一种简单快速的血清HBV－DNA模板的制备方法

一种简单快速的血清ＨＢＶ－ＤＮＡ模板的制备方法党双锁，徐仓宝，歧天茂，顾晓慧（医学分子生物学研究室西安７１００６１）ＰＣＲ技术已被广泛用于检测血清乙肝病毒（ＨＢＢ）ＤＮＡ［１］，以便确定是否有ＨＢＶ感染和有无传染性。在ＰＣＲ中，模板制备至关重要，优质...     

PCR法检测乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA

采用ＰＣＲ法检测了７７例乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＢＶＤＮＡ，２７例阳性，总阳性率为３５．１％。慢性活动性肝炎（９／２１，４２．９％），肝炎后肝硬化（９／１９，４７．４％）及重型肝炎（８／１６，５０．０％）患者ＰＢＭＣＨＢＶＤＮＡ阳性率明显高于慢迁肝（１／１４，７．１％）和急肝（０／７）患者。结果提示ＰＢＭＣ中ＨＢＶＤＮＡ的存在在乙肝发病机理中具有一定意义。     

THREE－YEAR FOLLOW－UP AFTER A SINGLE BOOSTER DOSE OF VACCINE IN THE NONRESPONDERS AND HYPORESPONDERS TO HEPATITIS B VACCINE

ＴＨＲＥＥ－ＹＥＡＲＦＯＬＬＯＷ－ＵＰＡＦＴＥＲＡＳＩＮＧＬＥＢＯＯＳＴＥＲＤＯＳＥＯＦＶＡＣＣＩＮＥＩＮＴＨＥＮＯＮＲＥＳＰＯＮＤＥＲＳＡＮＤＨＹＰＯＲＥＳＰＯＮＤＥＲＳＴＯＨＥＰＡＴＩＴＩＳＢＶＡＣＣＩＮＥ（王学良）（徐慧文）（隋秀芬）（门伯媛）...     

STUDY ON INTELLIGENT DEVELOPMENT AND BEHAVIORAL PROBLEMS OF IRON－DEFICIENT SCHOOL CHILDREN

ＳＴＵＤＹＯＮＩＮＴＥＬＬＩＧＥＮＴＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＡＮＤＢＥＨＡＶＩＯＲＡＬＰＲＯＢＬＥＭＳＯＦＩＲＯＮ－ＤＥＦＩＣＩＥＮＴＳＣＨＯＯＬＣＨＩＬＤＲＥＮ（洪琦）（姚凯南）（刘灵）（赵兵健）ＨｏｎｇＱｉ；ＹａｏＫａｉｎａｎ；ＬｉｕＬｉｎｇ；Ｚｈ...     

IMMUNOHISTOCHEMICAL LOCALIZATION OF EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR AND C－erbB－2 ONCOGENE PRODUCT IN DEVELOPING HUMAN PLACEN

ＩＭＭＵＮＯＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＣＡＬＬＯＣＡＬＩＺＡＴＩＯＮＯＦＥＰＩＤＥＲＭＡＬＧＲＯＷＴＨＦＡＣＴＯＲＲＥＣＥＰＴＯＲＡＮＤＣ－ｅｒｂＢ－２ＯＮＣＯＧＥＮＥＰＲＯＤＵＣＴＩＮＤＥＶＥＬＯＰＩＮＧＨＵＭＡＮＰＬＡＣＥＮＴＡ（马军）（王作清）（苏宝...     

REGULATION OF THE INTERFERON－INDUCIBLE PROTEIN KINASEPKR AND2＇5＇ OLIGOADENYLATE SYNTHETASE BY A CATALYTICALLY INACTIVE PKR M

ＲＥＧＵＬＡＴＩＯＮＯＦＴＨＥＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ－ＩＮＤＵＣＩＢＬＥＰＲＯＴＥＩＮＫＩＮＡＳＥＰＫＲＡＮＤ２＇５＇ＯＬＩＧＯＡＤＥＮＹＬＡＴＥＳＹＮＴＨＥＴＡＳＥＢＹＡＣＡＴＡＬＹＴＩＣＡＬＬＹＩＮＡＣＴＩＶＥＰＫＲ　ＭＵＴＡＮＴＴＨＲＯＵＧＨ　Ｃ...     

T LYMPHOCYTE SUBSETS OF PERIPHERAL BLOOD AND THEIR RELATIONSHIP WITH BETA－2－MICROGLOBULIN IN MULTIPLE MYELOMA

ＴＬＹＭＰＨＯＣＹＴＥＳＵＢＳＥＴＳＯＦＰＥＲＩＰＨＥＲＡＬＢＬＯＯＤＡＮＤＴＨＥＩＲＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＷＩＴＨＢＥＴＡ－２－ＭＩＣＲＯＧＬＯＢＵＬＩＮＩＮＭＵＬＴＩＰＬＥＭＹＥＬＯＭＡ（郑成云）（陈学民）（王宝燕）（陈开浚）ＺｈｅｎｇＣｈｅｎ...     

RIBA在慢性丙型病毒性肝炎中的应用价值

采用含ＨＣＶ三种抗原（Ｃ_（２２），Ｃ_（３３），Ｃ_（１００））的重组免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）检测了７１例抗－ＨＣＶ阳性（ＲＩＡ－２法）的慢性非甲非乙型肝炎患者血清并与ＨＣＶＲＮＡ结果进行了比较。ＲＩＢＡ阳性５６例，可疑８例，对应ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９４．６４％（５３／５６）和３７．５％（３／８），ＲＩＢＡ阴性的７例均未检出ＨＣＶ　ＲＮＡ。ＨＣＶＲＮＡ阳性病例中ＲＩＢＡ多为阳性，可疑仅占５．３６％（３／５６），无１例阴性。可见，ＲＩＢＡ阳性即表示ＨＣＶ感染且存在病毒血症，ＲＩＢＡ可作为第二代ＲＩＡ或ＥＬＩＳＡ查抗－ＨＣＶ的确证实验。     

STUDY OF RELATIONS BETWEEN THE PRESCHOOLERS＇ BEHAVIOR，TEMPERAMENT AND ENVIRONMENTAL FACTORS

ＺｈｏｕＳｈｅｎｇｌｉ（周胜利）；ＹａｏＫａｉｎａｎ（姚凯南）；ＺｈａｏＢｉｎｇｊｉａｎ（赵兵建）；ＬｉｕＬｉｎｇ（刘灵）ＳＴＵＤＹＯＦＲＥＬＡＴＩＯＮＳＢＥＴＷＥＥＮＴＨＥＰＲＥＳＣＨＯＯＬＥＲＳ＇ＢＥＨＡＶＩＯＲ，ＴＥＭＰＥＲＡＭＥＮＴＡＮＤＥＮ...     

从西安地区正常儿童尿中检测人巨细胞病毒DNA

为了研究人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的流行病学及鉴定ＨＣＭＶ核酸在尿中分布，我们用ＨＣＭＶＡＤ１６９株ＨｉｎｄⅢ－ＥＤＮＡ片段制备探针，采用核酸杂交技术对取自西安地区１８０例３岁～５岁正常儿童的尿标本进行了ＨＣＭＶ相关序列的检测。结果显示出西安地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者３例（５０份尿标本）占６％；咸阳地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者７例（５０份尿标本）占１４％；兴平地区ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者１９例（８０份尿标本）占２５％。在不同的地区之间，阳性检出率有较明显地差异。     

乙型肝炎病毒对T细胞亚群的侵犯及对其功能的影响

以单克隆抗体补作溶解法分离T4、T8细胞亚群，PCR检测65例各型乙肝患者T细胞亚群和PBMCs中的HBVDNA，结合细胞免疫功能改变探讨HBV侵犯免疫细胞对其功能的影响。结果表明：PBMCs中HBVDNA阳性24例（24／65，36．92％），不同类型乙肝患者阳性率差异较大；T4、T8、细胞亚群中HBVDNA阳性分别为16例和21例，HBVDNA阳性组IL2R表达明显降低，抑制细胞功能有不同程度的下降；提示HBV对T8细胞可能更具亲嗜性，HBV对免疫细胞的侵犯是乙肝患者细胞免疫功能紊乱的原因之一。     

Methylation status of the interferon-gamma gene promoter in chronic hepatitis B

Objective To evaluate the methylation status at CpG site -55 in the interferon-gamma (IFN-7) gene promoter and its effect on IFN-7 expression in chronic hepatitis B. Method The authors recruited 30 patients with UBeAg-positive chronic hepatitis B (CHB), 30 HBeAg-negative CHB patients, and 30 healthy blood donors. Pyrosequeneing was used to determine the methylation status at CpG site -55 in the IFN-γ gene promoter following bisulfite treatment of DNA in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). The expression of IFN-γ was analyzed by real-time RT-PCR and ELISA. HBV DNA in PBMCs was detected by nested PCR. Results The methylation level at CpG site -55 in the IFN-γ gene promoter was significantly increased, resulting in subsequent down-regulation of the expression of this cytoldne in CHB. The methylation level at CpG site -55 was significantly higher in HBeAg-positive patients than in HBeAg-negative ones (P<0.01) and was also significantly higher in PBMCs from HBV DNA-positive patients than from HBV DNA-negative ones (P<0.01) ; the methylation level at CpG site -55 was positively correlated with the amount of HBV DNA in serum (P<0.01). Oonclusion IFN-γ gene expression appears to be regulated by methylation of the IFN-γ gene promoter in CHB; the methylation level at CpG site -55 is associated with HBV infection.     

慢性乙肝患者HBV核心蛋白启动子变异的初步研究

目的　通过对乙型肝炎病毒 (HBV)基本核心基因启动子 (BCP)变异的研究 ,阐明HBV准种在慢性感染者中存在的意义。方法　以中国株HBV基因序列为依据 ,设计特异性多聚酶链反应 (PCR)引物 ,自 4 0例慢性HBV感染患者血清中扩增HBV的BCP基因 ,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)技术展示缺失突变 ,DNA测序确定病毒的变异程度。结果　聚丙烯酰胺凝胶电泳结果发现 ,6 0 % (2 4 / 4 0 )患者血清中可见 2～ 3条扩增条带 ;测序结果发现BCP区存在多种突变形式 :点突变中以 14 0nt(T→C)最为常见 ,缺失突变多见于TA1,TA2及TA3,多表现为 8bp和 2 0bp的缺失。 结论　HBVBCP区内有一缺失高变区 ,并在患者体内存有多种变异形式 ;TA1,TA2和TA3的变异可能影响e抗原的表达。HBV慢性携带者体内有HBV准种共存     

血清cccDNA在阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎中的预测作用

目的探讨血清共价闭合环状DNA(cccDNA)在阿德福韦酯(ADV)治疗慢性乙型肝炎(CHB)中的临床价值。方法选取81例确诊为CHB的病例,检测其血清cccDNA;根据血清cccDNA的检测结果,将81例患者分为cccD-NA阳性组和cccDNA阴性组,给予阿德福韦酯治疗,并随访到96周,随访时对两组病毒学指标(HBV DNA、HBeAg、HBe-Ab)及丙氨酸转氨酶(ALT)进行比较。结果两组在年龄及性别上的比较差异无统计学意义(P>0.05)。cccDNA阳性组血清的cccDNA与HBV DNA、HBeA及ALT呈正相关性。随访24、48周时两组HBV DNA阴转率、HBeAg血清学转换率及ALT复常率比较均无统计学意义(P>0.05);72周时HBV DNA阴转率和HBeAg血清学转换率比较有统计学意义(P<0.05),ALT复常率无统计学意义(P>0.05);96周时HBV DNA阴转率、HBeAg转阴率、HBe-Ab阳转率及ALT复常率比较差异有统计学意义(P<0.05)。随着治疗时间的延长,cccDNA阴性组在病毒、血清及生化学应答上明显高于cccDNA阳性组。结论阿德福韦酯能够有效抑制病毒复制,血清cccDNA对阿德福韦酯的远期疗效有一定的预测意义。     

用~(32)pHBV DNA探针从慢性携带者尿中检出HBV DNA的初步报告

本实验应用~(32)pHBV DNA 探针,从4例慢性携带着尿经200,000×g12小时超迷离心,浓缩100倍处理,检出1例 HBV DNA 阳性,初步证实了携带者尿中排出 HBV DNA,提示 HBV 有可能经携带者尿液传染,为进一步探讨乙肝的传播途径提供新的实验手段。同时亦证明了超速离心浓缩尿液标本进行 HBV DNA检测是可行的。     

拉米呋啶治疗后乙肝病毒聚合酶YMDD的变异

目的观察拉米呋啶治疗慢性乙肝患者1年前后,患者体内HBV DNA多聚酶结构域C的酪氨酸—甲硫氨酸—天门冬氨酸—天门冬氨酸(YMDD)基因变异情况,及其与血清HBV DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及乙肝标志物变化的关系。方法采用实时荧光定量PCR、ELISA及速率法分别检测60例乙肝患者经拉米呋啶治疗后其血清YMDD、HBV DNA、乙肝标志物及ALT的变化情况。结果拉米呋啶治疗9月、1年后YMDD的变异率分别为5%、13.3%。YMDD变异组HBV DNA阴转率为12.5%,无变异组HBV DNA阴转率为67.3%,两组阴转率相比差异有统计学意义(P<0.01)。拉米呋啶治疗1年后YMDD变异组ALT为(40.7±14.7)u/L,无变异组ALT为(26.5±10.1)u/L,两组相比差异有统计学意义(P<0.01)。5名HbeAg阴转患者无YMDD变异。结论乙肝患者经拉米呋啶治疗后,YMDD变异率随用药时间的延长可逐渐增加,当其HBV DNA、ALT含量出现明显反跳时,应及早改变治疗方案。     

肝炎患者TTV的检测及意义

目的　了解肝炎患者输血传播病毒 (TTV)感染情况 ,探讨其可能的致病作用。方法　采用套式PCR方法检测 2 5例肝炎患者TTVDNA ,对其中 3例进行测序分析。结果　 2 5例各型肝炎中 ,1 2例TTVDNA阳性 ,而 1 8例非甲～庚型肝炎中 8例阳性 ,血清ALT水平均有不同程度升高 ,序列分析与日本株有很高同源性。结论　证实西安地区也存在TTV感染 ,TT病毒可能有一定肝损伤作用 ,TT病毒还可与HBV、HCV重叠感染 ,但似不加重病情。     

THE INVESTIGATION OF DIFFERENT POPULATION＇S TRANSFUSION-TRANSMITTED VIRUS-DNA IN SHAANXI PROVINCE

Objective To investigate transfusion transmitted virus (TTV) infection among population of different groups in Shaanxi Province. Methods A nested polymerase chain reaction (PCR) with primers from ORF1 of TTV genome was established to detect TTV-DNA in serum of the patients. Results TTV-DAN was detected in the sera of 3 of 50 cases of general population(6％), 2 of 30 cases of vocational blood donors(6.7%),21 of 97 cases with Type B hepatitis (21. 6％), 9 of 35 cases of Type C hepatitis (25. 7％),and 23 of 40 cases with non-A～ non-G hepatitis (57.5 ％ ). Conclusion There is TTV infection among general population in Shaanxi Province. TTV may be an impor- tant agent to cause non-A～non-G hepatitis. And the patients with HBV or HCV can have overlapping TTV infection.     

HBeAg特异免疫复合物检测及临床意义

采用单克隆抗－ＨＢｅ固相ＥＬＩＳＡ法检测１１８例ＨＢＶ感染者血清中ＨＢｅＡｇ特异免疫复合物（ＨＢｅＡｇ／ＩＣ），结果表明∶ＨＢｅＡｇ／ＩＣ与ＨＢＶ复制相关，可作为ＨＢＶ复制的一种血清学标志，ＨＢｅＡｇ阴性、ＨＢＶＤＮＡ阳性者中，６２．２％患者ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性，提示ＨＢｅＡｇ／ＩＣ的形成致使夹心法不能检出ＨＢｅＡｇ，这类患者仍可以是ＨＢＶ野毒株感染，并非均为ＨＢｅＡｇ缺陷变异株感染；ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阳性血清ＡＬＴ异常率明显高于ＨＢｅＡｇ／ＩＣ阴性血清（Ｐ＜０．０１），提示ＨＢｅＡｇ／ＩＣ存在与肝损伤有关。