正辛醇-水、正辛醇-缓冲溶液体系中的油水分配系数。结果在37℃条件下,土大黄苷在水中的平衡溶解度为109.54mg/L;在pH为8.0时溶解度最大,为126.12mg/L;土大黄苷在正辛醇-水中的油水分配系数logP值为0.53;在pH为6.0的缓冲溶液中油水分配系数最大,logP为0.76。结论本研究建立了HPLC-荧光检测法,成功应用于测定土大黄苷平衡溶解度和油水分配系数,为土大黄苷剂型的开发及药代动力学研究提供了理论依据。     

HPLC-ELSD法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量

目的 建立测定桔梗药材中桔梗皂苷D、D3、E含量的方法.方法 采用高效液相色谱-蒸发光激光闪射检测器(HPLC-ELSD)法,Hypersil C18柱(5 μm,4.6 mm×150 mm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,ELSD漂移管温度113℃,载气(N2)流速3.0 L/min.结果 桔梗皂苷D、D3、E的线性范围分别为13.78～275.6μg/mL(r=0.999 5)、8.40～168.0μg/mL(r=0.999 7)、12.02～240.4μg/mL(r=0.999 6),平均回收率(n=5)为98.3%、99.4%和101.3%.结论 本法操作简便,结果准确可靠,可用于桔梗皂苷D、D3、E含量的测定.     

多敏灵片中咖啡因和盐酸多塞平含量的测定

目的建立高效液相色谱法,测定多敏灵片中咖啡因、盐酸多塞平的含量。方法采用高效液相色谱法,以Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,流动相为甲醇-水-三乙胺(75∶25∶1),流速1 mL/min,检测波长295 nm,柱温为室温。结果咖啡因、盐酸多塞平与其他组分分离良好,且不受其他成分的干扰;咖啡因回归方程为:Y=196 604X+218 976(r=0.999 8,n=5),咖啡因在0.08~0.24μg的范围内线性关系良好;盐酸多塞平回归方程为:Y=60 158X+58 230(r=0.999 9,n=5),盐酸多塞平在0.04~0.12μg的范围内线性关系良好。方法的平均回收率分别为99.06%、96.67%,精密度(RSD)值分别为1.04%、1.13%。结论本方法操作简便、快速、准确、灵敏,适用于多敏灵片的含量测定。     

RP-HPLC法测定人血浆中水飞蓟宾的浓度

建立了 RP- HPLC法测定水飞蓟宾在人血浆中浓度的方法。用乙腈沉淀血浆蛋白 ,离心后 ,取上清液 10 μl进样分析。色谱条件 :C18柱 (10 μm) 2 2 0 mm× 4 .6 mm;流动相为 :V(甲醇 )∶ V(水 )∶ V(0 .5mol· L-1磷酸二氢钾 ) =10∶ 10∶ 1(用 0 .2 mol· L-1磷酸调 p H=4 .0 ) ;流速为 1.0 ml· min-1;检测波长为 2 90 nm。结果水飞蓟宾 A、B平均回收率分别为 98.96 %、97.93% ;日内 RSD分别为3.0 8%、2 .15% ;日间 RSD分别为 4 .4 8%、2 .6 4 %。     

体外诱导人脐血CD34~+细胞向肝细胞的分化

目的探讨在体外培养条件下人脐血CD34+细胞向肝细胞的分化。方法用磁性细胞分选试剂盒(MACS)分离出CD34+细胞后在含50 mL/L FBS,1×ITS,4.7 mg/L亚油酸,10-4mol/L 2-磷酸抗坏血酸的低糖型DMEM中培养,并以FGF4(100μg/L)、HGF(20μg/L)进行诱导。分别于生长因子刺激前和刺激8、16 d时留取细胞。通过RT-PCR对ALB、AFP、GATA-4等mRNA的表达水平进行检测;用免疫细胞化学染色检测ALB蛋白的表达,并收集培养液测定ALB的质量浓度。结果流式细胞仪检测结果显示CD34+细胞的平均分离纯度>90%,达到分离要求。RT-PCR检测到诱导后的CD34+细胞表达ALB、AFP、GATA4 mRNA。免疫细胞化学染色可见诱导16 d的CD34+细胞出现ALB阳性表达细胞,ELISA检测表明诱导组8、16 d培养液中的ALB质量浓度明显增高,与诱导前和未诱导组相比均有显著差异(P<0.01)。结论在体外培养条件下,脐血CD34+造血干细胞可分化为表达白蛋白的类肝细胞。     

脑室内注射胰岛素对大鼠全脑缺血后海马CA1区Bcl-2 mRNA变化及其蛋白表达的影响

目的观察胰岛素对全脑缺血后海马CA1区Bcl-2 mRNA含量变化及其蛋白表达的影响,探讨胰岛素保护作用的机制。方法利用4-VO法制作大鼠全脑缺血模型。造成脑缺血15 min后行再灌注,治疗组于再灌注后即刻经脑室注入1 u胰岛素(10μL,1×105u/L),缺血组则经脑室注入10μL生理盐水。利用反转录PCR(RT-PCR)、免疫组化及Western-blot法分别于全脑缺血后1、3、5 d观察海马CA1区Bcl-2蛋白表达及其mRNA相对含量的变化。结果全脑缺血后1、3、5 d治疗组海马CA1区可见呈阳性表达的Bcl-2蛋白,而缺血组海马CA1区Bcl-2蛋白的表达则呈阴性;Western-blot分析,全脑缺血后1、35、d治疗组海马CA1区Bcl-2蛋白电泳条带密度分别为2 890.791±213.616,3 147.396±243.561和2 594.834±204.736,明显高于缺血组的743.376±84.123,804.637±64.547和637.867±54.394(P<0.01)。全脑缺血后1、35、d缺血组及胰岛素治疗组海马CA1区Bcl-2 mRNA相对含量则未见明显差异。结论全脑缺血后脑室内注入胰岛素可能通过促进海马CA1区神经元Bcl-2基因的翻译途径从而促进Bcl-2蛋白表达,这可能是其对全脑缺血后海马CA1区神经元产生中枢直接保护作用的主要机制之一。     

低温、钾通道开放剂停搏对幼兔心肌的保护作用

目的探讨以钾通道开放剂(PCOs)取代传统的高钾用作停搏剂时对未成熟心肌的保护效果,以及低温与PCOs之间的关系。方法32颗未成年(14-28 d兔龄)兔心进行Langendoff模型缺血/再灌注研究:对照组(C组,n=8),改良St.Thomas液灌注心脏停跳,15℃保存;实验Ⅰ组(T1组,n=8),单纯低温心脏自然停跳,15℃保存;实验Ⅱ组(T2组,n=8),4℃Pinacidil(50μmol/L)液灌注停跳,15℃保存;实验Ⅲ组(T3组,n=8),37℃Pinacidil(50μmol/L)液灌注停跳,37℃常温保存。观察缺血前后心功能(左心室收缩峰压、舒张末压、最大压力变化速率)、冠状动脉流量、生化指标、心肌含水量、心肌超微结构等的改变。结果T2组左室功能和冠脉流量的恢复均优于另外3组(P<0.01),而在左室收缩功能的恢复方面,T1组优于C组(P<0.05),T1组与T3组间无明显差异(P>0.05);再灌注后心肌酶外漏及超微结构改变以T2组最为轻微,T3组最重;心肌含水量各组间无显著性差异(P>0.05)。结论PCOs超极化停搏液对未成熟心肌的保护效果明显优于高钾停搏液;单纯低温即能对未成熟心肌提供良好的保护作用;低温与超极化停搏之间的作用互相增强,但高钾去极化停搏削弱低温对未成熟心肌的保护作用。     

泼尼松龙对脂多糖诱导的RANTES的影响

目的探讨泼尼松龙对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞激活时所分泌的趋化因子RANTES的影响。方法采用MEM培养液培养小胶质细胞,培养液中添加不同质量浓度的LPS(0、100、500、1 000μg/L)及LPS(100μg/L)与10μmol/L的泼尼松龙后再培养12 h,用ELISA法测定细胞外液所分泌的RANTES含量。结果LPS能高度激活小胶质细胞并且能使RANTES分泌增加,泼尼松龙明显抑制RANTES的含量。结论泼尼松龙有抑制趋化因子RANTES的分泌作用。     

β-淀粉样蛋白增加基底前脑神经元对谷氨酸的易感性

目的探讨β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)与谷氨酸(Glu)联合应用,对原代培养的大鼠基底前脑神经元的作用。方法原代培养大鼠基底前脑神经元,应用形态学、MTT法结合ChAT免疫组织化学染色,分别观察Aβ25-35与Glu联合应用,对原代培养的基底前脑神经元存活率、形态学及ChAT免疫反应阳性神经元的影响。结果将100 nmol/L、1μmol/L Aβ分别和20μmol/L Glu联合用于培养的基底前脑神经元,在倒置显微镜下观察,细胞表面粗糙,立体感减弱,胞浆中出现深色颗粒,细胞肿胀或收缩;尼氏染色显示尼氏体减少;MTT检测显示神经元存活率明显下降,100nmol/L Aβ+20μmol/L Glu组与100 nmol/L Aβ组间,1μmol/L Aβ+20μmol/L Glu组与1μmol/L Aβ组间比较均具有统计学差异(P<0.05);ChAT免疫阳性神经元的灰度和截面积均减小。结论Aβ25-35可增加神经元对Glu神经毒性作用的敏感性,表明Glu在阿尔茨海默病发病中起着非常关键的作用。     

分析谷胱甘肽-S-转硫酶的产物抑制反应过程测定还原型谷胱甘肽

目的以谷胱甘肽-S-转硫酶(GST)为模型,探讨有产物抑制时用积分法分析酶反应过程测定底物量的可靠性。方法从猪肝制备GST。1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)终浓度为1.0 mmol/L,监测GST催化还原型谷胱甘肽(GSH)与CDNB结合产物在340 nm吸收变化。用积分法预测反应终点的产物吸收。结果优化产物抑制常数可使此积分法所得反应终点产物吸收对剩余底物变化不敏感。此积分法测定GSH对常见干扰有抗性。此法测定大鼠肝匀浆中外加GSH回收率大于98%,线性响应上限接近90μmol/L,下限接近2.0μmol/L,所得大鼠肝GSH含量与文献报道一致。结论有产物抑制时用积分法也可定量底物;用此积分法进行动力学酶法分析具有一定普遍性,而且有明显优势。     

雷公藤内酯醇抑制牛晶状体上皮细胞增殖

目的探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对体外培养的牛晶状体上皮细胞(bovine Lens epithelial cell,BLECs)增殖的抑制作用。方法取第4代对数生长期的牛LECs,培养24 h后,加入重组人表皮生长因子(recombi-nant human epithelial growth factor,rhEGF)(终浓度50μg/L)和不同浓度的Tri(40、20、10μg/L),再分别作用6、12、24、48、72 h后,采用MTT法及流式细胞仪检测增殖细胞核抗原(PCNA)在LECs的阳性表达率和增殖抑制率,观察Tri对LECs增殖的抑制作用。结果不同浓度Tri均可抑制处于增殖状态的LECs,并呈剂量和时间依赖性;72 h增殖抑制率分别达到80.09%、61.29%及39.93%。PCNA表达率在6-72 h内随浓度增高和作用时间延长有明显的下调,呈明显的时间-效应关系和剂量-效应关系,且各浓度Tri组与同一时点增殖对照组相比均有非常显著性差异(P<0.01)。结论Tri对牛晶状体上皮细胞增殖有明显的抑制作用。     

白细胞介素-2对小鼠神经病理性痛的镇痛作用

目的探讨白细胞介素-2(IL-2)对神经病理性痛的镇痛作用及其可能的机制,为临床治疗神经病理性痛筛选新的镇痛药物奠定基础。方法通过结扎雄性C57BL/6小鼠单侧L5/L6脊神经建立神经病理性痛模型,然后利用机械刺激和冷刺激诱发的痛觉超敏实验分别观察腹腔注射不同剂量(1.0×106、2.5×106、5.0×106u/kg)IL-2对疼痛模型小鼠患侧脚掌痛阈的影响;同时,通过5.0×106u/kg IL-2注射前30 min腹腔注射纳洛酮(1 mg/kg)以观察阿片受体拮抗剂对IL-2镇痛作用的影响。结果腹腔注射IL-2可产生剂量依赖性镇痛作用,其中5.0×106u/kg和2.5×106u/kg IL-2均可显著提高模型小鼠患侧脚掌的50%缩足阈值(P<0.01)和降低5 min抬足次数(P<0.05),镇痛效应分别维持30 min和15 min,而1.0×106u/kg IL-2无明显的镇痛作用。IL-2产生的镇痛效应不能被纳洛酮阻断。结论IL-2对小鼠神经病理性痛具有镇痛作用,其镇痛效应除受阿片受体介导外还可能有其他分子参与。