经熟地鳖甲煎剂含药血清培养的肾系膜细胞对成骨细胞增殖和分化的影响

目的研究经熟地鳖甲煎剂含药血清培养的肾小球系膜细胞培养上清液对成骨细胞的影响。方法采用细胞培养的方法,将成骨细胞分为正常血清组、系膜上清组、含药系膜上清组,分别在培养24、48、72、120h后应用MTT法检测各组成骨细胞的增殖情况;在72h后应用ELISA法检测上清液碱性磷酸酶(AKP)和骨桥蛋白(OPN)浓度。结果系膜上清组和含药系膜上清组的成骨细胞增殖显著高于正常血清组(P<0.05),而含药系膜上清组又高于系膜上清组(P<0.05)。系膜上清组和含药系膜上清组的AKP浓度显著高于正常血清组(P<0.05),含药系膜上清组又显著高于系膜上清组(P<0.05)。含药系膜上清组的OPN浓度要显著高于正常血清组(P<0.05)。结论肾系膜细胞可促进成骨细胞的增殖及功能,而熟地鳖甲煎剂能促进这一作用。本研究为中医"肾主骨"理论体系提供了新的实验方法及科学依据。     

肾衰口服液对大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

为探讨肾衰口服液 (SSOL)的作用机理 ,采用细胞培养与细胞分子学技术相结合方法 ,在大鼠肾小球系膜细胞培养体系中加入该药 ,研究其对系膜细胞 (Mesangial cell,MC)增殖和肿瘤坏死因子(TNF- α)的影响。结果 :SSOL加入 MC培养体系 6 d后 ,MC数 (活细胞个数 )为 4 6 70 0± 3819,明显低于对照组 14750 0± 13919(P <0 .0 1) ;该药抑制 MC增殖作用亦较对照组显著 (P <0 .0 1)。MC上清液中 TNF-α含量对照组为 (8.98± 1.11) mg/ L ,治疗组 (1.6 4± 0 .57) mg/ L ,有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。提示 SSOL对肾小球 MC增殖有明显抑制作用。     

清益宁络方对IgA肾病小鼠系膜细胞及系膜基质的影响

目的探讨清益宁络方对IgA肾病小鼠肾小球系膜细胞及细胞外基质增生的影响。方法采用牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B复合感染的方法复制小鼠IgA肾病模型,随机分为模型组、雷公藤多甙组[5mg/(kg·d)]及清益宁络方低剂量组[18.2g/(kg·d)]、高剂量组[36.4g/(kg·d),并设正常组为对照。连续给药5周,通过苏木素伊红(HE)染色、过碘酸雪夫染色(PAS)观察肾组织病理改变,系膜基质增生程度,系膜细胞增殖情况,并采用图像采集与分析系统对系膜基质含量进行灰度分析。结果模型组系膜基质中重度增生,与各用药组比较差异有统计学意义(P<0.004 5);清益宁络方高低剂量组系膜基质轻中度增生,与雷公藤多甙组比较差异无统计学意义(P>0.004 5);PAS染色观察到雷公藤多甙组、清益宁络方高、低剂量组系膜细胞增殖减轻,系膜基质含量减少,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01);清益宁络方高剂量组系膜细胞数、系膜基质含量少于雷公藤多甙组,差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组与之比较差异无统计学意义(P>0.05);高低剂量组间系膜细胞数及系膜基质含量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论清益宁络方具有抑制系膜细胞增殖及细胞外基质沉积,减轻肾组织病理损害的良好作用。     

大黄素、黄芪多糖在体外对乙型肝炎病毒的抑制作用

目的体外观察大黄素、黄芪多糖单用与联合应用抗HBV的作用。方法以HepG2.2.15细胞为研究模型,选用干扰素α、拉米夫定为阳性对照药物,观察培养液中加入不同浓度大黄素、黄芪多糖及两药联合应用抗HBV作用的效果。采用Taqman荧光定量PCR检测细胞上清HBV DNA,ELISA检测培养上清液HBsAg、HBeAg水平的变化。采用MTT法观察它们对细胞生长的影响。结果大黄素的3个剂量组(12.5、25.05、0.0 mg/L)和所观察的时间点(3、69、d)对HBV DNA、HBsAg、HBeAg表现出剂量与时间依赖的抑制作用(P<0.05)。大黄素对HBV DNA抑制的半数抑制浓度为21 mg/L,对HepG2.2.15细胞半数细胞毒性浓度为40.66 mg/L,治疗指数为1.94。同时发现黄芪多糖各剂量组对HBV无明显的抑制作用(P>0.05)。大黄素、黄芪多糖联合应用在疗效方面无明显的交互作用(P>0.05)。结论大黄素在体外对HBV具有一定的抑制作用,黄芪多糖无明显抑制HBV的作用,两药联用无明显协同抗HBV的作用。     

麝香酮含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖、分化的影响

目的研究麝香酮含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖及其向成骨细胞分化的影响,初步了解麝香酮单体对骨髓间充质干细胞的作用机制。方法贴壁筛选法提取大鼠BMSCs,培养至第3代,流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨成脂诱导,鉴定认为培养成功后,利用制备的不同浓度麝香酮含药血清干预。测定细胞增殖率、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量等,研究麝香酮含药血清对大鼠干细胞增殖、分化的影响。结果筛选纯化的BMSCs呈均一的成纤维细胞样,贴壁生长,以长梭形为主;表型鉴定:CD45阴性,CD44、CD95均呈阳性表达;用含药血清干预后的增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组。结论麝香酮含药血清可以促进BMSCs的增殖、成骨分化。     

黄芪蛰虫口服液对氢化可的松免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用

目的研究黄芪蛰虫口服液对氢化可的松免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法50只昆明小鼠随机分为5组,每组10只。除正常对照组外其他4组建立氢化可的松(HC)免疫抑制动物模型,建模成功后用药3组分别按0.2、0.1、0.05mL/10g体重每天灌胃1次,10d后检测小鼠腹腔巨噬细胞活性、脾脏T淋巴细胞增殖转化能力、脾脏NK细胞活性、脾细胞产生抗体能力和IL-2的能力。结果不同剂量黄芪蛰虫口服液不同程度地提高HC免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬活性、脾脏T淋巴细胞增殖转化能力、脾脏NK细胞的活性、脾脏产生抗体能力及IL-2能力的作用。结论黄芪蛰虫口服液具有提高HC免疫抑制小鼠的某些免疫功能。     

苦参碱抑制人雄激素非依赖性PC-3细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的 研究苦参碱对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 不同浓度苦参碱作用PC-3细胞后,应用MTT法观察苦参碱对PC-3细胞增殖的影响,流式细胞仪研究苦参碱对PC-3细胞周期的影响,TUNEL法、Annexin V/PI双染分析苦参碱对PC-3细胞凋亡的影响.结果 苦参碱对PC-3细胞的生长具有抑制作用,与对照组相比有统计学差异(P<0.05).苦参碱对PC-3细胞的增殖抑制作用呈现时间及剂量依赖性关系.苦参碱的最佳药物浓度为1.0g/L,最佳作用时间为48h.流式细胞仪分析显示不同浓度苦参碱均可使PC-3细胞阻滞于G0/G1期,随着苦参碱浓度的增加,G0/G1期细胞所占的比例增加,与对照组相比有统计学差异(P<0.01).TUNEL法、Annexin V/PI分析显示不同浓度苦参碱均可诱导PC-3细胞凋亡,其早期凋亡率及晚期凋亡率随着苦参碱浓度的增加而升高,呈现剂量依赖性关系(P<0.05,P<0.01).结论 苦参碱在体外可抑制PC-3细胞的增殖,具有时间和浓度依赖关系.抑制增殖和细胞周期阻滞与G0/G1期相关.苦参碱可诱导PC-3细胞凋亡,与苦参碱的作用浓度及时间有关.     

远志与厚朴不同煎煮时间及不同配比对小鼠胃肠运动的影响

目的 考察远志与厚朴配伍的不同煎煮时间以及不同配伍比例对小鼠胃肠运动的影响.方法 采用半固体糊精法,考察空白组﹑生远志组﹑厚朴组以及远志与厚朴1∶1、1∶2、1∶3配伍组对小鼠胃排空和小肠推进的影响.结果 ①与空白组相比,除厚朴组外,各组均能增加小鼠胃残留率、降低小肠推进率(P<0.05或P<0.01);但与生远志组比较,远志配厚朴同煎15 min组能明显降低小鼠胃残留率(P<0.05);②与生远志组相比,远志与厚朴1∶1、1∶2、1∶3配比组均能显著降低小鼠胃残留率,显著促使小肠推进(P<0.05或P<0.01).结论 厚朴能显著改善生远志所致的胃肠动力障碍,并随厚朴配比的增加胃肠运动增强;二者配伍,以厚朴后下同煎15 min为宜.     

沉默血小板反应蛋白-1基因对亚溶解型C5b-9诱导肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

目的研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,筛选沉默效率最佳的TSP-1shRNA(shTSP-1)后,将shTSP-1转染体外培养的大鼠GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。以Westernblot检查TSP-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的表达情况。另用ELISA法测定培养上清中总转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量。结果核酸序列分析证明,4种TSP-1shRNA重组质粒均构建成功。Western blot实验证实,构建的shTSP-1-3(Thbs1-3)具有最佳的沉默效率。将shTSP-1-3转染大鼠GMC后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b-9诱导的TGF-β1活化及细胞外基质(FN和collagenⅣ)的合成。结论 TSP-1基因表达在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导TGF-β1活化及ECM分泌的过程中,发挥了重要的促进作用。     

狼疮性肾炎肾活检组织中PCNA与Bcl-2的表达及意义

目的　观察狼疮性肾炎 (lupusnephritis ,LN)肾组织内凋亡调控基因Bcl 2及增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达 ,探讨凋亡在LN发病中的作用。方法　应用ELPS(enhancedlabelled polymersystem)检测 2 9例LN肾穿刺活检组织PCNA和Bcl 2的表达 ,并与正常组进行对比分析。结果　LN组肾小球内PCNA阳性细胞数与正常对照组肾组织比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 0 1)。LN组肾小球内Bcl 2阳性表达细胞明显高于正常对照组 (P <0 .0 0 1) ,阳性表达细胞见于系膜细胞、毛细血管内皮细胞和细胞性新月体内。LN组肾小球Bcl 2阳性细胞数与PCNA阳性细胞数、肾小球细胞总数有显著正性线性相关 (r =0 .70 1.P <0 .0 1;r =0 .5 5 0 ,P <0 .0 1)。结论　LN肾组织肾小球内细胞高增殖和Bcl 2高表达 ,提示细胞增殖与凋亡调控异常均参与了LN肾小球的增生性病变     

甜牛大力和苦牛大力对免疫抑制小鼠免疫调节作用的比较研究

目的比较甜牛大力和苦牛大力对免疫抑制小鼠的免疫调节作用。方法昆明种(KM)小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺(CTX)组(模型组)、左旋咪唑(LMS)组(阳性对照组)与高、中、低剂量(20、10、5g/kg)的甜牛大力(Radix Millettia Speciosa,RM Speciosa)组及苦牛大力(Radix Millettia Championi,RM Championi)组,连续灌胃给药20d,1次/d。并于第8、10、12天,除正常对照组外,均腹腔注射(ip)CTX 80mg/kg造成小鼠免疫抑制模型。测定并比较各组小鼠体质量增量、免疫器官指数、白细胞(WBC)数目、迟发型超敏反应(DTH)程度及巨噬细胞吞噬功能的差异。结果与模型组比较,一定剂量的甜牛大力和苦牛大力均可明显提高模型小鼠的WBC(P<0.01或P<0.05)数目;促进模型小鼠的DTH程度(P<0.01);增加模型小鼠的单核巨噬细胞的吞噬功能(P<0.01或P<0.05);不同程度提高模型小鼠的体质量、脾脏指数及胸腺指数(P<0.01或P<0.05)。其中,甜牛大力高、中剂量组(20、10g/kg)在提高胸腺指数和DTH程度方面,稍优于苦牛大力对应剂量组(P<0.05或P<0.01),而在其余指标上,甜牛大力与苦牛大力的作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论甜牛大力和苦牛大力对CTX免疫抑制小鼠均具有一定的免疫功能增强作用,其中甜牛大力提高细胞免疫能力稍强于苦牛大力。     

HPLC-ELSD法测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量

目的 建立测定桔梗药材中桔梗皂苷D、D3、E含量的方法.方法 采用高效液相色谱-蒸发光激光闪射检测器(HPLC-ELSD)法,Hypersil C18柱(5 μm,4.6 mm×150 mm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL/min,ELSD漂移管温度113℃,载气(N2)流速3.0 L/min.结果 桔梗皂苷D、D3、E的线性范围分别为13.78～275.6μg/mL(r=0.999 5)、8.40～168.0μg/mL(r=0.999 7)、12.02～240.4μg/mL(r=0.999 6),平均回收率(n=5)为98.3%、99.4%和101.3%.结论 本法操作简便,结果准确可靠,可用于桔梗皂苷D、D3、E含量的测定.     

川芎药材活性部位的高效液相色谱指纹图谱定性分析方法

目的　建立川芎药材活性部位的指纹图谱 ,为其定性鉴别提供依据。方法　川芎药材经乙醇超声提取后 ,用醋酸乙酯萃取 ,采用ODS柱为分析柱 ,以甲醇 水 冰醋酸 (30∶70∶0 .5 )为流动相 ,在 2 76nm条件下进行分析 ,建立其指纹图谱。并对 7种不同来源的川芎药材进行高效液相色谱指纹图谱定性分析比较。结果　本研究建立的分析方法的精密度、重现性较好 ,以阿魏酸峰计 ,RSD分别为 1.6 8%和 1.0 4 % ;不同川芎药材指纹图谱中主要峰群的整体图貌基本一致 ,但各成分含量的相对比值有所不同 ,不同来源的川芎药材共有峰面积的比值及共有峰面积和均有一定的差异。结论　HPLC指纹图谱分析法可简便、快速地鉴别区分不同来源的川芎药材     

黄芪对蟾蜍离体单一肌梭传入放电的影响

目的　探讨黄芪、丹参对肌梭传入放电的影响。方法　用空气隔绝法记录蟾蜍离体单一肌梭的传入放电 ,观察黄芪和丹参注射液对肌梭传入电活动的影响 ,并与琥珀胆碱 (SCh)的作用进行比较。结果　应用 5 0mg·L-1SCh后 ,肌梭的自发放电频率由 (0 .79± 0 .12 )Hz增加至 (12 .2 6± 2 .38)Hz。应用 10 0、2 0 0、30 0mg·L-1黄芪后 ,肌梭的传入放电分别由 (0 .80± 0 .34)Hz、(0 .77± 0 .2 9)Hz、(0 .70± 0 .4 2 )Hz增加至 (13.18± 2 .4 3)Hz、(2 4 .0 3± 4 .0 7)Hz、(36 .17± 5 .83)Hz。丹参注射液对肌梭的传入放电没有作用。结论　黄芪可以使肌梭的传入放电频率显著增加 ,且呈剂量依赖现象     

CO_2超临界流体萃取丹参中的有效成分

目的　建立CO2 超临界流体萃取丹参中有效成分的方法 ,并用高效液相 质谱法进行产物分析。方法　以 95 0mL·L-1乙醇为夹带剂 ,在 2 0MPa、4 5℃条件下 ,萃取丹参药材 1h后 ,再在 30MPa、6 5℃条件下 ,以 10 0mL·L-1的乙醇为夹带剂萃取 2h ,并将超临界萃取法与回流提取法、超声提取法进行了比较。结果　超临界萃取法萃取的成分最多 ,萃取效率也高于其他两种方法。结论　超临界萃取法提取丹参中有效成分耗时少、准确、效率高且提取完全。     

葛根中有效部位及有效成分的高效液相色谱分析

目的建立全面控制葛根及其制剂的定性和定量分析方法。方法用反相高效液相色谱法(RPHPLC),以甲醇水(42∶58)为流动相在250nm波长下检测,对葛根有效部位(醋酸乙酯提取部位)进行指纹图谱定性分析,对葛根有效部位中的有效成分葛根素和大豆苷元进行定量测定,并对11种不同来源的葛根药材进行分析测定。结果在定性分析条件下,葛根有效部位的HPLC指纹图谱中有5个共有峰,可以作为其定性鉴别的指标峰;在以葛根素和大豆苷元为定量指标分析中,其方法的回收率分别为98.0%和95.4%,相对标准偏差(RSD)分别为1.30%和1.61%,葛根药材中葛根素和大豆苷元的含量分别在0.213%～3.626%和0.012%～0.049%范围内。结论以葛根有效部位指纹图谱定性分析和有效成分定量分析方法,可以准确有效地控制其质量。     

Comparative analysis of essential oils found in Rhizomes Curcumae and Radix Curcumae by gas chromatography-mass spectrometry

A comparison of the volatile compounds in Rhizomes Curcumae （Ezhu） and Radix Curcumae （Yujin） was undertaken using gas chromatography mass spectrometi-y （GC-MS）. Ultrasonic extraction and GC-MS methods were developed for the simultaneous determination of five sesquiterpenes, namely, α-pinene, β-elemene, curcumol, germacrone and curdione, in Ezhu and Yunjin. Good linearity （r〉0.999） and high inter-day precision were observed over the investigated concentration ranges. The validated method was successfully used for the simultaneous determination of five sesquiterpenes in Ezhu and Yujin. The quantitative method can be effectively used to evaluate and monitor the quality of Chinese curcuma in clinical use.     

INHIBITORY EFFECTS OF THE ALKALOIDS FROM Radix Caulophylli ON THE PROLIFERATION OF HUMAN VASCULAR ENDOTHELIAL CELL

Angiogenesisplaysaveryimportantrolein tumorgrowthandmetastasis[1,2].Tumorssignalthe needforabloodsupplybysecretinggrowthfactors thattriggerangiogenesis,includingbasicfibroblast growthfactor(bFGF),vascularendothelialgrowth factor(VEGF)andplatelet deriveden…