CLONING AND EXPRESSION OF A GENE MEDIATING γ-RADIATION-INDUCED APOPTOSIS IN HL-60 CELLS

Apoptosis,orprogrammedcelldeath(PCD),isanintricatelyregulatedprocess">.Geneticstud-iesofapoptosisinCaenorhabditiseleganshavei-dentifiedced-3andced-4asproapoptoticgenesandced-9asanantiapoptoticgene"=-Severalmam-malianhomologuesofced-3,ced-4andced-9havebeenidentified.Recentstudiesindicatethatthefundamentalapoptosismachinery,whichconsistsofdistincteffectors,inhibitorsandinitiators,hasbeenconservedthroughoutevolution.Thekeyapoptosiseffectorsinmammalsareafamilyofcys-teine-containing,aspartate-spe…     

γ-射线诱导HL-60细胞凋亡相关基因的分离和鉴定

为明确参与γ 射线诱导ＨＬ ６０ 细胞凋亡的ｃａｓｐａｓｅ 家族成员,根据已知ｃａｓｐａｓｅ家族成员保守肽序列设计简并引物,经ＲＴ ＰＣＲ从凋亡ＨＬ ６０ 细胞ｍ ＲＮＡ扩增出一条带,通过基因克隆及序列测定进行鉴定。结果克隆出ｃａｓｐａｓｅ ３ ｃＤＮＡ的一段序列。说明ｃａｓｐａｓｅ ３ 参与了γ 射线诱导的ＨＬ ６０ 细胞凋亡,可能是该凋亡途径的枢纽元件     

γ-射线诱导HL-60细胞凋亡的观察

目的 观察γ-射线诱导HL-60细胞凋亡的时间和剂量效应,以探求辐射诱发肿瘤细胞凋亡分子机制。方法 分别以2.5、5、7.5、10、15Gy γ射线照射HL60细胞,于照后继续培养3、6、9、12、24、27、30h,分别收获细胞。电泳检测DNA梯状带;流式细胞术(FCM)细胞凋亡定量并观察细胞周期变化;Hoechst 33258-PI复染荧光显微镜计数凋亡细胞及已死亡细胞百分率。结果 HL-60细胞受照后死亡方式主要是凋亡,其首先阻滞在G２／M期并由此走向凋亡;DNA梯状带及FCM检测结果发现,细胞凋亡具有时间和剂量依赖性;Hoechst 33258PI染色法检测结果与FCM检测的凋亡细胞随剂量的加大及时间的推移而增多的结果并不呈平行关系。结论 γ-射线诱导HL-60细胞凋亡时间和剂量效应关系的确立为进一步探讨该凋亡途径分子机制奠定了基础。