脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对人肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的　观察脂质体 (LR)介导c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对高表达基因c myc的人肝癌细胞SMMC 772 1裸鼠移植瘤生长的影响。方法　人肝癌细胞株SMMC 772 1以 1.5× 10 6 分别接种于裸鼠背部皮下 ,第 14天均生长出瘤结节 [大小为 (4± 1)mm]后 ,分为实验组、空白对照组和错配链寡核苷酸对照组三组。实验组用脂质体包裹的10 μmol·L- 1 浓度ASODN每天一次直接瘤体注射 ,连用 5d ,观察 2 8d。结果　测量裸鼠瘤体外表 ,发现第 5天ASODN组瘤体明显小于对照组 (P <0 .0 5 ) ,瘤质量在第 2 8天后ASODN组明显轻于对照组 (P <0 .0 5 )。组织学HE染色显示瘤体组织在实验组较对照组坏死明显 ,免疫组化结果显示C myc蛋白表达在实验组较对照组降低。 结论　推测应用脂质体包裹ASODN可能对人肝癌细胞SMMC 772 1成瘤的组织细胞生长有一定的抑制作用     

IS导管血管壁内局部导入c-myc反义寡核苷酸预防PTCA术后再狭窄的实验研究

目的　探讨IS导管局部导入c myc反义寡核苷酸及c myc反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞的抑制作用。方法　 2 1只家兔 ,对照组 6只 ,反义寡核苷酸治疗组 15只。用IS导管导入c myc反义寡核苷酸 (1mg)于球囊损伤的髂动脉后 ,动脉血管造影。病理切片 ,图象分析测定新生内膜、中膜、面积和厚度 ,c myc蛋白免疫组化染色。 结果　动脉造影对照组 5 0 %～ 80 %局限狭窄 ,给药组 10 %～ 30 %局限狭窄。光镜观察结果显示 :血管内膜增生面积给药组为 (4.0 4± 1.0 2 )× 10 5μm2 ,对照组为 (7.6 6± 3.7)× 10 5μm ,(P <0 .0 5 ) ;对照组c myc免疫组织化学染色阳性 ,给药组血管c myc免疫组织化学染色显示弱阳性或阴性。结论　IS导管可在体局部导入反义寡核苷酸于动脉损伤靶点 ;c myc反义寡核苷酸可抑制SMCs迁移、增生及新生内膜的形成     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株IL-6/STAT3信号通路的影响和意义

目的通过分析人卵巢癌细胞株转染Survivin反义寡核苷酸(ASODN)后IL-6/STAT3信号通路及其下游相关癌基因的表达以及其侵袭能力的改变,探讨Survivin ASODN在抑制人卵巢癌细胞转移中的可能作用、机制和临床价值。方法脂质体(LipofectamineTM2000)介导Survivin ASODN转染人卵巢癌SKOV3细胞株(实验组),同时设空脂质体对照,Transwell小室检测细胞株侵袭能力的改变,荧光定量PCR检测两组细胞株中白细胞介素6(IL-6)、信号转导与活化因子3(STAT3)、Survivin、血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达,Western blot检测IL-6、STAT3、磷酸化的信号转导与活化因子3(p-STAT3)、Survivin、VEGF-A蛋白的表达。结果实验组细胞株中IL-6、STAT3、Survivin、VEGF基因表达均较对照组明显下调(P<0.05);实验组细胞株中IL-6、STAT 3、p-STAT 3、Survivin、VEGF-A蛋白表达均较对照组明显下调(P<0.05)。实验组细胞株侵袭能力较对照组明显下降(P<0.01)。结论 ASODN靶向抑制Survivin可有效降低人卵巢癌细胞侵袭转移能力,抑制IL-6/STAT3信号通路及其下游相关致癌基因的表达活性。Survivin ASODN可能在防治卵巢癌复发和转移治疗中有临床价值。     

反义寡核苷酸转染A375细胞实验条件的优化

目的研究不同的转染条件下,Survivin反义寡核苷酸(ASODN)对体外培养的人恶性黑色素瘤细胞A375生长的影响。方法通过对ASODN进行硫代修饰、脂质体运转及培养条件的改变,用倒置显微镜、台盼蓝计数观察Survivin ASODN对A375细胞增殖的抑制作用。结果硫代修饰ASODN经脂质体包裹对细胞生长抑制作用明显强于未经脂质体包裹组(P<0.01);②细胞培养6 h贴壁后进行转染对细胞的生长抑制率明显高于24 h后进行转染(P<0.05);③转染期间(4 h)无血清存在组与相应对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);④ASODN转染后12-72 h,对细胞的抑制效应逐渐升高,72 h达顶峰,之后开始回落;⑤与混杂组(SODN)及错配组(MODN)相比,反义组在各个浓度对细胞生长抑制作用最明显,各浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论许多因素影响ASODN的转运,不同的实验应选择不同的实验优化条件。     

K-ras基因点突变的反义寡脱氧核苷酸对人胰腺癌靶基因表达的抑制作用

目的　观察针对于胰腺癌K ras基因点突变的反义寡核苷酸对靶基因表达的抑制作用。方法　脂质体将人工合成的针对于K ras基因第 12位密码子点突变的反义寡核苷酸转染体外培养的人胰腺癌细胞株PC 2 ,用免疫组化和原位杂交技术检测靶基因的表达。结果　转染 4 8h后 ,反义寡核苷酸作用组胰腺癌细胞株PC 2的ras蛋白和K rasmRNA的表达程度较正义组和对照组均明显降低 (P <0 .0 5 )。结论　针对于K ras基因点突变的反义寡核苷酸作用于体外培养的胰腺癌细胞 ,对靶基因的表达有明显的抑制作用     

反义寡核苷酸抑制人恶性黑素瘤A375细胞survivin mRNA及其蛋白的表达

目的研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞survivin mRNA及蛋白表达的影响。方法人工合成survivin ASODN,脂质体介导转染人恶性黑素瘤细胞株A375,采用原位杂交、免疫组化SP法检测survivin mRNA及其蛋白表达的变化。结果转染24 h后,ASODN组A375细胞survivin mRNA表达较对照组显著下调(P<0.01);转染48 h后,与对照组相比,ASODN组细胞的survivin蛋白水平显著下降(P<0.01)。结论Survivin ASODN可下调A375细胞survivin mRNA的表达和survivin蛋白水平。     

c-myc反义寡核苷酸对肾癌细胞的生长抑制作用及对细胞周期的影响

目的　观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法　用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果　①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制肾癌细胞生长的作用 ,12 μmol·L-1c mycASODN组作用 4 8h ,对瘤细胞的生长抑制率为 4 7% ;该生长抑制作用随反义药物剂量的增加而增强 ,同时随作用时间的变化而变化。②流式细胞仪检测证明 ,c mycASODN对肾癌细胞周期的抑制作用在G1期到S期。结论　c mycASODN具有序列特异性和细胞周期特异性地抑制肾癌细胞生长作用     

反义C-myc寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制

针对C－mycmRNA第二外显子起站码AUG及下游4个密码子设计合成了反斗、正义及错配寡核苷酸（ODNS），并对合成的ODNs进行了疏代磷酸化修饰。在人肝癌细胞SMMC－7721培养体系中，对反义寡核苷酸（ASODN）抑制细胞增殖的作用进行了研究。发现①与正义和错配ODNs相比较，反义C－mycODN有明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的作用;②该生长抑制作用随ASODN剂量增加而增强，随ASODN作用时间而变化;③流式细胞计数仅测定证明反义C－mycODN主要阻断肝癌细胞增殖周期的G1到S期。结果提示：反斗C－mycODN在体外有序列特异性和细胞周期特异性抑制人肝癌细胞的生长作用，且该抑制作用与ASODN作用时间及剂量有关。     

chk2反义寡核苷酸对顺铂作用下HeLa细胞凋亡的影响

目的观察宫颈癌HeLa细胞转染chk2反义寡核苷酸后,在顺铂作用下对凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂作用人宫颈癌细胞株HeLa 24、487、2 h后对细胞的生长抑制率。以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测顺铂作用后细胞凋亡率。结果顺铂对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性;反义chk2转染后可明显抑制Chk2蛋白表达(P<0.01),顺铂作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(P<0.01)。结论反义寡核苷酸封闭chk2基因可增加HeLa细胞对顺铂的凋亡敏感性。     

新型纳米金荧光双标survivin反义寡核苷酸探针的合成及其对人恶性黑素瘤A375细胞的影响

目的利用纳米金独特的生物和光学特性,合成一种新型纳米金荧光双标survivin反义寡核苷酸探针,观察其对人恶性黑素瘤A375细胞的影响。方法用柠檬酸钠还原法制备纳米金,将巯基修饰后的survivin反义寡核苷酸结合在纳米金表面,合成纳米金survivin反义寡核苷酸探针;再结合互补的带荧光标记的报告序列,制成纳米金荧光双标survivin反义寡核苷酸探针;将制备的探针转染人恶性黑素瘤A375细胞,荧光显微镜观察细胞内荧光图像,MTT法及流式细胞仪检测A375细胞的增殖及凋亡情况。结果制备的纳米金荧光双标survivin反义寡核苷酸探针转染A375细胞后,可观察到清晰的细胞内荧光图像,可以抑制A375细胞的增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),诱导细胞凋亡增多。结论寡核苷酸功能化的纳米金颗粒可有效转染进人恶性黑素瘤A375细胞,通过反义封闭作用诱导人恶性黑素瘤A375细胞凋亡增多。     

Cathepsin B antisense oligodeoxynucleotide suppresses invasive potential of MG-63 cells

Objective To study the biological effects of cathepsin B phosporotbioated antisense oligodeoxynucleotide on human osteosarcoma cell line MG-63 after transfection. Methods A 18-mer phosphorothioate antisense oligodeoxynucleotide (ASODN) targeted against the cathepsin B mRNA was transfected into the human osteosarcoma cell line MG-63 by lipofectamine 2000. The sense and nonsense oligodeoxynucleotides to cathepsin B and blank vector were used as controls. The expression of cathepsin B mRNA was examined by RT-PCR and the expression of cathepsin B was examined by Western blot. The invasive capability of MG-63 cells was evaluated by the boydern chamber assay. Results The expression of cathcpsin B was obviously inhibited in antlsense oligodeoxynucleotide treated cells compared with the control cells. The number of invading MG-63 cells was significantly lower in the ASODN-treated groups than that in the control groups. Conclusion The cathepsin B ASODN significantly inhibits the expression of cathepsin B and invasive ability of MG-63 cell in osteosarcoma.     

EFFECTS OF ANTISENSE OLIGODEOXYNUCLEOTIDES ON EXPRESSION OF CASPASE-3 IN Γ-RADIATION INDUCED APOPTOTIC HL-60 CELLS

Objective To study the inhibitory effects of caspase-3 mRNA antisense oligodeoxynucleotides (ASODN) on expressions of caspase-3 and it's mRNA in γ-radiation induced apoptotic HL-60 cells, and screen the effective ASODN. Methods ASODN-1 and ASODN-2 targeting 5′-noncoding region and initial translation region of caspase-3 mRNA were respectively designed, synthesized and introduced into HL-60 cells by means of liposome-mediated transfection followed by 10Gy γ-radiation exposures. TUNEL assay was conducted to investigate the morphologic change and apoptotic percentage of HL-60 cells 18 h later. Immunocytochemical staining and one step RT-PCR were respectively performed to detect the expressions of caspase-3 and it's mRNA. Mismatched oligodeoxynucleotide (MODN) transfected and un-transfected HL-60 cells were taken as control. Results TUNEL assay found that the apoptotic percentages in ASODN-1 and ASODN-2 groups were significantly reduced compared with the control groups (P<0.01) when the final concentration of both ASODNs was ≥3μmol/L. Immunocytochemistry showed that caspase-3 positive cell percentages were reduced but the average gray values increased significantly compared with the control groups (P<0.01). RT-PCR showed expressions of caspase-3 mRNA was decreased after ASODN transfection. Furthermore, ASODN-1 proved more effective in inhibiting HL-60 cell apoptosis than ASODN-2 (P<0.01). Conclusion Caspase-3 mRNA ASODNs can prevent HL-60 cells from apoptosis induced by γ-radiation and reduce expression of caspase-3 and its mRNA. These effects are dose dependent in a certain range.     

兔髂动脉内膜受损后增生和c-myc基因的表达

研究兔髂动脉内皮剥脱时血管壁细胞的反应特点和 c- myc基因的表达规律。用标准血管成形导管髂动脉球囊损伤 1 2只家兔的右髂总动脉后 ,分别于 3、7、40 d处死动物 ,用透射电镜观察术后 3d平滑肌细胞 ( SMC)超微结构的变化 ,光镜观察术后血管壁细胞的反应特点和 c- myc蛋白表达规律 ,同时对术后 40 d动物行血管造影。结果发现 :术后 3d兔髂总动脉中层 SMC由收缩型转变为分泌型 ,并向内膜下迁移 ,可见管腔内有血栓形成 ,1周时弹力板不完整 ,中膜 SMC排列紊乱 ,术后 40 d增生的 SMC和细胞外基质形成新生内膜 ,血管造影显示管腔狭窄 5 0 %～ 80 % ;球囊损伤段髂总动脉新生内膜 c- myc蛋白免疫组化染色为阳性 ,而对照组为阴性。结论 :球囊损伤髂动脉后可引起 SMC迁移、增生 ,其和细胞外基质一起形成新生内膜 ,管腔狭窄 ;SMC增生和 c- myc基因表达密切相关。     

米非司酮对早孕绒毛组织EGFR、C-myc蛋白表达的影响

目的　观察米非司酮对早孕绒毛组织表皮生长因子受体 (EGFR)、C myc蛋白表达的影响 ,探讨米非司酮的作用机制。方法　采用免疫组织化学SP法 ,对 30例人工流产早孕妇女和 30例服用米非司酮药物流产的早孕妇女的绒毛组织EGFR、C myc蛋白的表达进行检测。 结果　EGFR在药物流产组的表达强度较人工流产组为弱 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。C myc蛋白在药物流产组与人工流产组的表达强度无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　米非司酮可能通过抑制早孕绒毛组织EGFR的表达 ,促使妊娠终止。     

EFFECT OF STENT ABSORBED c-myc ANTISENSE OLIGODEOXYNUCLEOTIDE ON SMOOTH MUSCLE CELLS APOPTOSIS IN RABBIT CAROTID ARTERY

Ｉｎｔｈｅｐａｓｔｆｅｗ ｙｅａｒｓ ,ｗｅｈａｖｅｗｉｔｎｅｓｓｅｄａｄｒａ ｍａｔｉｃ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｕｓｅｏｆｉｎｔｒａｃｏｒｏｎａｒｙｓｔｅｎｔｓ.Ｓｔｅｎｔｓｎｏｗａｃｃｏｕｎｔｆｏｒｏｖｅｒ 70 %ｏｆｐｅｒｃｕｔａ ｎｅｏｕｓｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌｃｏｒｏｎａｒｙａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ (ＰＴＣＡ ) .Ｈｏｗｅｖｅｒ,ｉｎ ｓｔｅｎｔｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓｒｅｍａｉｎｓａｍａｊｏｒｐｒｏｂ ｌｅｍ ,ｏｃｃｕｒｉｎｇｉｎ 2 0 %～ 30 %ｏｆｔｈｅｓｅ ｐｒｏｃ ｅｄｕｒｅｓ[1-3] .Ｉ…