HBV preS1基因酵母表达载体的构建及表达

目的 构建HBV preS1基因的酵母表达载体,探讨HBV preS1蛋白的功能.方法 以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增HBV preS1基因,克隆到pGEM-T载体中命名为T-preS1,以NcoⅠ和MluⅠ双酶切T-preS1后回收与酵母表达载体pSos连接,对重组质粒进行序列测定后命名为pSos-preS1,经醋酸锂法将其转化酵母菌cdc25(a),提取酵母蛋白质进行Western免疫印迹分析.结果 成功构建了HBV preS1基因的酵母表达载体,Western免疫印迹分析显示HBV preS1基因在酵母细胞中正确表达.结论 pSos-preS1的构建为通过SOS招募系统(sos-recruitment system, SRS)筛选与HBV preS1蛋白相互作用的蛋白和进一步探讨HBV preS1蛋白在HBV致病中的作用奠定了基础.     

酵母双杂交系统筛选HBV PreS1相互作用蛋白

目的利用Sos招募系统(SRS),构建含HBV PreS1基因的酵母双杂交诱饵载体,筛选人肝细胞与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,进一步探讨HBV侵入肝细胞的机制。方法以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,PCR扩增HBV PreS1基因,克隆到酵母表达载体pSos中,构建诱饵质粒pSos-PreS1,将其转化cdc25酵母感受态细胞,提取酵母蛋白质进行Western blot分析,证实其在酵母细胞中的表达;将pSos-PreS1分别与pMyr Lamin C、pMyr SB共转化酵母,证实诱饵蛋白无自激活作用。将pSos-PreS1与人肝cDNA文库共转化cdc25酵母感受态细胞,通过营养及温度选择性培养筛选阳性菌落,扩增阳性菌落目的基因并测序。结果成功构建了HBV PreS1基因酵母双杂交诱饵载体pSos-PreS1,筛选得到5个准阳性克隆,序列分析表明其分别与人类钾通道调制因子1(KCMF1)、细胞色素C、VitD结合蛋白、人源去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)和人白蛋白具有高度同源性。结论利用SRS筛选出5个可能与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,为进一步了解HBV侵入肝细胞的机制奠定了基础。     

乙型肝炎患者血清IL-12、IL-18、TGF-β1、 TIMP-1检测的临床意义

目的探讨血清IL-12、IL-18水平在乙型肝炎发生发展中的意义及与肝纤维化的关系。方法采用双抗体夹心ELISA法检测血清IL-12、IL-18、TGF-β1、TIMP-1水平。结果患者血清IL-12、IL-18、TGF-β1及TIMP-1水平与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。随慢性肝炎中度→慢性肝炎重度→肝硬化临床类型的逐渐加重,血清IL-18、TGF-β1、TIMP-1水平呈增高趋势,差别具有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1、TIMP-1与PCⅢ、LN、IVC相比,相关系数r分别为0.986、0.998、0.925和0.921、0.987、0.814。结论乙型肝炎患者血清IL-12、IL-18、TGT-B1及TIMP-1水平和对照组相比有显著变化,且与病情变化有关。TGF-β1、TIMP-1与PCⅢ、LN、IVC有良好的相关性。     

龙门吊架梁技术在跨铁路桥梁施工中的运用

利用HD200贝雷梁和DF150—Ⅲ型架桥机横梁组拼的龙门吊,安全、方便、快捷地实现了跨京哈双线电气化铁路立交桥钢箱梁吊装成功。本文简要介绍了这种龙门吊的走行梁、横梁、天车的构造和技术条件,并阐述了架梁施工要点。     

分次封锁线路办法在跨线桥换梁施工中的应用

简要介绍了在跨线桥换梁施工中分几次封锁下层线路的施工办法,为跨线桥换梁中连续封闭下层线路时间过长提供新的解决思路。     

肝炎患者TTV的检测及意义

目的　了解肝炎患者输血传播病毒 (TTV)感染情况 ,探讨其可能的致病作用。方法　采用套式PCR方法检测 2 5例肝炎患者TTVDNA ,对其中 3例进行测序分析。结果　 2 5例各型肝炎中 ,1 2例TTVDNA阳性 ,而 1 8例非甲～庚型肝炎中 8例阳性 ,血清ALT水平均有不同程度升高 ,序列分析与日本株有很高同源性。结论　证实西安地区也存在TTV感染 ,TT病毒可能有一定肝损伤作用 ,TT病毒还可与HBV、HCV重叠感染 ,但似不加重病情。     

丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定

目的用含丙型肝炎病毒核心(HCV core)蛋白的cDNA片段构建酵母双杂交诱饵载体,并进行人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定。方法PCR扩增含HCV core蛋白不同大小的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。扩增人胎肝cDNA文库并纯化、鉴定。结果获得含HCVcore蛋白的cDNA片段,并成功克隆入pGBKT7中。待转化的人肝cDNA文库滴度在5×108左右,纯化后的质粒DNA质量浓度约1 g/L。用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切显示插入片段大小不一。结论成功构建了核心蛋白的酵母双杂交诱饵载体;扩增、纯化的人胎肝cDNA文库的多样性很好,适合于筛选。为用酵母双杂交技术研究与HCV core蛋白相互作用的蛋白打下坚实基础。