哇巴因多克隆抗体对两肾一夹肾血管性高血压大鼠血流动力学的影响

为探讨哇巴因多克隆抗体的降压作用及哇巴因与高血压发病的关系 ,给“两肾一夹 +盐 ( 2 k1 c+盐 )”、“两肾一夹 ( 2 k1 c)”肾血管性高血压大鼠随机静注哇巴因多克隆抗体、硝普钠、正常兔免疫球蛋白 ( Ig G)及生理盐水 ,颈动脉插管观察注射后 3h内血压动态变化。结果表明 :哇巴因多克隆抗体对“两肾一夹 +盐”肾血管型高血压大鼠具有明显的降压作用 ,而对“两肾一夹”高血压模型降压作用不明显。正常兔免疫球蛋白对各种高血压模型均无降压作用。提示内源性哇巴因 ( EO)升高可能是高血压的发病因素之一 ;高盐引起血压升高的机制之一可能是通过刺激 EO的分泌增加。     

哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位基因表达的影响

目的　对比研究哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵 (Na+ ,K+ ATP酶 )α亚单位基因表达的影响 ,探讨内源性哇巴因 (EO)的生物学效应以及洋地黄类药物药理作用的分子机制。方法　长期给予大鼠注射小剂量哇巴因 (2 0 μg·kg- 1·d- 1)与地高辛 (32 μg·kg- 1·d- 1) ,动态观察大鼠血压变化 ;分别应用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术 ,研究各组大鼠肾脏皮质钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果　哇巴因与地高辛对大鼠血压的影响存在着明显差别 ,长期给予大鼠注射小剂量哇巴因可使大鼠血压升高 ,而地高辛对大鼠血压无影响。但哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位基因表达的影响是相同的 ,在mRNA水平均可使α1亚单位表达增强 ,α2与α3亚单位表达无改变 ;而在蛋白水平α1亚单位表达减弱 ,α3亚单位表达增强 ,α2亚单位表达无改变。结论　哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致相同的肾脏皮质钠泵基因表达改变 ,提示这种表达的改变在哇巴因导致血压升高的过程中可能并不起着关键性作用。     

哇巴因对大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响

目的 观察哇巴因对大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响.方法 28只SD大鼠随机分为2组,即哇巴因组[27.8μg/(kg·d)哇巴因腹腔注射]和对照组(生理盐水1mL/d腹腔注射),每周测量鼠尾动脉血压,共5周.于第3、5周后分2批处死动物,应用分光光度法测定各组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性,同时采用实时定量PCR(real-time PCR)观察肾皮质中多巴胺D1受体mRNA表达的变化.结果 大鼠腹腔注射哇巴因3周后,两组血压无显著性差异,但哇巴因组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性高于对照组(P<0.01),多巴胺D1受体mRNA表达低于对照组(P<0.01).5周后,哇巴因组大鼠血压与对照组相比有显著性差异(P<0.01),哇巴因组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性进一步增高(P<0.01),多巴胺D1受体mRNA表达进一步减低(P<0.01).结论 长期小剂量外周注射哇巴因可使SD大鼠血压持续升高,这一作用与肾近曲小管Na+-K+-ATP酶活性增加引起水钠潴留有关,多巴胺D1受体可能参与了这一过程.     

猪骨胶原蛋白降压成分的提取与生物活性的研究

目的　从猪骨胶原蛋白中提取小肽做为血管紧张素转换酶抑制剂。方法　猪骨胶原蛋白经胰蛋白酶水解 ,阳离子交换树脂层析 ,Sephadex G2 5凝胶过滤 ,反相高效液相层析 (HPLC) ,最终得到一种 9肽 ,其氨基酸组成 :Ile,Ser,His,Gly ,Ala,Pro ,Tyr,Leu ,Asp。结果　以马尿酰 甘氨酰 甘氨酸 (HGG)为底物 ,对从猪肺中提取的血管紧张素转换酶 (ACE)有明显的抑制作用 ,I50为 2 .6× 1 0 - 2 mmol/L。将含此肽 0 .0 1 %的混合物做静脉注射试验 ,对肾性高血压大鼠和自发性高血压大白鼠均有明显降压作用 ;口服给药 1 5d ,对自发性高血压有一定的降压作用。对离体豚鼠回肠平滑肌有收缩作用。结论　胶原蛋白酶解物 9肽的抗高血压效果 ,可能是通过对血管紧张素转换酶的抑制作用。     

原发性高血压患者红细胞膜胰岛素受体与钙、镁代谢的关系

目的　探讨原发性高血压 (EH)患者钙、镁离子代谢与红细胞膜胰岛素受体 (EIR)之间的联系及在胰岛素抵抗中的作用。方法　观察 47例EH病人及 30例正常对照红细胞内Ca2 +、Mg2 +含量 ,2 4h尿Ca2 +、Mg2 +排泄量 ,红细胞膜Ca2 +,Mg2 + ATP酶和Na+,K+ ATP酶的活性变化。结果　①EH组患者胰岛素敏感指数 (ISI)、红细胞内Mg2 +含量、2 4h尿Mg2 +排泄量、EIR的低亲合位点数 (RT2 )、Ca2 +,Mg2 + ATP酶和Na+,K+ ATP酶活性减低。红细胞内Ca2 +含量、EIR的解离常数KD2 增高 (P <0 .0 5 )。②EH组ISI与RT2 、红细胞内Mg2 +含量呈正相关 ;RT2 与红细胞内Mg2 +含量、2 4h尿Ca2 +、Mg2 +排泄量呈正相关。③以RT2 为应变量 ,红细胞内Mg2 +含量 (X1 )、2 4h尿Ca2 +(X2 )、2 4h尿Mg2 +排泄量 (X3)为自变量的多元线性逐步回归分析中 ,X1 、X2 进入方程。结论　钙、镁代谢障碍可能是EH胰岛素抵抗时红细胞膜胰岛素低亲和受体水平下调的主要因素。     

哇巴因抗体制备的方法学研究

目的　探索合适的实验条件 ,制备高度特异性以及高效价的哇巴因抗体 ,促进国内对内源性哇巴因这种皮质类固醇激素的研究。方法　利用外源性哇巴因分别与牛血清白蛋白 (BSA)及卵清蛋白 (OVA)耦联 ,制备抗原免疫家兔 ,根据对兔免疫后动物体内抗体效价连续监测的结果来制定免疫方案 ,制备哇巴因抗血清 ,分别应用硫酸铵分段盐析法和DEAE D52 纤维素阴离子非保留色谱相配伍的方法纯化哇巴因抗体 ,并对该抗体进行特异性、亲和性及纯度测定。结果　所得抗体效价最高达 1∶(1× 1 0 6) ,亲和常数最高为 1 .59× 1 0 8,除了与地高辛存在 9.2 0 %～1 9.80 %的交叉结合反应外 ,与结构类似的其他几种物质 ,如强的松、安体舒通、西地兰、睾酮及地塞米松的交叉结合率均小于 5% ,SDS PAGE结果显示所得抗体为电泳纯。结论　应用本研究中所探索出的实验方法 ,获得了高特异性、高亲和性以及高效价的哇巴因抗体 ,可用于对内源性哇巴因的临床与实验研究。     

紫外线照射对储存血红细胞膜及免疫功能的影响

目的　了解紫外线照射储存血后红细胞在不同时期血液的理化指标及免疫学指标的变化 ,以探讨紫外线照射储存血的安全性及可行性。方法　采用成对血标本对照进行紫外线照射前后及储存 72、12 0h后测定红细胞渗透脆性 ,血浆K+ 、Na+ 、Cl-离子含量和红细胞ATP酶活力及红细胞免疫功能的变化。结果　储存血在保存前后与照射前后红细胞脆性均无显著变化。照射后储存血的红细胞ATP酶活力与对照组相比有所升高 (P <0 .0 5 ) ;红细胞C3 b受体 (RCR)花环率与红细胞C3 b受体花环促进率 (RFER)均有显著升高 (P <0 .0 1)。结论　紫外线照射储存血可以改善红细胞膜的代谢 ,增强红细胞的免疫功能     

丹参对大鼠腹腔感染状态下胃黏膜Na~+-K~+-ATPase和pH值的影响

目的　探讨丹参注射液对严重腹腔感染状态下大鼠胃黏膜Na+ K+ ATPase活性变化和胃黏膜内pH的影响。方法　利用大鼠盲肠结扎穿孔造成腹腔严重感染动物模型 ,检测穿孔前和穿孔后 3、6、12、2 4、4 8h各时相大鼠胃黏膜Na+ K+ ATPase活性和胃黏膜内pH的变化。结果　盲肠穿孔后感染组 3hNa+ K+ ATPase活性显著降低 (P <0 .0 5 ) ,12h降至最低 (P <0 .0 1) ,仅为对照组的 4 8.5 % ,4 8h仍未恢复正常 ;丹参组 12h、2 4hNa+ K+ ATP酶活性比感染组显著升高 (P <0 .0 5 )。感染组胃黏膜内 pH值穿孔后 3h即有下降 ,6h明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,12h下降至最低 (P <0 .0 1)。 4 8h仍低于对照组 (P <0 .0 5 )。丹参组从 12h开始胃黏膜内pH值与感染组显示出差别 (P <0 .0 5 )。结论　严重腹腔感染状态下胃黏膜Na+ K+ ATPase活性和 pHi降低可能是引起胃黏膜屏障功能受损的主要原因。早期应用丹参对有效地预防应激性溃疡的发生有重要的临床意义     

硒对大鼠心肌细胞膜Na~+,K~+—ATP酶及5'—核苷酸酶活性的影响

本文用克山病病区低硒粮、病区粮加Na_2SeO_3及常备饲料分别喂养Sprague—Dawley纯种大鼠1～3个月,动态观察了大鼠心肌细胞膜Na~+,K~+—ATP酶(Na~+,K~+—ATPase)及5'一核苷酸酶(5'—ND)活性变化。结果发现低硒组大鼠心肌细胞膜Na~+,K~+—ATPase和5'—ND活性从实验的第1到第3个月均明显低于补硒组和常备饲料组大鼠;低硒组大鼠肝脏和血浆硒含量及红细胞和肝脏的GSH—px活性也明显降低。补硒可使上述各项指标接近常备饲料组大鼠水平,表明硒对心肌细胞膜有稳定和保护作用。     

人肺腺癌细胞系A549细胞双向电泳-飞行时间质谱研究

目的初步分析人肺腺癌细胞系A549细胞蛋白质表达情况,从蛋白组水平探讨肺腺癌发病的分子机制。方法应用2-DE技术对人肺腺癌细胞系A549细胞总蛋白进行分离,获得蛋白质表达谱;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合生物信息学进行蛋白质鉴定。结果3块胶平均蛋白斑点数为1 138±49,平均匹配点数为986±32,匹配率为85.8%。随机选取背景清晰、分辨清楚、蛋白含量较高的20个斑点进行MALDI-TOF-MS分析,共获得了18个肽质量指纹图谱(PMF)。将PMFs质量数据通过Aldente软件查询SWISS-PROT数据库,根据匹配片段及氨基酸序列覆盖率等,初步鉴定出15种蛋白质。根据功能,这些蛋白质可分为:①基本代谢相关的酶类:果糖2-磷酸醛缩酶、视网醛脱氢酶1(RALDH1)、吡多醛激酶;②细胞骨架类:蛋白细胞角蛋白8(CK8)、-β2链微管蛋白;③应激相关蛋白:蛋白二硫化物异构酶A3(PDIA3);④信号转导分子:膜联蛋白1(ANX1)、膜联蛋白4(ANX4);⑤分子伴侣:热休克蛋白60(HSP60)、热休克蛋白-β1、抑制素(PHB);⑥转录及翻译相关蛋白:不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H);⑦杂类:Rgr protein、NPM、PCBP1。结论应用2-DE/MALDI-MS方法获得了较为理想的人肺腺癌细胞系A549细胞2-DE蛋白质表达谱,初步鉴定了15种蛋白质。     

哇巴因、地高辛与高血压发病关系的研究

目的　观察哇巴因、地高辛对组织钠泵α亚单位基因表达的不同影响 ,探讨哇巴因与高血压发病的可能关系。方法　给予大鼠哇巴因 30 μg·kg-1·d-1,地高辛 4 0 μg·kg-1·d-1腹腔注射 7周。用免疫组化及原位杂交方法检测心脏、肾脏、肝脏、腹主动脉和肾上腺组织钠泵α亚单位蛋白水平及mRNA水平的表达。结果　哇巴因与地高辛对上述组织尤其是动脉及肾脏的钠泵α亚单位表达的影响不同 ,哇巴因增强动脉的α2 表达 ,地高辛则抑制其表达 ;哇巴因使肾脏α1表达增强 ,地高辛则使其减弱。结论　哇巴因导致组织钠泵α亚单位基因异常表达 ,这可能在高血压的发病中有重要意义     

EFFECTS OF OUABAIN AND DIGOXIN ON THE GENE EXPRESSION OFSODIUM PUMP α-SUBUNIT ISOFORM IN AORTIC SMOOTH MUSCLE OF RATS

Accumulating evidence indicates that endoge-nous ligands of the digitalis receptor may exist inthe mammalian body, which has recently been de-scribed to be indistinguishable from ouabainL1'2j.Endogenous ouabain (EO) might induce many cy-tobiological changes and play an important role inregulating water and sodium metabolism and vas-cular tone in the body["'J. Many studies haveshowed that EO content in both hypertensive pa-tients and hypertensive animals is much more thanthose of normal subje…     

哇巴因与盐负荷对大鼠心血管超微结构的影响

目的研究哇巴因及盐负荷对大鼠心血管超微结构的影响。方法哇巴因腹腔注射(20μg/(kg.d))构建动物模型,同时给予1%高盐饮水及正常无盐饮水,并建立阴性对照,喂养8周后电镜观察心脏及升主动脉超微结构变化。结果单独注射哇巴因组(12只)及单独高盐饮食组(10只)均有部分大鼠(分别为10/12和7/10)血压升高,此组大鼠分别为“哇巴因敏感鼠”和“盐敏感鼠”,哇巴因注射加高盐饮水喂养组(10只)大鼠血压都升高。血压升高的大鼠其心脏及升主动脉超微结构明显变化,尤以联合干预者为著。结论哇巴因及盐负荷均可以引起高血压发展过程中的心血管重塑,两者具有协同作用。     

哇巴因与地高辛对大鼠血压影响的对比研究

通过给予大鼠外源性哇巴因，观察其对血压的影响，并同地高辛进行对比研究，发现长期给予小剂量哇巴因可引起大鼠血压明显升高，而地高辛无此作用，间接证明了内源性类洋地黄物质即是哇巴因而非地高辛，同时说明哇巴因是导致血压升高的原因之一，而非其继发性的结果，并为哇巴因与高血压的研究提供了一种新的动物模型：哇巴因-高血压鼠。     

Cloning and sequencing of a DNA fragment encoding N37 apoptotic peptide derived from p53

Objective It was reported that p53 apoptotic peptide (N37) could inhibit p73 gene through being bound with iASPP, which could induce tumor cell apoptosis. To further explore the function of N37, we constructed the cloning plasmid of DNA fragment encoding p53 (N37) apoptotic peptide by using DNA synthesis and molecular biology methods. Methods According to human p53 sequence from the GenBank database, the primer of p53(N37) gene was designed using Primer V7.0 software. The DNA fragment encoding p53 (N37) apoptotic peptide was amplified by using self-complementation polymerase chain reaction (PCR) method and cloned into the pGEM-T Easy vector. The constructed plasmid was confirmed by endonuclease analysis and sequencing. Results The insertion of objective DNA fragment was confirmed by plasmid DNA enzyme spectrum analysis, p53 (N37) gene was successfully synthesized chemically in vitro. The sequencing result of positive clone was completely identical to the human p53(N37) sequence in GenBank using BLAST software (http://www. ncbi. him. nih. gov/cgi-bin /BLASTn). Conclusion The cloning of DNA fragment encoding p53(N37) apoptotic peptide was constructed by using DNA synthesis and pGEM-T Easy cloning methods. With the constructed plasmid, we could further investigate the function of N37 peptide.     

哇巴因对血管紧张素Ⅱ及其1型和2型受体mRNA在心肌中表达的影响

目的观察哇巴因(Ouabain)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其1型(AT1)与2型(AT2)受体mRNA在心肌中表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为3组,分别为Ouabain组[27.8 ng/(kg.d)Ouabain腹腔注射]、Losartan组[27.8 ng/(kg.d)Ouabain腹腔注射,同时给予Losartan 30 ng/(kg.d)灌胃]、对照组(生理盐水2 mL/d腹腔注射),每周测定鼠尾血压,共6周。应用放免法测定各组大鼠血浆及心肌中AngⅡ质量浓度,同时采用实时定量荧光PCR(FQ-PCR)观察心肌中AT1和AT2mRNA表达的变化。结果血浆中的AngⅡ质量浓度在Ouabain组及Losartan组均显著高于对照组(P<0.05),而Ouabain组心肌中AngⅡ质量浓度无明显变化。与对照组相比,Ouabain组及Losartan组心肌中AT1mRNA与AT2mRNA的表达明显上调(P<0.05)。结论外周长期、慢性给予Ouabain后可持续升高SD大鼠的血压,并使RAS系统激活,这一作用可能是通过AT1受体介导。给予Ouabain激活AT1受体的同时,AT2活性也增加。     

EXPERIMENTAL STUDY ON THE ROLES OF ENDOGENOUS OUABAIN IN THE DEVELOPMENT OF HYPERTENSION

Endogenous ouabain (EO) ,also named en-dogenous sodium pump inhibitor or endogenousdigitalis- like substance previously,is a kind of hor-mone secreted from adrenal cortex which was dis-covered recently[1～ 4 ] .Sodium,blood volume ex-pander and angiotensin could stimulate EO se-cretion and EO has been proved to have many phys-iological and pathological roles,such as inhibitingNa ,K - ATPase,stimulating cardiac contractili-ty,contracting blood vessel and stimulating sym-pathetic nervous sys…     

SUPPRESSION OF ANGⅡ AFTER ACUTE SALINE LOAD ASSOCIATED WITH THE CHANGES OF PLASMA ANP AND SODIUM METABOLISM IN SALT-SENSITIVE HYPERTENSION PATIENTS

Saltsensitivityisanintermediategenotypeofessentialhypertension ,associatedwithnumerousneuro hormonalabnormalities[1,12 ] .Theregulationdysfunctionofrenin angiotensinsystemisinvolvedinsaltsensitivity ,whichconsistsoftwodifferentregulatoryresponses ,modulatorsandnon modula tors,aftersaltload[2 ,13 ] .Basedonour previousstudies ,theobjectofthisstudyistoinvestigatethechangepatternofrenin angiotensinandatrialnatri ureticpeptide(ANP)ofsaltsensitivehypertensionthroughobservingthechangesinplasmaangio…