AG490抑制M2样巨噬细胞JAK2/STAT3通路影响胃癌细胞增殖和凋亡

目的 探讨JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490对M2样巨噬细胞功能表型的调控作用,以及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法 采用佛波酯(PMA)体外诱导人单核细胞系THP-1分化为M0型巨噬细胞,分别用脂多糖(LPS)和干扰素-γ(IFN-γ)诱导为M1样表型,IL-4和IL-13诱导为M2样表型,并应用免疫荧光标记CD68、CD86和CD206鉴定。RT-qPCR检测巨噬细胞的CD163、Arg1、CCL22、PPARγ、IL-10、IL-20和TNF-α的mRNA表达。Western blotting检测JAK2/STAT3信号通路关键蛋白表达。JAK2/STAT3抑制剂AG490处理M2样巨噬细胞,检测M2表型的标志基因。分别将巨噬细胞与胃癌细胞共培养,通过CCK-8法、划痕实验、Transwell小室基质胶侵袭实验及流式细胞术检测巨噬细胞对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。制备裸鼠MKN45胃癌异种皮下移植瘤模型,造模后连续20 d观察肿瘤大小及质量。结果 AG490处理的M2样巨噬细胞时,P38MAPK、JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达显著降低...     

华蟾素联合吉西他滨对肝癌HepG2细胞的抑制作用及对骨桥蛋白表达的影响

目的 探讨华蟾素、吉西他滨及华蟾素与吉西他滨联合对肝癌HepG2细胞增殖和凋亡情况的影响,研究华蟾素作用HepG2细胞后骨桥蛋白(OPN)表达的变化.方法 采用MTT法及流式细胞技术检测HepG2细胞对华蟾素、吉西他滨及华蟾素+吉西他滨的药物敏感性差异;采用免疫细胞化学法检测HepG2细胞中OPN的表达.结果 华蟾素和吉西他滨单药或联合用药对HepG2细胞的增殖呈抑制作用且呈现时间与浓度的依赖性,并能诱导HepG2细胞凋亡,联合组凋亡诱导作用强于单药组(P<0.05);华蟾素能下调HepG2细胞中OPN的表达.结论 华蟾素与吉西他滨联合对肝癌HepG2细胞具有协同抑制作用,可能通过抑制OPN的表达发挥抗癌作用.     

鸦胆子油脂质体对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的体内外研究

目的通过体外体内实验探讨鸦胆子油脂质体对人肝癌细胞株HepG2的影响及可能机制。方法利用鸦胆子油脂质体高剂量(5mg/L)、低剂量(2.5mg/L)体外作用于人肝癌细胞株HepG2,MTT比色分析法分析HepG2细胞生长抑制程度,流式细胞仪检测不同药物浓度作用下细胞的凋亡率,透射电镜下观察HepG2细胞形态变化。通过腹腔注射荷瘤裸鼠进行体内试验,观察鸦胆子油脂质体小剂量(12.5mg/L)、大剂量(25mg/L)对其肝脏的病理改变;TUNEL法检测肝脏肿瘤组织凋亡细胞。结果 MTT比色分析法实验结果显示鸦胆子油脂质体可明显抑制HepG2细胞增殖;透射电镜下观察5mg/L鸦胆子油脂质体在体外作用于HepG2细胞6h后,可见明显凋亡细胞形态出现。流式细胞仪检测随鸦胆子油脂质体作用强度和时间的增加,细胞抑制率逐步由33.31%提升至90.62%(P<0.01)。鸦胆子油脂质体腹腔注射组较阴性对照组动物模型死亡时平均体重增加,肿瘤转移率下降(P<0.01);TUNEL法亦提示鸦胆子油脂质体组凋亡细胞率增加(P<0.01)。结论鸦胆子油脂质体对HepG2细胞在体内体外具有抑制增殖的作用,并可诱导肿瘤细胞凋亡。     

NT4p53(C22)Ant融合基因重组腺病毒的构建及对肝癌细胞的杀伤作用

目的构建编码融合基因NT4p53(C22)Ant嵌合肽的重组腺病毒表达载体,并研究其对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用。方法使用分子克隆技术,通过同源重组获得重组腺病毒rAVV-NT4p53(C22)Ant,收集上清、大量扩增并测定其滴度。感染人肝癌HepG2细胞,采用免疫组化法检测p53表达,MTT实验、流式细胞仪观察rAAVNT4p53(C22)Ant对肿瘤细胞的杀伤作用。结果成功构建重组腺病毒表达载体,感染人肝癌HepG2细胞后p53表达率为(44.88±2.45)%;MTT检测显示,细胞存活率随作用时间延长明显降低,与空病毒组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),流式细胞仪检测显示G0/G1期细胞比例及凋亡细胞较空病毒组及对照组增加。结论构建的NT4p53(C22)Ant重组腺病毒在肝癌细胞中能有效表达,对肝癌HepG2细胞有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

ADAM10基因对肝癌细胞HepG2生物学特性的影响

目的探讨ADAM10基因对肝癌细胞HepG2增殖、侵袭、迁移等生物学特性的影响。方法采用RNA干扰的方法抑制肝癌细胞HepG2中ADAM10基因的表达,通过细胞增殖实验和集落形成实验检测该基因沉默前后肝癌细胞HepG2增殖等生物学特性的改变,通过细胞侵袭实验和细胞迁移实验检测HepG2侵袭、迁移等生物学特性的改变。结果 ADAM10基因沉默后细胞增殖能力下降(P<0.05);细胞体外侵袭能力、迁移能力显著下降(P<0.05)。结论 ADAM10基因表达变化参与原发性肝癌的发生、发展,ADAM10基因的高表达能促进肝癌细胞HepG2的增殖、侵袭和迁移能力。     

siRNA沉默EZH2基因对人宫颈癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨靶向沉默EZH2基因对宫颈癌细胞侵袭转移的影响及其分子机制。方法采用化学合成siRNA瞬时转染人宫颈癌C33A细胞,沉默EZH2基因的表达。通过细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验、软琼脂克隆形成实验,观察沉默EZH2对宫颈癌细胞迁移、侵袭及体外成瘤能力的影响,Western blot法检测MMP2的表达变化。结果 EZH2siRNA转染C33A细胞后,细胞划痕及Transwell小室侵袭实验结果均显示宫颈癌细胞的迁移、侵袭能力明显减低,差异具有统计学意义;软琼脂克隆形成实验表明,EZH2沉默后克隆形成数目明显减少,差异具有统计学意义;Western blot结果显示MMP2表达水平下调。结论沉默EZH2基因表达能显著抑制宫颈癌C33A细胞的侵袭转移能力,其作用机制可能通过下调MMP2来实现。     

沉默肝星状细胞神经菌毛素-1抑制肝癌生长的实验研究

目的探讨沉默肝星状细胞神经菌毛素-1(neuropilin-1,NRP-1)表达后,是否会影响其对肝癌的促生长作用,并初步探讨可能存在的作用机制。方法细胞免疫荧光及细胞荧光双重染色观察NRP-1在肝星状细胞LX2中的表达及其与血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)的共表达;MTT法检测沉默肝星状细胞NRP-1后对肝癌细胞体外增殖能力影响;建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型,绘制生长曲线,免疫组化法观察各组瘤体α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、NRP-1、PDGFR-β表达强度的差异。结果 LX2表面存在NRP-1表达,且NRP-1与PDGFR-β共表达于LX2;沉默LX2NRP-1后对HepG2促增殖作用降低(P<0.05);NRP-1KG移植瘤体积较NRP-1CG、NRP-1NG小(P<0.05),进一步对各组瘤体行免疫组化染色并进行表达强度积分分析,发现NRP-1KG瘤体间质NRP-1、PDGFR-β表达均较NRP-1CG弱(χ~2=25.89,P<0.05;χ~2=28.12,P<0.05)。结论沉默肝星状细胞NRP-1表达后,其对肝癌细胞促增殖作用降低,在体内环境中其对肝癌皮下移植瘤促生长作用也降低,其机制与肝星状细胞活化减弱有关,而肝星状细胞NRP-1表面共受体PDGFR-β表达减弱也可能参与这一过程。     

LncRNA LOC90024对肺癌细胞生长、迁移和侵袭的影响

目的探索新长链非编码RNA(LncRNA)LOC90024对肺癌A549细胞生长、迁移和侵袭的影响。方法 RTqPCR检测LOC90024在人肺癌细胞和人正常肺上皮细胞的表达水平。构建LOC90024过表达质粒并在A549细胞内表达,RT-qPCR检测LOC90024表达效果,MTT、划痕实验和Transwell小室法分别检测LOC90024对A549细胞生长、迁移和侵袭的影响。结果成功构建LOC90024过表达质粒,RT-qPCR结果证实实现过表达;RT-qPCR结果显示LOC90024在肺癌细胞的表达高于人正常肺上皮细胞;MTT检测结果显示在A549细胞中过表达组较空载体组吸光值显著增加;划痕实验结果显示过表达组与空载体组相比,细胞划痕愈合能力明显增加;Transwell小室实验结果显示过表达组细胞穿膜数较空载体组明显增加,A620的吸光度值增高。结论过表达LOC90024可促进肺癌细胞A549的生长、迁移和侵袭能力,提示LncRNA LOC90024可能在肺癌发生发展中发挥癌基因的作用,有望成为肺癌治疗的新靶点。     

姜黄素对裸鼠人ACHN肾癌移植瘤的放射增敏作用

目的探讨姜黄素对裸鼠人ACHN肾癌移植瘤的放射增敏作用及其机制。方法建立人ACHN肾癌裸鼠皮下移植瘤模型;筛选合适的姜黄素浓度和放射性剂量进行实验;随机分组进行药物或放射线干预,观察不同处理组裸鼠移植瘤生长情况,确定姜黄素对裸鼠移植瘤的放射增敏作用;采用流式细胞仪检测不同组移植瘤细胞凋亡;Western blot检测不同组DNA损伤修复相关蛋白DNA-PKcs和NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果细胞悬液接种法可成功建立人ACHN肾癌移植瘤模型,成瘤率85.7%;采用总剂量10 Gy放射剂量和25 mg/kg姜黄素进行实验;移植瘤生长曲线显示姜黄素组、放射组和实验组的抑瘤率分别为7.93%、49.20%、71.42%,实验组对移植瘤生长抑制效果明显高于姜黄素组及放射组(P<0.05),放射增敏率(E/O)值=1.64>1.4;与放射组相比,实验组的凋亡率显著升高(P<0.05),DNA-PKcs和NF-κB P65蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),I-κB蛋白的表达显著升高(P<0.05),NF-κB下游调控蛋白VEGF、COX_2和Bcl-2蛋白的表达水平亦显著降低(P<0.05)。结论姜黄素对人ACHN肾癌裸鼠移植瘤具有放射增敏作用;姜黄素的放射增敏作用与其诱发肿瘤细胞凋亡、抑制DNA损伤修复和抑制NF-κB信号通路的激活密切相关。     

携带CIP2A shRNA重组腺相关病毒载体的构建及其鉴定

目的构建携带CIP2AshRNA重组腺相关病毒载体,制备靶向性沉默CIP2A表达的高浓度重组腺相关病毒。方法设计合成CIP2AshRNA,退火形成双链与pDC316-EGFP-U6质粒BamHⅠ和HindⅢ双酶切产物相连接构建形成质粒pDC316-EGFP-CIP2AshRNA,以鉴定正确的pDC316-EGFP-CIP2AshRNA克隆为模板PCR扩增EGFPCIP2AshRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切PCR扩增产物及pSNAV2.0质粒后进行连接形成重组质粒pSNAV2.0-EGFP-CIP2AshRNA,建立载体细胞株BHK/CIP2A-shRNA,采用AAV MaxTM包装系统大规模制备rAAV2-EGFPCIP2AshRNA并对其纯化及滴度测定。将rAAV2-EGFP-CIP2AshRNA感染肝癌细胞HepG2,利用空载病毒载体rAAV2-EGFP作对照,采用Real-time PCR及Western blot方法检测CIP2AshRNA基因沉默效果。结果携带编码CIP2AshRNA腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-EGFP-CIP2AshRNA经双酶切及测序鉴定,质粒构建正确;将重组质粒与辅助病毒HSV1-rc/ΔUL2共转染包装细胞BHK-21,成功制备重组腺相关病毒rAAV2-CIP2AshRNA,经测定纯化所得rAVV2病毒滴度为0.25×1012v.g./mL。筛选MOI值为1×105感染肝癌细胞HepG2,CIP2A mRNA及蛋白表达水平分别于感染后24h和48h与对照细胞相比出现明显下降。结论成功制备高滴度携带CIP2AshRNA重组腺相关病毒载体rAAV2-CIP2AshRNA。     

以“二进二出二结合”为依托,构建高校就业指导课程教学体系初探

当前各高校就业指导课程体系存在诸多问题,若想改变其现存困境,各高校需更新就业指导理念,重新建构高校就业指导课程体系。本文依据多年就业指导课程教学实践,创新性地分析了高校就业指导课程的隶属属性,创新教学模式,提出了以"二进二出二结合"为依托,构建高校就业课程教学体系的方法。     

Al2O3-SiO2-ZrO2复合膜的热稳定性研究

主要探讨了引入SiO2和ZrO2对Al2O3薄膜热稳定性的影响，并采用DTA、XRD和SEM等分析方法对其进行了研究，结果表明，1000℃煅烧后的复合膜中，主晶相为γ-Al2O3和t—ZrO2，SiO2以无定形态存在，1200℃热处理后的复合膜中仍然没有发生γ-Al2O3，向α—Al2O3的相变。     

烧绿石Tl2Mn2O7的半金属磁体特性研究

本文应用从头计算方法研究了烧绿石Tl2Mn2O7的电子结构和磁性质。通过对电子结构的分析，我们发现Tl(6s)-O(2p)-Mn(3d)轨道的杂化对半金属磁性起着重要的作用。     

关于SiO_2-B_2O_3-Al_2O_3-MgO-K20-F系可加工玻璃陶瓷的研究

研究了化学成分、热处理工艺等因素对SiO_2-B_2O_3-Al_2O_3-MgO-K_2O-F系可加工玻璃陶瓷的组织和性能的影响。改变化学成分可影响玻化及结晶过程。结果表明,降低MgO、Al_2O_3的含量,可降低玻化温度;Al_2O_3强烈抑制失透;F对玻化过程的影响不大,但在晶化过程中起形核剂的作用。在结晶处理过程中,随着核化温度的升高,核化时同的延长,晶体的形核率增高,晶体的体积百分数增大。晶体的体积百分数越高,纵横比越大,玻璃陶瓷的可加工性越好。     

纳米固体超强酸SO2-4/ZrO2-La2O3催化合成环己烯研究

制备了纳米固体超强酸催化剂SO2-4/ZrO2-La2O3,并利用该催化剂催化合成了环己烯,探讨了SO2-4/ZrO2-La2O3对环己醇脱水生成环己烯反应的催化活性,较系统地研究了La3 离子浓度、硫酸浓度、焙烧温度、催化剂用量、反应温度和反应时间等因素对产品环己烯收率的影响.实验结果表明,SO2-4/ZrO2-La2O3是催化环己醇脱水生成环己烯的良好催化剂,在La3 离子浓度为0.09 mol·L-1,硫酸浓度1.0 mol·L-1,焙烧温度为500 ℃、焙烧时间3 hr,催化剂用量为环己醇质量的5%,反应温度为180 ℃,反应时间为60 min,收率达80.66%.     

基2FFT算法的研究与改进

对非２的整次幂长并序列进行补零，成为２的整次幂序列后应用ＦＦＴ算法计算频谱。本文通过大量实例计算，统计出补零个数与准确频谱线条数之间的关系，因此根据技术要求可查表决定补零个数，对于补零后的序列，含有大量的零元素，为了提高计算速度，本文提出了改进基２ＦＦＴ频率抽取法的算法，在一定的技术要求条件下，有效地提高了算法的计算速度。     

新型多酸化合物POM-290 d毒性试验

目的 观察新型多酸化合物POM-2长期应用对正常大鼠的毒传作用.方法 将POM-2以1/10 LD50、1/50LD50和1/100 LD50三个剂量给大鼠连续灌服90 d,并持续观察15 d,观察动物一般情况、血常规、肝肾功能及组织学指标变化,测量大鼠的体重、脏器系数,并进行组织病理学检查.结果 与对照组相比,POM-2各剂量组大鼠的血常规,血液牛化等指标无明显变化,主要脏器系数均无明显差异,组织病理学检查结果显示各组动物主要脏器均无毒性病理件改变.结论 该化合物未显示出明显的毒副作用,停药后未见药物延迟毒性反应.     

共轭曲面第二类问题的数字仿真

已知两曲面,在既定的位置条件下,求传动的接触域及速比关系属于共轭曲面的第二类问题,也是该领域的难点问题之一,用传统的方法解决起来非常复杂.论文提出一种数字仿真新方法,以现代计算技术为手段,可充分模拟包含位置误差因素在内的齿面的真实接触,并获得实际速比关系.论述其原理与计算过程,并给出阿基米德蜗杆传动的具体算例.     

共轭曲面第二类问题的数字仿真

已知两曲面，在既定的位置条件下，求传动的接触域及速比关系属于共轭曲面的第二类问题，也是该领域的难点问题之一，用传统的方法解决起来非常复杂．论文提出一种数字仿真新方法，以现代计算技术为手段，可充分模拟包含位置误差因素在内的齿面的真实接触，并获得实际速比关系．论述其原理与计算过程，并给出阿基米德蜗杆传动的具体算例．     

H2O2对黄瓜不定根形成中抗氧化酶活性的影响

研究了外源H2O2和IBA处理对黄瓜幼苗外植体不定根发生过程中0～48 h时间段内过氧化物酶(POD,peroxidase,EC1.11.1.7)、抗坏血酸过氧化物酶(APX,apoplastic peroxidase,EC1.11. 1.11)、过氧化氢酶(CAT,catalas,EC1.11.1.6)和超氧化物歧化酶(SOD,superoxide dismutase,EC1.15.1.1)4种抗氧化酶活性的影响.结果表明,在黄瓜不定根形成的诱导与起始阶段,POD和APX活性变化完全一致,呈逐渐升高的趋势,CAT活性呈现降-升-降-升的变化,SOD活性变化呈对数曲线.H2O2处理显著降低了不定根诱导阶段和起始阶段POD与APX活性,显著降低了诱导阶段CAT和SOD活性;IBA处理对诱导阶段POD和APX活性影响不显著,却显著升高了起始阶段POD和APX活性,对CAT和SOD活性的影响与H2O2处理基本相同.H2O2对不定根形成的作用机理可能与IBA相同.