介导p73去阻抑肽表达的重组腺伴病毒的构建和鉴定

目的构建编码融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT的重组腺伴病毒表达载体,为恶性肿瘤基因治疗的实验研究奠定基础。方法采用互补引物二次PCR法以及T载体克隆法获得p53(N37)基因克隆,酶切后将其连同穿膜肽HA2-TAT片段一起连入pUC19/NT4质粒,再将融合基因NT4-p53(N37)-HA2-TAT亚克隆至腺伴病毒的穿梭质粒pSSHG-CMV中,构建重组质粒pSSHG-CMV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT并进行酶切鉴定;应用磷酸钙沉淀法,pSSHG-CMV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT、辅助质粒pAAV-Ad,腺病毒全基因组质粒pFG140三种质粒共转染HEK293细胞,包装出重组腺伴病毒rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT并用斑点杂交法测定重组病毒的滴度;MTT比色法、流式细胞仪观察重组腺伴病毒rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT对HepG2细胞的抑制作用。结果克隆出p53(N37)基因,经酶切及测序证实结果正确;得到高滴度的(2×1013pfu/L)重组腺伴病毒表达载体并对HepG2细胞有明显的抑制作用,且这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的。结论通过分子克隆体外重组技术成功制备了rAAV/NT4-p53(N37)-HA2-TAT复制缺陷型重组腺伴病毒,为下一步开展在p53突变或缺失肿瘤中针对p73的靶向性肿瘤基因治疗研究奠定了基础。     

门机结构安全性评价指标体系的应用分析

对基于模糊理论的机械结构裂化指数及安全性评价与预测系统作简要的介绍,分析和研究系统的指标体系。根据实际使用的情况,对指标体系作出修改和完善,并在“16t带斗门机技术状态评价及安全使用期限预测”项目中进行了验证,效果较好。提出用层次分析法(AHP)和人工神经网络方法相结合确定指标体系中权重和状态指数的设想。     

实用可行的制动蹄片磨损报警器

由于城市客车特定的使用条件,制动非常频繁,车轮制动器的故障率和材料费用消耗在车辆维护成本中占有很大的比例,并且"保养周期里程"的主要依据也是从保证车辆行驶的安全性出发,这就使在强制性维护作业时,将能够继续使用但达不到一定行驶里程的车轮制动蹄片被更换而造成浪费.为物尽其用,最大限度地使用制动蹄片,拟在制动蹄片上安装蹄片厚度磨损报警器.当蹄片使用到极限厚度尺寸时,报警提示以及时进行维修更换.在保证制动效能的基础上节省蹄片的消耗,并保证制动鼓不因蹄片螺钉(铆钉)露头造成的损坏.     

GNSS-RTK技术在港口工程围堤水平位移监测中的应用分析

GNSS-RTK具有携带轻巧、使用方便、独立使用、实时快速高效获取三维坐标等优点,广泛应用于工程测量中,本文结合钦州港东航道扩建工程(一期)吹填区平整工程围堤变形监测中GNSS-RTK的应用及其与全站仪的应用对比,来介绍GNSS-RTK的原理并配合全站仪在围堤变形监测测量中应用及相应误差分析.     

浅谈装配式栅栏板施工技术

大体积栅栏板作为常用护面块体,广泛应用于设计等级较高的防波堤、护岸等水工建筑物中.梅山港6号至10号集装箱码头工程围堤工程围堤外护面采用大体积栅栏板结构.为解决大体积栅栏板因码头施工无法水上吊装和无法陆上运输的问题,本工程采用装配式栅栏板施工工艺.分析装配式栅栏板施工技术难点,通过三次精理块石垫层、优化横条固定措施、精...     

涡轮增压柴油机在脉冲负载下的瞬态特性仿真与试验研究

基于管内一维非定常流动和缸内容积法,搭建了废气涡轮增压柴油机仿真平台,其中包括气缸模型、进排气管路模型、涡轮增压模型、中冷器模型及喷油控制模型。进行了脉冲负载下废气涡轮增压柴油机瞬态工作过程模拟计算,结果显示,仿真值与试验数据有较好的一致性。同时,得到了涡轮增压柴油机在脉冲负载下的瞬态工作特性,并提出了一些脉冲负载下改进涡轮增压器和柴油机匹配的措施。     

有频率约束的船体结构优化设计

为完成某集装箱船艉部结构设计,建立具有频率约束的船体结构优化设计模型,采用不同的优化方案对艉部结构进行优化,在工程造价基本保持不变的条件下,使优化后的结构不仅固有频率满足频率储备要求,而且其构件分布更为合理。     

杭温铁路运营管理模式研究

目前我国铁路项目投融资方式不断创新,社会资本方参与铁路投资建设不断增加,开展铁路PPP项目运营管理模式研究将有利于推动项目持续推进。文章从目前运营管理模式出发,结合影响运营管理模式主要因素及项目公司实际,提出初期、近期、远期不同阶段运营管理模式,为社会资本方参与投资铁路项目运营管理模式创新提供参考。     

基于3DMAX软件的虚拟现实技术在建筑设计表现中的应用

本文介绍了虚拟现实这一新技术的相关概念、技术特征及关键技术，探讨在建筑设计表现中运用3DMAX软件制作虚拟现实场景，并进行实时浏览的方法和步骤。