昆虫激素体外调节家蚕滞育激素受体基因的表达

为了深入研究家蚕滞育的分子机理,从家蚕基因组中扩增了1395 bp和972 bp 2个不同长度的滞育激素受体基因Bmdhr启动子片段,以pGL3.0 Basic为载体,分别构建荧光素酶报告质粒,利用家蚕细胞瞬时表达系统分析其转录活性以及昆虫保幼激素类似物（JHA）、蜕皮激素（20-OH-ecdysone）和滞育激素（DH）对其活性的影响．结果表明：1395 bp的Bmdhr启动子活性显著低于972 bp的Bmdhr启动子,这说明Bmdhr启动子在-941～-1364 nt区间存在负调控元件．JHA浓度为2,4,6μg/mL时,极显著地增强启动子活性;浓度为1μg/mL时活性显著减弱,而为8μg/mL时则活性极显著减弱．20-OH-ecdysone对Bmdhr启动子活性的影响具有剂量效应,低浓度（1,2μg/mL）时显著增强启动子活性;浓度为4μg/mL时,启动子的活性显著减弱;但当浓度继续升高时,启动子活性又极显著增强．DH对Bmdhr启动子活性的影响同样具有剂量效应,其浓度为10～40 nM时,显著增强启动子活性;而当其浓度达到60 nM时,启动子活性变化不显著．     

家蚕滞育激素受体体外上调下游海藻糖酶基因的表达

家蚕滞育激素（Bombyx mori diapause hormone,BmDH）与滞育激素受体（BmDH receptor,BmDHR）结合,调控其信号通路中的下游基因的表达.在二化性家蚕中,受滞育信号的影响,蛹体卵巢膜上海藻糖酶的活性增强.为了证实 BmDHR对家蚕海藻糖酶基因（Bmtre）表达的调控作用,以 pcDNA3.1为载体,构建了4种由 ie -1启动子驱动的不同 Bmdhr 的表达质粒 pcDNA - ie1- Bmdhr1、pcDNA - ie1- Bmdhr3、pcDNA - ie1- Bmdhr4、pcDNA - ie1- Bmdhr5和（Bmtre 启动子驱动的萤火虫荧光素酶基因（luciferase,luc）报告质粒 p3Z - Bmtre - luc;用脂质体（Lipofectin）包埋1种 Bmdhr 表达质粒或不同摩尔比的 pcDNA - ie1- Bmdhr1/ pcDNA - ie1- Bmdhr5以及报告质粒后,分别共转染源于卵巢的家蚕细胞 BmN,在 DH 作用下体外检测 BmDHRs 对海藻糖酶基因启动子活性的影响.结果表明,4种滞育激素受体 BmDHR -1、BmDHR -3、BmDHR -4和BmDHR -5分别表达时,均能上调海藻糖酶基因启动子的活性;不同摩尔比（1：3,1：1,3：1）的 BmDHR -1/ BmDHR -5也均能上调海藻糖酶基因启动子的活性,由此证明 BmDHR 能上调其信号通路中下游基因 Bmtre 的表达.     

家蚕马氏管免疫相关蛋白基因BmNOS的研究

借助蛋白双向电泳(2-D)技术对感染家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)不同时相的家蚕幼虫马氏管蛋白进行分离,并对其中14个差异蛋白点进行质谱分析.结果表明:10个蛋白点得到成功鉴定,其中的一个可信结果为家蚕一氧化氮合酶(Bombyx mori Nitric...     

大蚕蛾科绢丝昆虫线粒体基因组A＋T丰富区序列及其系统发育研究

为了研究大蚕蛾科绢丝昆虫的进化关系,分别从蓖麻蚕、樗蚕和柳蚕的蛹中提取线粒体DNA,用PCR方法扩增线粒体A T丰富区及侧翼序列,克隆到pMD18-T载体,进行序列测定.序列分析表明,克隆片段的基因依次为12SrRNA基因3′端、A T丰富区、tRNAMet、tRNAIle、tRNAGln和ND2基因5′端,与家蚕和野桑蚕mtDNA排列顺序相同;在tR-NAGln和ND2基因之间有一段非编码区.根据柳蚕3个tRNA基因的核苷酸序列推定了其二级结构.基于5种大蚕蛾科绢丝昆虫和家蚕mtDNA A T丰富区序列的系统发育树显示,柳蚕与蓖麻蚕、樗蚕的亲缘关系较近,与柞蚕的亲缘关系较远,而与家蚕的亲缘关系更远.本研究结果有助于阐明大蚕蛾科绢丝昆虫以及家蚕的起源和进化.