多巴胺D3受体基因敲除对小鼠基础痛阈的调制作用

目的研究多巴胺D3受体对小鼠基础痛阈的调制作用,为进一步探讨D3受体在痛觉调制作用中的分子机制奠定基础。方法对实验小鼠进行适应性预处理后,用甩尾仪测定D3受体基因敲除小鼠(D3-/-)及具有相同遗传背景的野生型(C57BL/6J)小鼠的基础痛阈。结果D3受体基因敲除小鼠的基础痛阈高于野生型C57BL/6J小鼠,统计学检验显示两组间有显著性差异(P<0.05)。结论多巴胺D3受体可能参与痛觉的调制过程,对脊髓伤害性反射具有紧张性下调易化效应。对进一步在分子水平探讨多巴胺对痛觉调制作用机制奠定了基础。     

shRNA干扰LGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(LGR5)基因在HeLa细胞增殖及耐药性中的作用及可能机制。方法采用shRNA技术干扰LGR5表达,构建LGR5干扰(shLGR5)的HeLa细胞,并设对照组(shCon)。采用细胞计数、平板克隆以及MTT实验观察shLGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响;采用Western blot检测LGR5、β-catenin在HeLa细胞中的表达。结果成功构建了LGR5干扰的HeLa细胞系;与shCon组相比,shLGR5组细胞生长速度及克隆形成率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);shLGR5组与shCon组HeLa细胞对顺铂的耐药性差异亦具有统计学意义(P<0.01);且干扰LGR5抑制HeLa细胞中β-catenin蛋白的表达。结论 LGR5基因在HeLa细胞增殖及耐药性中有重要作用,且与Wnt/β-catenin通路有关。     

Nbn基因对小鼠海马神经元发育的影响

目的观察Nbn基因神经特异性敲除(Nbn-CNS-del)小鼠海马神经元发育的形态学变化,探讨Nbn基因在小鼠海马神经元发育中的作用。方法采用成熟神经元标记物NeuN,应用HE染色、免疫组织化学技术结合体视学方法,对生后(P)7、14、21 d的Nbn-CNS-del小鼠海马神经元的发育进行系统观察和定量分析,以非基因敲除(Nbn-CNS-ctr)仔鼠为对照组。结果 P7～P21 d,与对照组相比,Nbn-CNS-del小鼠海马发育迟缓,分子层、颗粒细胞层/锥体细胞层及多形层的截面积均减小(P<0.01);颗粒细胞层/锥体细胞层NeuN阳性细胞面数密度也均明显减少(P<0.01)。结论 Nbn-CNS-del小鼠海马神经元发育迟缓,Nbn基因可能是海马神经元发育中的重要基因。     

山楂对低密度脂蛋白受体基因敲除小鼠脂代谢的影响

目的利用低密度脂蛋白受体基因敲除(LDLR-/-)小鼠作为高血脂动物模型,研究山楂对小鼠脂代谢的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将LDLR-/-小鼠随机分为正常对照组和山楂干预组(n=10只/组)。饮食干预20周后取血并解剖。采用氯仿(V)︰甲醇(V)(2︰1)混合液抽提肝脏总脂质,酶法分别测定甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量。利用快速蛋白层析(FPLC)法分离血清脂蛋白,酶法测定各馏分中TG和TC含量。Real-time检测HMG-CoAR、FAS、PPARα、SREBP-1c脂代谢相关基因的mRNA表达水平。结果山楂干预组小鼠血清中TG和TC含量,肝脏总脂质、肝脏中TG和TC含量均低于对照组(P<0.05)。与对照组比较,山楂干预组血清中的极低密度脂蛋白甘油三酯(VLDL-TG)、胆固醇(VLDL-C)和低密度脂蛋白/中密度脂蛋白甘油三酯(LDL/IDL-TG)、胆固醇(LDL/IDL-C)明显降低。山楂干预组的脂代谢相关基因mRNA表达水平与对照组相比均有统计学差异。结论山楂能调节脂质代谢,具有明显的降血脂作用。     

姜黄素对沙土鼠脑缺血再灌注后海马CA1区及CA3区Bcl-2、Bax表达的影响及意义

目的探讨姜黄素对沙土鼠脑缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2、Bax在海马CA1区、CA3区表达的影响及意义。方法制作沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型。随机分为假手术组(SH)、脑缺血再灌注组(IR)、姜黄素组(CU)、对照组(SC),每组据再灌注时间点不同又分为1、3、57、d 4个亚组,每组6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查,TUNEL法检测海马CA1区、CA3区细胞凋亡,免疫组织化学染色测定Bcl-2、Bax蛋白在海马CA1区、CA3区的表达变化。结果姜黄素可显著减少沙土鼠探索活动及海马CA1、CA3区凋亡锥体细胞数量(与IR组相比,P<0.01),诱导Bcl-2蛋白及抑制Bax蛋白表达(与IR组相比,P<0.01)。结论姜黄素有脑保护作用,调控凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白的表达可能是其作用机制之一。     

原肌球蛋白调节蛋白1对ApoE敲除小鼠糖脂代谢的影响

目的研究原肌球蛋白调节蛋白1(Tmod1)对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠的糖脂代谢的影响。方法将心脏过表达而全身其他部位敲除Tmod1的小鼠(TOT/Tmod1~(-/-))与ApoE~(-/-)小鼠杂交获得ApoE和Tmod1的双敲小鼠(ApoE~(-/-)/TOT/Tmod1~(-/-))。对ApoE~(-/-)小鼠和双敲小鼠进行高脂饮食喂养,检测2种小鼠的体质量改变、脂肪含量、血脂水平、口服糖耐量(OGTT)和胰岛素耐量(ITT)。对肝脏和皮肤进行组织学分析。结果双敲小鼠较ApoE~(-/-)小鼠体质量减轻,体脂含量降低(P<0.05)。但喂养高脂饮食8周后,双敲小鼠体质量增加量、皮下脂肪组织的厚度、三酰甘油和总胆固醇水平均高于ApoE~(-/-)小鼠(P<0.05),而脂肪肝、口服葡萄糖耐量和胰岛素耐受水平则明显降低(P<0.05)。结论 Tmod1参与调节高脂饮食引起的ApoE~(-/-)小鼠糖脂代谢水平的改变。     

安非他明对小鼠白细胞介素-10释放的影响及多巴胺D3受体的调控作用

目的 研究安非他明(AM)对细菌脂多糖(LPS)刺激后小鼠白细胞介素-10(interleukin-10, IL-10)释放的影响以及多巴胺D3受体在此过程中参与的调控作用.方法 实验Ⅰ:采用多巴胺D3受体基因敲除小鼠(D3RKO)以及具有相似遗传背景的野生型小鼠(C57BL/6J),腹腔注射AM(5 mg/kg)10 min后再注射LPS(150 μg/kg)刺激,在LPS给药后不同时间点(0、30、60、90、120、240 min)心脏穿刺抽血进行IL-10测试,观察上述不同时间点D3RKO和C57BL/6J小鼠IL-10的分泌情况.实验Ⅱ:在实验Ⅰ所确定的小鼠IL-10分泌最高时间点,观察不同剂量AM (0、2、5、10 mg/kg) 对D3RKO和C57BL/6J小鼠IL-10分泌的影响.结果 实验Ⅰ:AM 5 mg/kg在LPS注射后可以引起D3RKO和C57BL/6J小鼠IL-10分泌增多,其中60 min达最大值,与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).实验Ⅱ:C57BL/6J小鼠以AM 5 mg/kg作用后IL-10增多最为显著,D3RKO小鼠以AM 2 mg/kg作用后IL-10升高最为显著,与生理盐水对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),且二者之间亦存在统计学差异.结论 AM对小鼠免疫功能的抑制可能是通过增加IL-10分泌而起作用;小剂量AM即可引起D3RKO小鼠血中IL-10升高,提示多巴胺D3受体可能参与了AM对小鼠免疫功能抑制作用的调控.     

近红外线、紫外线及二者共同作用对小鼠皮肤光老化的影响

目的研究近红外线(IRA)、紫外线(UV)对小鼠皮肤光老化及皮肤MMP-13表达的影响,观察IRA、UV在光老化中的作用及其相互关系,探索IRA引起光老化的分子机制。方法 ICR雄性小鼠随机分为5组,即空白组、IRA组、UV组、IRA/UV组、UV/IRA组。后4组小鼠接受光照不同且顺序各异。用HE染色、免疫组化、实时定量PCR、Western blot测定MMP-13表达。结果目测及HE染色显示,较之空白组小鼠,4组实验组小鼠均出现光老化表现;与空白组比较,UV联合IRA组均能上调MMP-13蛋白和mRNA的表达(P<0.05),并且IRA/UV组比UV/IRA组上调更加显著(P<0.05)。结论①IRA可引起小鼠皮肤光老化;②IRA和UV可上调MMP-13表达,并加速光老化过程;③IRA和UV共同作用于皮肤时,作用顺序不同对皮肤老化所产生影响不同。因此,在预防小鼠皮肤皱纹形成及治疗其光老化中,防止IRA辐射,避免MMP-13形成可能发挥重要作用。     

烧伤对不同性别小鼠肝脏和脾脏铁相关蛋白的影响

目的 研究不同性别小鼠肝脏和脾脏铁相关蛋白烧伤前后的变化.方法 90 ℃水蒸气制备烧伤小鼠模型,采用比色法测定烧伤小鼠肝脏和脾脏中的铁含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝脏hepcidin和膜铁转运蛋白1(Fpn1)表达,使用Western检测了肝脏和脾脏Fpn1蛋白表达.结果 烧伤后雄性小鼠脾脏铁含量升高,肝脏hepcidin表达升高同时肝脏和脾脏Fpn1蛋白含量减少.烧伤后雌性小鼠铁内稳态破坏程度较轻.结论 铁相关蛋白的表达变化可能是引起烧伤后铁内稳态破坏的重要原因,不同性别小鼠铁相关蛋白表达差异可能暗示了雌激素的保护作用.     

EDS诱导小鼠睾丸间质细胞TM3凋亡中NDRG2的表达及意义

目的探讨N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)是否参与睾丸间质细胞的凋亡。方法选用小鼠睾丸间质细胞系TM3作为实验对象,建立体外的1,2-二甲磺酸乙烷(EDS)诱导睾丸间质细胞凋亡模型。用含有500、750μg/mL EDS的培养基刺激TM3细胞,以Western blot、Real-time PCR、流式细胞术等方法检测TM3细胞凋亡及NDRG2的表达变化。结果随EDS浓度增高,诱导小鼠睾丸间质细胞发生凋亡的比率升高,并且在EDS诱导的小鼠睾丸间质细胞中,NDRG2的表达较对照组呈现剂量依赖性增高。结论 NDRG2可能参与到睾丸间质细胞的凋亡。     

雄激素受体在大鼠睾丸发育过程中的表达及雄激素对其表达的调节作用

目的　研究发育不同阶段及二甲磺酸乙烷 (EDS)干预的雄性SD大鼠睾丸内雄激素受体 (Androgenreceptor,AR)的分布、发育模式及雄激素调控。 方法　采用免疫组织化学ABC法 ,并应用图像分析测定AR的视物平均光密度 ,以其表示核内AR相对含量。结果　特异性AR免疫染色见于睾丸间质细胞、肌样细胞、支持细胞、精原细胞、血管壁平滑肌细胞及内皮细胞。间质细胞中AR相对含量随大鼠年龄而变化 :2 1d龄居中 ,35d龄最高 ,90～ 1 2 0d龄最低 ,各组间均有显著性差异 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。肌样细胞在 3个年龄组大鼠均有很强的AR表达。应用EDS消除成年大鼠内源性睾酮后 ,睾丸内所有AR阳性细胞的免疫染色均显著减弱 ,外源性睾酮替代治疗后免疫染色程度可恢复至对照组水平。结论　雄激素可促进青春期大鼠间质细胞的功能与分化 ;肌样细胞在精子发生过程中有重要作用 ;睾丸内AR的表达受内源性睾酮的调控。     

EFFECT OF SIMULATED WEIGHTLESSNESS ON REPRODUCTION OF ADULT MALE RATS

Objective To study the effects of simulated weightlessness induced by tail-suspension on reproduction in adult male rats and its mechanisms. Methods Twenty Spraque-Dawley adult male rats were randomly divided into two groups： the experimental group and control group. Rats in the experimental group were tail-suspended for 14 days. After the treatment, the weight and morphology of testis, the quantity and quality of sperm, the level of serum testosterone and the apoptusis rate of testicular cells were observed. Results Compared with the control, the testicular weight, the quantity and quality of sperm, the level of serum testosterone significantly decreased （P〈0.05） while the apoptusis rate of testicular calls significantly increased （P〈0.05） in tail-suspended rats. In addition, hematoxylin and eosin （HE） staining showed that seminiferous tubules atrophied, spermatogenic cells decreased, seminiferous epithelial cells disintegrated and shed, and the lumina were azoospermic. Conclusion Simulated weightlessness induced by tail-suspension has a harmful effect on male reproduction of adult rats by increasing the apoptusis of testicular cells.     

The role of interleukin-8 produced by tumor induced fibroblasts in the development of cutaneous melanoma

Objective To determine the role of interleukin-8 (IL-8) produced by tumor induced fibroblasts in the development of cutaneous melanoma. Methods B16 melanoma cells induced L929 fibroblasts phenotype was transdifferentiated to myofibroblasts (MF) by co-culture in vitro. MF was monitored by morphology and immunophenotype for a-SMA. The level of IL-8 was detected by ELISA. The effect on B16 cell proliferation rate was estimated using MIT method in vitro. Melanoma implanting model was constructed in C57 mice. Results L929 MF phenotype could be modulated by B16 melanoma cells-derived transforming growth factor-β1 (TGF-β1) and elevated the levels of IL-8. L929 MF did not influence the B16 melanoma cells viability in vitro, but shortened the time of tumor formation and increased the incidence rates of tumors in C57 implanting model mice. Conclusion Fibroblasts can be activated by tumor cells and produce IL-8, which acts as an inflammatory cytokine promoting the development of cutaneous melanoma.     

青春期大鼠实验性精索静脉曲张模型的建立及其对睾丸的影响

目的　研究青春期精索静脉曲张对睾丸的损害 ,探讨精索静脉曲张不育的机理。方法　通过部分结扎左肾静脉建立青春期大鼠实验性精索静脉曲张 (ELV)模型 ,分别于术后 4周和 8周研究双侧睾丸的组织学改变并进行统计学分析。结果　成功建立了ELV模型。该模型大鼠的睾丸病理损害以生精上皮退化 ,精子发生阻滞 ,生精细胞脱落 ,曲精小管萎缩 ,间质水肿最为多见。损害为双侧性 ,且有累进性特点。统计学分析显示 ,ELV大鼠左右侧睾丸平均重量和曲精小管直径均较对照组显著减小 ,睾丸间质面积较对照组显著扩大。结论　ELV大鼠双侧睾丸有严重的累进性病理改变 ,这可能是精索静脉曲张不育的主要原因之一。该模型为研究青春期精索静脉曲张的病理生理及其对附睾的影响提供了有用工具     

青春期大鼠实验性精索静脉曲张对附睾雄激素受体的影响

目的　研究实验性左侧精索静脉曲张(ELV)对附睾雄激素受体的影响。方法　建立青春期大鼠 ELV模型,通过免疫组化及蛋白印迹方法,研究ELV 4周组、8周组与正常对照组附睾雄激素受体表达之间的差异。结果　雄激素受体分布于附睾管各段上皮的细胞核内,ELV 4 周组附睾内雄激素受体的表达比 4 周正常对照组明显增强(P<0.01),而ELV 8周组附睾内雄激素受体表达比ELV 4周组及8周正常对照组均减弱(P<0.01),同组左右侧附睾间未见雄激素受体表达有明显差异(P>0.05)。结论　青春期大鼠ELV可导致雄激素受体表达异常,这可能是造成不育或生育力低下的原因之一。     

三氧化二砷诱导人胃癌裸鼠移植瘤细胞凋亡及其对Fas/FasL表达的影响

目的 探讨三氧化二砷(As_2O_3)对Fas/FasL表达的影响及其在诱导肿瘤细胞凋亡中的作用.方法 雄性BALB/C-nu/nu裸鼠30只,建立人胃癌裸鼠移植瘤模型后,随机分为3组,即对照组、As_2O_3低剂量组和As_2O_3高剂量组.As_2O_3低剂量组和高剂量组分别按2.5mg/kg和5mg/kg剂量给予As_2O_3腹腔注射治疗;对照组给予等体积生理盐水.测量瘤块体积观察肿瘤的生长情况;采用电镜观察和原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤细胞的凋亡情况;采用免疫组化法检测Fas/FasL的表达.结果 As_2O_3治疗组瘤块的平均体积均显著小于对照组(P<0.05);As_2O_3治疗组肿瘤组织中凋亡细胞的数量较对照组显著增多(P<0.01);As_2O_3治疗组肿瘤细胞的Fas表达显著高于对照组(P<0.05),但FasL的表达两组间无显著性差异(P>0.05).结论 As_2O_3对人胃癌移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与上调Fas表达、诱导胃癌细胞凋亡有关.     

THE EFFECT OF FCγ RECEPTOR ON THE PATHOGENESIS OF GRAVES'' DISEASE

Objective To explore the roles of Fcγ receptor in the pathogenesis of Graves' disease. Methods Fcγ receptor gene knockout mice(Fcγ R KO mice) which were rooted in C57BL/6 mice and wild type C57BL/6 mice were immunized by hTSH receptor expressing cells (DAP3.WT).1-2×107 DAP3.WT cells were peritoneally injected into mice every two weeks for a total of six times.Two weeks after final immunization, mice were killed for measurement of total thyroxine,TRAb and pathological examination.Results The thyroxine level of the immunized Fcγ receptor gene knockout mice was significantly lower than that of the immunized wild type control mice (2.2±0.31 vs.3.32±0.59g·dL-1,P<0.05), but there was no significant difference between immunized Fcγ R KO mice and non-immunized wild type control group.The TRAb levels of the immunized Fγ R KO mice significantly increased compared to those of the immunized wild type mice (21.75±8.21 vs.14.11±6.21, P<0.05). The lymphocyte cells infiltration and destruction of thyroid follicles were found in the thyroid gland of the immunized Fcγ R KO mice. Conclusion　These results suggest that Fcγ receptor may be involved in the pathogenesis of Graves'disease.     

EXPRESSION CLONING OF A PROTECTIVE LEISHMANIA ANTIGEN

ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＣＬＯＮＩＮＧＯＦＡＰＲＯＴＥＣＴＩＶＥＬＥＩＳＨＭＡＮＩＡＡＮＴＩＧＥＮＥ．Ｍｏｕｇｎｅａｕ，Ｆ．Ａｌｔａｒｓ，Ａ．Ｅ．Ｗａｋｉｌ，ＺｈｅｎｇＳｈｉｃｈｕｎ；Ｔ．Ｃｏｐｐｏｌａ，Ｚ．Ｗａｎｇ，Ｒ．Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｒ．Ｍ．Ｌｏｃ...     

Tex13基因非放射性原位杂交探针的制备

目的研究制备地高辛(DIG)标记的Tex13(testis expressed gene 13)基因非放射性原位杂交探针,用于检测小鼠性腺Tex13基因的表达。方法采用RT-PCR方法扩增Tex13靶序列,将其插入带SP6和T7 RNA聚合酶启动子的pGEM-T Easy质粒,转入大肠杆菌DH10B,经蓝白斑筛选获得重组质粒,用T7和SP6引物对重组质粒进行PCR扩增,以此PCR产物为模板,以DIG RNA Labeling Mix为底物,经SP6 RNA聚合酶和T7 RNA聚合酶体外转录,分别制备DIG标记的反义链和正义链RNA探针。结果应用正常小鼠睾丸组织非放射性原位杂交实验,证实制备的探针具有较高的特异性和敏感性。结论 DIG标记Tex13基因杂交探针的成功制备,为进一步研究Tex13基因在小鼠性腺中的表达定位和发育规律以及它在减数分裂过程中的作用提供了实验基础。     

快速老化小鼠的学习记忆缺陷及其生化机制

目的用快速老化小鼠(SAMP8)模拟老年痴呆,观察其学习记忆能力,并探讨其学习记忆能力下降的可能机制。方法采用10月龄SAMP8,并用同龄抗快速老化小鼠(SAMR1)作为正常对照。用水迷路检测近记忆以及空间学习记忆能力。用生物化学方法检测大脑皮层线粒体膜电位和ATP酶活力,观察线粒体功能;检测皮层和海马胆碱乙酰基转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的活力,观察中枢胆碱能神经功能;检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,观察其全身性氧化应激状况。结果与SAMR1相比,SAMP8出现明显的衰老体征,其近记忆和空间学习记忆能力明显减弱,具有衰老和痴呆特征;皮层线粒体膜电位和ATP酶活力显著降低,海马ChAT活力显著下降,AChE活力显著升高,血清SOD活力稍有增高。结论SAMP8可以很好地模拟老年痴呆,其机制包括大脑皮层线粒体功能降低、海马胆碱能神经功能下降以及氧化应激等。