慢性粒细胞白血病树突状细胞的体外无血清培养及杀瘤效应

目的　建立慢性粒细胞白血病 (CML)树突状细胞 (DCs)体外无血清培养体系。方法　小牛血清 (FCS)、无血清 (SFM)及自体血清分别培养CML病人CD34 + 细胞或单个核细胞 (MNCs) ,以SCF、GM CSF、TNF α、IL 4 (A)与GM CSF、TNF α、IL 4 (B)两组不同的细胞因子作对照。结果　CML DCsHLA DR高表达 ,CD80、CD83和CD86表达比例不高 ,异体混合淋巴细胞反应能力不强。SFM同FCS体系相比无显著差异。 5例CML DCsPh染色体比例与培养前MNCsPh染色体比例基本吻合 ;同时以CML DCs同自身T细胞、自体Ph+ MNCs共孵育 ,测其杀伤率为 (38.5± 6 .5 ) %。结论　CML DCs携带Ph染色体 ,能刺激自体T细胞杀伤自身白血病细胞 ,但需进一步改善其功能。     

B7.1胞外编码区的真核表达及其生物活性

目的　真核表达B7.1细胞外编码区以研究其生物学活性。方法　电穿孔法将重组质粒pDisplay/B7.1(V +C)导入人子宫颈癌细胞株 ,免疫组化及核酸原位杂交法分别检测其蛋白及mRNA表达 ,3 H TdR掺入法测定表达物对T细胞的刺激作用 ;MTT法研究转染细胞 T细胞混合培养引发的细胞毒性杀伤作用。结果　B7.1细胞外区在Hela细胞表面表达 ,所表达的B7.1细胞外区在抗CD3单抗存在的情况下具有刺激T细胞活化的特性 ,重组质粒转染的Hela细胞与T细胞混合培养可引起细胞毒性杀伤。结论　真核表达的B7.1(V +C)具有T细胞共刺激活性 ,可用于构建肿瘤免疫治疗之双功能分子。     

免疫抑制因子对宫颈癌患者来源的树突状细胞的体外作用

目的　观察白细胞介素 10 (IL 10 )及血管内皮生长因子 (VEGF)对宫颈癌患者来源的树突状细胞 (DC)的体外抑制作用。方法　培养宫颈癌患者自体DC的小牛血清体系中加入粒 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)、IL 4和肿瘤坏死因子 α(TNF α) ;流式细胞术检测免疫表型 ;甲基噻唑蓝法 (MTT)法检测异体混和淋巴细胞反应 (MLR)和细胞毒实验 ;酶联免疫吸附实验 (ELISA)法检测培养细胞上清液中IL 10和VEGF含量。结果　 10例宫颈癌患者外周血单个核细胞培养 10d后 ,获得 (40± 2 0 ) %的DC ,此类DC共刺激分子的表达减低 ,刺激自体T细胞杀伤癌细胞能力不足 ,分泌IL 10及VEGF的含量却升高。结论　IL 10和VEGF抑制了宫颈癌患者自体DC的功能。     

Zbtb7基因mRNA在佛波酯诱导的白血病细胞分化中表达上调

目的 分析白血病细胞系分化前后Zbtb7基因mRNA表达水平的变化情况.方法 50 nmol/L佛波酯(PMA)刺激6孔板培养的U937、K562白血病细胞系,在诱导刺激的0、1、3、5 d,荧光定量PCR检测细胞内Zbtb7基因mRNA表达量的改变.结果 相对于正常培养的细胞,U937、K562细胞在PMA刺激后Zbtb7 mRNA表达增高,差异有统计学意义(P<0.01, P<0.05),且增高量存在时间依赖性.结论 白血病细胞分化过程中伴随有Zbtb7基因表达的改变.     

RUNX3基因对RAW264.7巨噬细胞极化的调控作用

目的探讨RUNX3对巨噬细胞极化过程的调节作用和可能机制,为巨噬细胞参与的免疫炎症性疾病提供新的治疗思路。方法 (1)分别用IFN-γ、LPS和IL-4刺激RAW264.7细胞,使用RT-PCR方法检测刺激后细胞表面标志物arginase-1、iNOS的表达变化,观察刺激后RAW264.7细胞是否向M1或者M2方向极化;设定IFN-γ和LPS共刺激的细胞为M1组,IL-4刺激的细胞为M2组;另设正常对照组为M0组;(2)使用免疫荧光、RT-PCR方法检测各组细胞(M1、M2、M0)RUNX3表达情况;(3)建立RUNX3沉默的载体,沉默RAW264.7细胞系RUNX3基因,经G418选择性培养基筛选得到稳定表达的细胞系,RT-PCR检测细胞表面标志物iNOS和CD86变化,用ELISA法检测细胞分泌物TNF-α变化。结果 (1)用IFN-γ和LPS刺激RAW264.7细胞可使RAW264.7细胞向M1亚型极化,RT-PCR检测M1组细胞iNOS表达较M0组升高(P=0.002);而使用IL-4刺激RAW264.7细胞可使RAW264.7细胞向M2亚型极化;RT-PCR检测结果显示,M2组细胞arginase-1表达较M0组升高(P=0.021);(2)RUNX3mRNA在M1组细胞与M0组相比,表达增高(P=0.001),而在M2组细胞中表达降低(P=0.041);(3)沉默RUNX3后,CD86、iNOS mRNA表达较M0组降低(P=0.005),并且细胞分泌TNF-α减少(P<0.001)。结论 RUNX3转录活化可能促进巨噬细胞向M1型极化。     

新型自体肿瘤细胞疫苗治疗进展期肿瘤患者的免疫学检测

目的　探讨自体肿瘤疫苗的作用机制。方法　 2 0例进展期肿瘤患者术后第 4周开始以自体肿瘤细胞疫苗行主动免疫治疗。免疫接种共 4次 ,每次间隔 7～ 10d ;接种前 3d及第 4次接种后一周 ,采集外周血 ,分离单个核细胞 ,以流式细胞分析术 /细胞内细胞因子检测法测定CD8+ IFN γ+ ,CD8+ IL 10 + 细胞及CD4+ IFN γ+ ,CD4+ IL 10 + 细胞 ;同时采集血清 ,ELISA法检测血清IFN γ、IL 10水平。结果　自体肿瘤细胞疫苗治疗后 :①血清IFN γ水平升高 [(7.16± 2 .91)ng·L- 1升至 (11.68± 4.86)ng·L- 1,P <0 .0 5] ;而IL 10水平下降 [2 1.0 4± 13 .81)ng·L- 1降至 (13 .41± 5.71)ng·L- 1,P <0 .0 5] ;②CD8+ IFN γ+ 阳性细胞由 (3 .80± 1.45) %升至 (6.94± 2 .63 ) % ;CD4+ IFN γ+ 阳性细胞由 (3 .0 9± 1.52 ) %升至 (5.2 0± 2 .94) % (P <0 .0 5) ;③病人耐受良好。结论　自体瘤细胞疫苗免疫后可改善肿瘤患者细胞介导的抗瘤免疫反应     

急性白血病hTERT mRNA和P16蛋白表达与端粒酶活性的关系

目的　探讨端粒酶逆转录酶 (hTERT)和P16蛋白表达与端粒酶活性的关系及其在急性白血病发病过程中的作用。方法　采用TRAP和RT PCR法分别检测 4 0例急性白血病患者 (白血病组 )及 2 0例非白血病且骨髓正常者 (对照组 )的端粒酶活性与hTERTmRNA表达 ;用免疫组化SP法测定P16蛋白表达。结果　白血病组端粒酶活性和hTERTmRNA的阳性率分别为 75 %和 80 % ,而对照组均为阴性。白血病组hTERTmRNA表达与端粒酶活性呈显著正相关 (r =0 .6 5 ,P <0 .0 1)。白血病组及对照组P16蛋白阳性表达率分别为 35 %和 95 % ,两者比较差异有非常显著性意义 (P <0 .0 1)。白血病组P16蛋白表达与端粒酶活性呈显著负相关 (r =- 0 .81,P <0 .0 1)。结论　hTERTmR NA表达和 p16基因失活可能在急性白血病发病过程中起一定作用。急性白血病细胞端粒酶活性激活可能与hTERTmRNA表达及 p16基因失活有关。     

雄黄治疗维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病-M_3及诱导凋亡的作用

目的　研究雄黄体外诱导人急性早幼粒细胞白血病 M3细胞凋亡的作用 ,并观察其对维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病 M3的治疗效果。方法　用雄黄处理在体外培养耐维甲酸的人白血病细胞 ,电子显微镜观测白血病细胞凋亡过程 ,并前后对照观察应用雄黄治疗维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病 M3的疗效。结果　在 1 .0～ 2 .0 μmol·L- 1 的浓度下 ,雄黄作用于白血病细胞 2 4h后 ,可见到较为典型的细胞凋亡形态学变化 :细胞核固缩 ,染色体凝集 ,呈新月型紧贴于核膜周边 ,核碎裂 ,染色质片断化 ,凋亡小体形成等。用雄黄治疗的 2 0例患者 ,完全缓解(CR) 1 7例 ,部分缓解 (PR) 1例 ,总有效率 (CR +PR) 90 %。结论　雄黄能够诱导耐维甲酸的白血病细胞凋亡 ,可用于维甲酸耐药的急性早幼粒细胞白血病 M3治疗 ,且缓解率及长期生存率高。     

α-干扰素对慢性粒细胞白血病来源的树突状细胞的免疫调节作用(Ⅰ)

目的　于慢性粒细胞白血病 (CML)来源的树突状细胞 (DCs)无血清培养基中 ,加入α 干扰素 (IFN α) ,以探讨IFN α对CML DCs表达共刺激分子及分泌IL 10、IL 12P70的影响。方法　在诱导CML DCs的培养基中 ,除加入SCF、GM CSF、TNF α及IL 4外 ,还加入不同浓度IFN α。培养 10～ 14d后 ,流式细胞仪检测细胞免疫表型 ;G显带法显示Ph1染色体 ;噻唑蓝 (MTT)法检测CML DCs刺激正常人外周血淋巴细胞增殖状况 ;ELISA法检测培养上清IL 10及IL 12P70含量。结果　IFN α(30 0U·mL-1)组较无IFN α组 ,CML DCs的CD4 0、CD83、CD86及MHC I类抗原的表达均升高一倍 ;异体混合淋巴细胞反应 (MLR)中OD值增加一倍 ;Ph1染色体阳性比例、IL 10及IL 12P70浓度均减低。结论　IFN α能够部分纠正CML DCs免疫表型及功能缺陷 ,同其解除了CML血清中IL 10对CML DCs分化的抑制有关     

进展期肿瘤主动特异性免疫治疗的临床研究

目的探讨自体肿瘤疫苗的作用机制。方法50例进展期肿瘤患者术后第4周开始以自体肿瘤细胞疫苗行主动特异性免疫治疗。免疫接种共4次,每次间隔7-10 d;接种前3 d及第4次接种后1周,采集外周血,分离单个核细胞,以流式细胞分析术/细胞内细胞因子检测法测定CD8+-IFN-γ+、CD8+-IL-10+细胞及CD4+-INF-γ+、CD4+-IL-10+细胞;用自体肿瘤抗原做皮肤迟发型过敏试验(DTH),48 h后测量红斑、硬结大小(mm)。对DTH反应部位皮肤活检,用免疫组化染色了解局部细胞免疫反应。结果自体肿瘤细胞疫苗治疗后表现为:①CD8+-IFN-γ+阳性细胞由(3.90±1.42)%升至(7.12±2.15)%;CD4+-INF-γ+阳性细胞由(4.19±1.50)%升至(7.20±2.29)%(P<0.05);②与治疗前相比,治疗后患者对自体肿瘤抗原的特异性DTH反应明显增强(P<0.01);③DTH反应部位CD8+T细胞、CD4+T细胞浸润明显增多;④患者耐受性良好。结论自体肿瘤细胞疫苗免疫后,可改善肿瘤患者细胞介导的抗瘤免疫反应;自体肿瘤疫苗可激发患者特异性细胞介导的免疫反应。     

新型疫苗治疗急性白血病及多发性骨髓瘤的临床研究

目的　探讨新型疫苗主动治疗急性白血病及多发性骨髓瘤的疗效及毒副作用。方法　应用基因工程生产的细胞因子和急性白血病及多发性骨髓瘤肿瘤细胞制备的疫苗 ,主动免疫治疗急性白血病 7例、多发性骨髓瘤37例。结果　 37例急性白血病患者中化疗未缓解或化疗不能耐受者 2 9例 ,经疫苗治疗达到完全缓解者 5例占17.3% ,部分缓解者 6例占 2 0 .7% ,微效者 4例占 13.8%。总有效率 5 1.8%。化疗缓解组 8例疫苗治疗后维持缓解达 8～ 13个月复发。多发性骨髓瘤 7例 ,其中 1例完全缓解 ,5例部分缓解。治疗中未发现明显副作用。结论　应用新型疫苗治疗化疗无效或化疗不能耐受的急性白血病及多发性骨髓瘤具有肯定疗效。且经济简便 ,无明显毒副作用     

共刺激分子B_(7.1)拼接异构体的初步研究

利用B1.7cDNA特异性引物、RT-PCR技术从新鲜淋巴瘤组织中扩增得到一与标准型B7.1片段长度不同的B7.1分子。进一步将该片段插入真核表达载体PSVL中，转染细胞得到了较高水平的表达。免疫组化研究结果证实抗B7.1单抗可与该片段编码的蛋白结合，提示该cDNA片段为B7.1抗原的拼接异构体。     

STUDY ON B7-1 PROTEIN‘S EXPRESSION IN BIOPSIES IN RENAL TRANSPLANTATION

Ａｌｌｏｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｆａｃｔｏｒｏｆｉｎ ｆｌｕｅｎｃｉｎｇｔｈｅｌｏｎｇｔｅｒｍｓｕｒｖｉｖａｌｏｆａｌｌｏｇｒａｆｔｉｎｈｕ ｍａｎｏｒｇａｎｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ .Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｔｏｌｅｒａｎｃｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｉｓａｍａｉｎ ｐａｒｔｉｎｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｆｏｒｇａｎｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ .Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｒｅｊｅｃｔｉｏｎａｎｄｓｅｅｋ…     

胃肠癌的MHC抗原表达及其与局部免疫应答的关系

利用一组单克隆抗体对62例胃肠癌组织进行免疫组化研究。结果发现:HLA-ABC抗原缺失率在胃癌,结、直肠癌和局部淋巴结转移灶分别为26.92%、13.89%和33.33%;HLA-DR抗原表达率分别为34.62%、22.22%、和40.0%,而HLA-DQ抗原仅表达于2例HLA-DR胃癌的少数癌细胞。且HLA-ABC抗原缺失率在早期癌(60.0%)明显高于中晚期癌(15.79%);胃肠癌的HLA抗原表达与局部单个核细胞各亚群浸润的程度间也有一定的相关。这些发现提示HLA抗原可能在肿瘤发生发展过程中具有重要的免疫调节功能。     

乌饭树树叶及其提取物对视网膜光损伤的保护作用

目的研究乌饭树树叶及其提取物对视网膜免受光损伤的保护功能。方法将20只新西兰白兔分成4组:正常对照组和模型对照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组。正常对照组动物自由摄取饲料,自由饮水;模型对照Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组动物除自由摄取饲料,自由饮水外,每天分别喂乌饭树新鲜树叶[50 g/(kg.d)]、乌饭树陈旧树叶[50 g/(kg.d)]和乌饭树树叶提取物[50mg/(kg.d)],连续4周。并且进行强光刺激,同时利用视网膜电图(ERG)进行视网膜分析,最后处死白兔测定视网膜中丙二醛(MDA)的含量和总超氧化物岐化酶(T-SOD)的活力。结果ERG测定结果发现,对照组B波的潜伏期时间延长而振幅降低,模型组白兔ERG的变化趋势正好相反。同时模型组视网膜中的MDA含量要低于对照组(P<0.01),而SOD含量则高于对照组(P<0.01)。结论服用乌饭树树叶及其提取物对眼睛视网膜具有明显的保护作用。     

血管紧张素Ⅱ对体外培养的牛眼小梁细胞间质合成的影响

目的　观测血管紧张素Ⅱ对体外培养的牛小梁细胞间质合成的影响 ,探讨原发性开角青光眼的发病机制。方法　①体外培养牛眼小梁细胞 ,应用免疫组化方法 (NSE ,Ⅷ因子相关抗原染色 )鉴定细胞 ,光学及电子透射显微镜对细胞进行形态学及生长特性的观察 ;②AngⅡ (1×1 0 -7mol·L-1及 1× 1 0 -8mol·L-1)及其Ⅰ型受体拮抗剂孵育牛眼小梁细胞 ,免疫荧光染色测定纤维粘连蛋白 ,并用化学方法检测培养液中羟脯氨酸含量间接推导胶原含量。结果　牛眼小梁细胞培养成功 ,以上皮型为主。AngⅡ明显地增加了牛眼小梁细胞纤维粘连蛋白 ,同时培养液中的羟脯氨酸含量亦相应增高 (P <0 0 5 )。结论　体外培养牛眼小梁细胞技术是研究小梁细胞特性的重要实验技术。AngⅡ可以促进纤维粘连蛋白、胶原合成增强 ,AT1受体拮抗剂可以部分阻断此促增殖效应。     

P27KIPL蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

目的　探讨P2 7KIPL蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其与生物学行为和预后的关系。方法　采用免疫组化SP法检测 88例卵巢浆液性肿瘤中P2 7KIPL蛋白的表达水平。结果　 6 1例卵巢浆液性囊腺癌中P2 7KIPL阳性表达率为 4 6 % (2 8/ 6 1例 ) ,明显低于浆液性囊腺瘤 80 % (12 / 15例 )和浆液性交界性肿瘤 75 % (9/ 12例 ) (P <0 0 5 )。P2 7KIPL阳性表达在Ⅰ级癌中表达率最高 73 3% ,Ⅱ级癌 4 6 7% ,Ⅲ级癌表达最低 12 5 %。三组之间差异显著 (P <0 0 5 ) ,P2 7KIPL阳性表达与组织分级呈负相关。早期 (Ⅰ Ⅱ期 )P2 7KIPL表达率 76 % ,明显高于晚期 (Ⅲ Ⅳ期 ) 2 7% (P <0 0 5 )。结论　P2 7KIPL蛋白表达水平可能与卵巢浆液性囊性癌组织分化、临床分期有关。