外源性p16基因对肾癌细胞周期及体外增殖的影响

目的　观察外源性 p16基因对肾癌细胞周期的影响及其对肾癌细胞的生长抑制作用。方法　利用携带人 p16基因的真核表达载体,采用脂质体介导法将其导入人肾癌细胞系 GRC- 1 中,观察其对瘤细胞的作用。结果　①免疫组织化学方法检测显示转染 p16基因的GRC 1细胞可显著表达 p16蛋白。②流式细胞仪检测证明,外源性 p16 基因可在肾癌细胞周期G1期到S期发挥抑制作用。③与对照组相比,转染 p16 基因的 GRC- 1 细胞生长明显受到抑制。结论　外源性 p16基因具有细胞周期特异性地抑制肾癌细胞生长的作用。     

反义C-myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制

针对C－mycmRNA第二外显子起站码AUG及下游4个密码子设计合成了反斗、正义及错配寡核苷酸（ODNS），并对合成的ODNs进行了疏代磷酸化修饰。在人肝癌细胞SMMC－7721培养体系中，对反义寡核苷酸（ASODN）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现①与正义和错配ODNs相比较，反义C－mycODN有明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的作用;②该生长抑制作用随ASODN剂量增加而增强，随ASODN作用时间而变化;③流式细胞计数仅测定证明反义C－mycODN主要阻断肝癌细胞增殖周期的G1到S期。结果提示：反斗C－mycODN在体外有序列特异性和细胞周期特异性抑制人肝癌细胞的生长作用，且该抑制作用与ASODN作用时间及剂量有关。     

Cyclin D_1反义寡核苷酸对人黑色素瘤细胞周期的影响及对细胞增殖抑制作用的研究

目的　探讨cyclinD1反义寡核苷酸对人黑色素瘤的潜在治疗作用。方法　合成针对cyclinD1翻译起始部位序列的 2 0bp硫代反义寡核苷酸 (AS ODN)。采用流式细胞仪检测细胞周期的分布 ,用台盼蓝计数、集落形成抑制试验体外观察AS ODN对人黑色素瘤细胞增殖的影响。结果　cyclinD1反义寡核苷酸能增加G1期细胞百分比 ,降低S期细胞百分比 ,且明显抑制人黑色素瘤细胞生长和集落形成。结论　CyclinD1反义寡核苷酸能有效抑制人黑色素瘤细胞的增殖。     

中药甘露1号抑瘤作用的研究

目的　探讨中药甘露 1号的抑瘤作用及其机制。方法　采用在体、离体动物实验观察中药甘露 1号煎剂对接种S 1 80的LACA小鼠、TCR小鼠的抑瘤作用及对SMMC 772 1人肝癌细胞生长的抑制作用。结果　该煎剂对接种S 1 80的LACA小鼠、TCR小鼠的抑瘤率为 32 3% 55 4% (P <0 0 1 )。但甘露 1号 +MTX(氨甲喋呤 )复合组的抑瘤率不高于单用MTX的抑瘤效果。在细胞培养实验中 ,其对SMMC 772 1人肝癌细胞生长的抑制随其浓度的提高而增加 ,呈线性关系。结论　甘露 1号煎剂对在体动物实验和细胞实验均显示了抑制肿瘤生长的作用     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞株COC1发生G_1期阻滞

目的研究三氧化二砷(As2O3)诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡的作用机理。方法用不同浓度的As2O3溶液作用人卵巢癌细胞株COC1,于不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态学特征,流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期的变化。结果随着药物浓度的升高、作用时间的延长,As2O3对COC1细胞的生长抑制率逐渐升高,具有浓度和时间依赖性;COC1细胞在1.5μmol/LAs2O3作用48h就出现了凋亡形态学改变,且随着作用时间的延长凋亡细胞数量增多;在3.0μmol/L、1.5μmol/LAs2O3作用下COC1出现了明显的凋亡峰,细胞周期也出现了随着药物作用时间的延长G1期细胞比例逐渐上升,S期、G2/M期细胞的比例同时降低的现象,提示As2O3对人卵巢癌细胞株COC1有明显周期特异性生长抑制作用。结论As2O3可以诱导卵巢癌细胞株COC1发生凋亡,诱导细胞发生G1期阻滞是As2O3抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

体外观察紫杉醇对人胆管癌细胞QBC939凋亡的诱导作用

目的观察微管稳定剂紫杉醇对胆管癌QBC939细胞的作用。方法MTT法检测紫杉醇对QBC939细胞的抑制作用;光镜和电镜观察紫杉醇作用后细胞形态的变化;流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果随着药物作用时间的延长及浓度的增加,紫杉醇对QBC939细胞的增殖抑制作用就越明显。形态学及流式细胞仪分析显示S期及G2/M期阻滞和细胞凋亡。结论紫杉醇诱发的人胆管癌细胞的凋亡与细胞DNA合成期及分裂期阻滞密切相关。这一作用机制将为临床治疗提供理论依据。     

槲皮素对SGC-7901胃癌细胞生长及HSP70和EGFR表达的影响

目的观察槲皮素对胃癌细胞SGC-7901生长及HSP70和EGFR的影响。方法以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率,透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化,免疫组化检测HSP70和EGFR的表达。结果台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC-7901细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的IC50为14.12μmol/L。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,流式细胞仪检测表明经10-20μmol/L的槲皮素处理,SGC-7901细胞周期阻滞于G0/G1期,经10μmol/L槲皮素处理的SGC-7901下调HSP70和EGFR蛋白的表达。结论槲皮素能抑制胃癌细胞的生长,呈时间剂量依赖性,能诱导SGC-7901发生凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调HSP70和EGFR的表达有关。     

丹参酮ⅡA对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响

目的体外实验检测丹参酮ⅡA(TanⅡA)对SGC-7901人胃腺癌细胞增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外常规培养SGC-7901人胃腺癌细胞用于实验,经TanⅡA作用后,采用MTT比色法检测细胞增殖情况,电镜及流式细胞仪观察胃腺癌细胞凋亡及细胞周期分布。结果TanⅡA对胃腺癌细胞的生长有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);TanⅡA作用后胃腺癌细胞表现为凋亡特征性的形态改变;TanⅡA可时间依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡。结论TanⅡA对体外培养的SGC-7901人胃腺癌细胞的生长有明显的抑制作用和诱导凋亡的作用,其可能的机制为TanⅡA可将细胞阻滞于G0/G1期,使其不能进入S期。     

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的　观察脂质体 (LR)介导c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对高表达基因c myc的人肝癌细胞SMMC 772 1裸鼠移植瘤生长的影响。方法　人肝癌细胞株SMMC 772 1以 1.5× 10 6 分别接种于裸鼠背部皮下 ,第 14天均生长出瘤结节 [大小为 (4± 1)mm]后 ,分为实验组、空白对照组和错配链寡核苷酸对照组三组。实验组用脂质体包裹的10 μmol·L- 1 浓度ASODN每天一次直接瘤体注射 ,连用 5d ,观察 2 8d。结果　测量裸鼠瘤体外表 ,发现第 5天ASODN组瘤体明显小于对照组 (P <0 .0 5 ) ,瘤质量在第 2 8天后ASODN组明显轻于对照组 (P <0 .0 5 )。组织学HE染色显示瘤体组织在实验组较对照组坏死明显 ,免疫组化结果显示C myc蛋白表达在实验组较对照组降低。 结论　推测应用脂质体包裹ASODN可能对人肝癌细胞SMMC 772 1成瘤的组织细胞生长有一定的抑制作用     

镓盐对人胃癌MGc_（80－3）细胞DNA合成的影响及其抑瘤机制

采用细胞培养，￣３Ｈ－ＴｄＲ同位素示踪及ＭＴＴ显色技术观察了氯化镓（ＧａｌｌｉｕｍＣｈｌｏｒｉｄｅ，ＧＣ）对人胃低分化粘液腺癌ＭＧｃ_（８０－３）细胞株的生长抑制作用及ＤＮＡ合成的影响，并以铁为实验因子探讨镓抑瘤作用机制。结果表明：稼能使ＭＧｃ_（８０－３）人胃癌细胞￣３ＨＴｄＲ掺入显著减少，抑制癌细胞ＤＮＡ合成。镓不仅使癌细胞生长抑制，还可使癌细胞死亡。这种抑制作用可被Ｆｅ￣（＋３）的加入而减弱。提示：ＧＣ抑制癌细胞生长的机制可能与癌细胞铁利用障碍致ＤＮＡ合成低下有关。     

脂质体技术促进c-myc反义寡核苷酸导入人体肝癌细胞的作用

观察脂质体技术促进 c- myc反义寡核苷酸导入人体肝癌细胞的作用。方法　采用新一代脂质体 Lipofect AMINE( LR)包裹针对肝癌表达基因 c- myc反义寡核苷酸 ( ASODN) ,借助FITC荧光标记 c- myc- ASODN,应用细胞培养方法及荧光分光光度计以及荧光显微镜。结果　LR促进 ASODN进入靶细胞并增强其对肿瘤细胞基因的特异性封闭作用。结论　脂质体作为一种安全、简便、有效的基因转移载体广泛适用医学科研     

褪黑素对人食道磷癌Eca-109细胞的生长抑制作用

目的　研究国产褪黑素对人食道磷癌Eca 10 9细胞的生长抑制作用及其作用机理。方法　采用不同浓度的褪黑素通过体外细胞培养、MTT显色技术研究其抑制作用 ,通过流式细胞仪和透射电子显微镜技术观察 ,对其作用机理进行探讨。结果　褪黑素对人食道磷癌Eca 10 9细胞具有抑制作用 ,其IC30 、IC50 分别为 0 .89、1.6 0mmol·L- 1 。以IC30 的褪黑素处理Eca 10 9细胞 ,使其倍增时间由 33.6h延长到 39.4h。流式细胞仪观察到褪黑素可导致Eca 10 9细胞G0 G1 期比例升高 ,S期比例降低。透射电镜可观察到以IC30 的褪黑素处理的细胞 ,其超微结构发生了退行性改变。结论　褪黑素对人食道磷癌Eca 10 9细胞具有抑制作用 ,其作用机理可能是褪黑素导致细胞周期从G1 到S阶段的推迟进行     

反义寡核苷酸抑制人恶性黑素瘤A375细胞survivin mRNA及其蛋白的表达

目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞survivin mRNA及蛋白表达的影响。方法人工合成survivin ASODN,脂质体介导转染人恶性黑素瘤细胞株A375,采用原位杂交、免疫组化SP法检测survivin mRNA及其蛋白表达的变化。结果转染24 h后,ASODN组A375细胞survivin mRNA表达较对照组显著下调(P<0.01);转染48 h后,与对照组相比,ASODN组细胞的survivin蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论Survivin ASODN可下调A375细胞survivin mRNA的表达和survivin蛋白水平。     

EFFECT OF STENT ABSORBED c-myc ANTISENSE OLIGODEOXYNUCLEOTIDE ON SMOOTH MUSCLE CELLS APOPTOSIS IN RABBIT CAROTID ARTERY

Ｉｎｔｈｅｐａｓｔｆｅｗ ｙｅａｒｓ ,ｗｅｈａｖｅｗｉｔｎｅｓｓｅｄａｄｒａ ｍａｔｉｃ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｕｓｅｏｆｉｎｔｒａｃｏｒｏｎａｒｙｓｔｅｎｔｓ.Ｓｔｅｎｔｓｎｏｗａｃｃｏｕｎｔｆｏｒｏｖｅｒ 70 %ｏｆｐｅｒｃｕｔａ ｎｅｏｕｓｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌｃｏｒｏｎａｒｙａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ (ＰＴＣＡ ) .Ｈｏｗｅｖｅｒ,ｉｎ ｓｔｅｎｔｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓｒｅｍａｉｎｓａｍａｊｏｒｐｒｏｂ ｌｅｍ ,ｏｃｃｕｒｉｎｇｉｎ 2 0 %～ 30 %ｏｆｔｈｅｓｅ ｐｒｏｃ ｅｄｕｒｅｓ[1-3] .Ｉ…     

K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌靶基因表达的抑制作用

目的　观察针对于胰腺癌K ras基因点突变的反义寡核苷酸对靶基因表达的抑制作用。方法　脂质体将人工合成的针对于K ras基因第 12位密码子点突变的反义寡核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC 2 ,用免疫组化和原位杂交技术检测靶基因的表达。结果　转染 4 8h后 ,反义寡核苷酸作用组胰腺癌细胞株PC 2的ras蛋白和K rasmRNA的表达程度较正义组和对照组均明显降低 (P <0 .0 5 )。结论　针对于K ras基因点突变的反义寡核苷酸作用于体外培养的胰腺癌细胞 ,对靶基因的表达有明显的抑制作用     

褪黑素对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的　观察褪黑素对人肝癌 SMMC- 772 1细胞生长抑制作用及其作用机理。方法　采用不同浓度的褪黑素通过体外细胞培养、MTT显色技术研究其抑制作用 ,以流式细胞仪和电子显微镜技术观察其作用机理。结果　褪黑素对人肝癌 SMMC- 772 1细胞具有抑制作用 ,其 IC30 、IC50 分别为 1 .1 0和 2 .0 0 mmol/L。以 IC30 的褪黑素处理 SMMC- 772 1细胞 ,使其倍增时间由 2 1 .1 h延长到 38.4h。流式细胞仪观察到褪黑素导致 SMMC- 772 1细胞 G0 /G1期比例升高 ,S期比例降低。透射电镜可观察到以 IC30 的褪黑素处理的细胞 ,其超微结构发生了退行性改变。结论褪黑素对 SMMC- 772 1细胞具有抑制作用 ,其作用机理可能是褪黑素导致细胞 G0 /G1阶段的推迟进行     

Cathepsin B antisense oligodeoxynucleotide suppresses invasive potential of MG-63 cells

Objective To study the biological effects of cathepsin B phosporotbioated antisense oligodeoxynucleotide on human osteosarcoma cell line MG-63 after transfection. Methods A 18-mer phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotide (ASODN) targeted against the cathepsin B mRNA was transfected into the human osteosarcoma cell line MG-63 by lipofectamine 2000. The sense and nonsense oligodeoxynucleotides to cathepsin B and blank vector were used as controls. The expression of cathepsin B mRNA was examined by RT-PCR and the expression of cathepsin B was examined by Western blot. The invasive capability of MG-63 cells was evaluated by the boydern chamber assay. Results The expression of cathcpsin B was obviously inhibited in antlsense oligodeoxynucleotide treated cells compared with the control cells. The number of invading MG-63 cells was significantly lower in the ASODN-treated groups than that in the control groups. Conclusion The cathepsin B ASODN significantly inhibits the expression of cathepsin B and invasive ability of MG-63 cell in osteosarcoma.