新型EGFP标记的杆状病毒转移载体的构建及EGFP的制备

目的构建可表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的昆虫杆状病毒转移载体,利用Sf-9细胞表达、制备EGFP。方法用PCR法从pEGFP质粒中扩增EGFP基因,NcoⅠ/SalⅠ双酶切,克隆入杆状病毒转移载体NcoⅠ/SalⅠ酶切位点之间,获得pFB-EGFP质粒;转化E.coliDH10Bac,通过转座子Tn7的介导,获得重组杆状病毒Ac-EGFP;感染Sf-9昆虫细胞;利用激光共聚焦显微镜和SDS-PAGE观察并检测EGFP的表达。非变性法纯化EGFP。结果荧光显微镜和激光共聚焦显微镜证实感染的Sf-9细胞可表达EGFP;通过SDS-PAGE获得的EGFP,大小为27ku。结论重组pFB-EGFP载体具备表达EGFP的能力,为分子生物学研究提供了一种新型可表达EGFP融合蛋白的昆虫杆状病毒表达载体。     

HPV-6/11 L1/E6、HPV-6/11 L1/E7嵌合DNA疫苗质粒的构建

目的　构建HPV 6 / 11L1/E6、HPV 6 / 11L1/E7预防、治疗性DNA疫苗质粒。方法　运用PCR扩增HPV 6 /11L1、E6、E7序列 ,PCR产物连接至pGEMT Easy质粒 ,测序鉴定正确后 ,分别连接至真核表达载体pVAX ,再用酶切、连接而构建成HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX质粒。运用电穿孔法将所获得质粒转染COS 7细胞 ,免疫组化检测蛋白表达情况。结果　所构建质粒的插入目的片段测序正确 ;免疫组化检测在胞浆胞核可见棕黄色点状阳性产物沉积。结论　所构建的HPV 6 / 11L1 E6 /E7 pVAX融合蛋白表达质粒可在体外表达L1 E6 /L1 E7蛋白 ,为今后进行DNA疫苗的动物实验及临床实验研究做好准备     

氟对体外器官培养人牙胚骨形成蛋白表达的影响

目的　通过研究氟对牙胚发育早期骨形成蛋白 (BMP)表达的影响 ,初步探讨氟在早期牙胚发育中的可能作用机制。方法　 4个月的人胚胎 ,取乳牙胚用RPMI16 4 0培养液进行器官培养 8d。免疫组化法研究 2 5mg·L-1和 5 0mg·L-1的氟对分泌前期牙胚的影响 ,观察培养第 2、4、6、8天时BMP表达的变化。采用图像分析仪对免疫组化染色结果进行灰度分析。结果　BMP的表达主要在造釉器。成釉细胞 ,中间层细胞和星网状层细胞均有BMP表达 ,牙乳头细胞或成牙本质细胞不表达BMP。 2 5mg·L-1氟时从培养第 6天开始BMP表达增强 ;5 0mg·L-1氟时从培养第 2天到第 6天BMP的表达增强 ,培养第 8天时BMP的表达降低。结论　氟可能通过促进BMP某一亚型或某几个亚型的表达而在牙胚发育中起作用     

性腺动脉的应用解剖学

尸解观测性腺动脉的起始位置、支数、口径，与腹主动脉的夹角，与肠系膜下动脉起始处的距离、经行及其与肾蒂的关系，进行统计分析。发现左右两侧动脉口径间存在显著线性关系，建立线性方程。结合观测结果讨论了临床应用要点。     

新型自体肿瘤细胞疫苗治疗进展期肿瘤患者的免疫学检测

目的　探讨自体肿瘤疫苗的作用机制。方法　 2 0例进展期肿瘤患者术后第 4周开始以自体肿瘤细胞疫苗行主动免疫治疗。免疫接种共 4次 ,每次间隔 7～ 10d ;接种前 3d及第 4次接种后一周 ,采集外周血 ,分离单个核细胞 ,以流式细胞分析术 /细胞内细胞因子检测法测定CD8+ IFN γ+ ,CD8+ IL 10 + 细胞及CD4+ IFN γ+ ,CD4+ IL 10 + 细胞 ;同时采集血清 ,ELISA法检测血清IFN γ、IL 10水平。结果　自体肿瘤细胞疫苗治疗后 :①血清IFN γ水平升高 [(7.16± 2 .91)ng·L- 1升至 (11.68± 4.86)ng·L- 1,P <0 .0 5] ;而IL 10水平下降 [2 1.0 4± 13 .81)ng·L- 1降至 (13 .41± 5.71)ng·L- 1,P <0 .0 5] ;②CD8+ IFN γ+ 阳性细胞由 (3 .80± 1.45) %升至 (6.94± 2 .63 ) % ;CD4+ IFN γ+ 阳性细胞由 (3 .0 9± 1.52 ) %升至 (5.2 0± 2 .94) % (P <0 .0 5) ;③病人耐受良好。结论　自体瘤细胞疫苗免疫后可改善肿瘤患者细胞介导的抗瘤免疫反应     

兔髂动脉内膜受损后增生和c-myc基因的表达

研究兔髂动脉内皮剥脱时血管壁细胞的反应特点和 c- myc基因的表达规律。用标准血管成形导管髂动脉球囊损伤 1 2只家兔的右髂总动脉后 ,分别于 3、7、40 d处死动物 ,用透射电镜观察术后 3d平滑肌细胞 ( SMC)超微结构的变化 ,光镜观察术后血管壁细胞的反应特点和 c- myc蛋白表达规律 ,同时对术后 40 d动物行血管造影。结果发现 :术后 3d兔髂总动脉中层 SMC由收缩型转变为分泌型 ,并向内膜下迁移 ,可见管腔内有血栓形成 ,1周时弹力板不完整 ,中膜 SMC排列紊乱 ,术后 40 d增生的 SMC和细胞外基质形成新生内膜 ,血管造影显示管腔狭窄 5 0 %～ 80 % ;球囊损伤段髂总动脉新生内膜 c- myc蛋白免疫组化染色为阳性 ,而对照组为阴性。结论 :球囊损伤髂动脉后可引起 SMC迁移、增生 ,其和细胞外基质一起形成新生内膜 ,管腔狭窄 ;SMC增生和 c- myc基因表达密切相关。     

肺癌患者外周血T细胞亚群及免疫细胞活性的研究

采用 APAAP法和流式细胞仪研究 32例肺癌患者及 30例健康人外周血T细胞亚群及免疫细胞活性 ( NK- A)的变化。结果表明 :肺癌患者外周血 CD+3 、CD+4、CD+4/CD+8及 NK- A与正常人比较呈显著性降低 ( P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;且肺癌伴癌转移者与未转移者上述各项指标亦有显著性差异 ( P <0 .0 5 )。说明肺癌患者存在细胞免疫功能降低 ;伴有癌转移的肺癌患者细胞免疫功能更低。提出积极调节肺癌患者细胞免疫功能 ,增强机体抗肿瘤能力十分重要。     

脑肿瘤~(99m)Tc-MIBI脑SPECT显像的影像特征及应用价值

为探讨 99m Tc-甲氧基异丁基异腈 ( MIBI)脑 SPECT显像在脑肿瘤中的影像特征及应用价值 ,对 1 0例正常对照者和 30例脑内病变患者进行99m Tc- MIBI脑SPECT显像。结果 :对照组脑实质内均无核素浓聚 ,脑肿瘤组表现为阳性结果者 1 9例 ,显示出脑实质内有局限性核素浓聚 ;表现为阴性结果者 6例 ,均为脑肿瘤术后无复发者 ;5例非肿瘤组良性病变患者均表现为阴性结果。本组术前诊断脑肿瘤的灵敏度与特异性均为 1 0 0 %。表明该显像方法可用于脑肿瘤的诊断 ,尤其是发现并鉴别脑肿瘤术后残留、复发及软化灶形成。     

在校聋童视觉-运动整合发育测查

为了解聋童视觉 -运动整合发育水平 ,采用 Beery′s VMI测验对两个特殊教育学校的352名聋哑学生进行测试。结果表明 :聋童的 VMI发育在高年级学生中稍有落后 ,五、六年级学生的平均得分为 85。这个落后随着年龄的降低而逐渐减小 ,一年级学生的平均得分为 94 .0 2 ,而学前语训班学生得分最高 ,均分为 112 .0 6。结论 :总体上说 ,聋童的 VMI发育仍在正常范围 ;VMI测试结果能很好地反映聋童的学习能力 ;绘画训练是影响测试结果的一个明显因素。     

重组人单链白细胞介素12融合基因(rhscIL-12)的构建和真核表达

克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法　从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1 2 p40和 p35亚单位编码序列的 c DNA,运用重组 PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头 ( Gly4 Ser) 3 DNA序列进行体外基因重组 ,构建 rhsc IL- 1 2融合基因 ,将其插入 pc DNA3.1 ( + )真核表达载体 ,经脂质体转染 COS7细胞进行表达 ,Western blot进行分析。结果　所克隆的 h IL- 1 2 p40、p35c DNA序列和构建的 rhsc IL - 1 2融合基因 DNA序列均经测序得以证实 ,融合基因可在 COS7中表达其产物 rhsc IL- 1 2融合蛋白 ,其分子量为 70 KD,可与鼠抗人 IL - 1 2 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论　本研究结果为进一步探讨 rhsc IL- 1 2融合蛋白的生物学活性和特性奠定了基础 ,也为 rhsc IL- 1 2融合基因在原核细胞中的表达提供了可能性