进展期胃癌脾脏巨噬细胞表型变化及其共培养对胃癌细胞增殖侵袭迁移的影响

目的探讨进展期胃癌脾脏巨噬细胞表型变化及体外诱导培养的M1型和M2型巨噬细胞与胃癌细胞共培养对癌细胞增殖侵袭迁移的影响,以期了解脾脏在胃癌发展中的作用。方法收集福建医科大学附属第一医院2015年3月至2017年5月期间15例行进展期近端胃癌根治术联合脾脏切除术患者的新鲜手术切除脾脏组织,分离巨噬细胞,流式细胞仪检测各型巨噬细胞表型变化;全自动磁珠提取系统从健康志愿者新鲜血液中分离单核细胞,分别给予10 ng/mL的GM-CSF和M-CSF诱导成M1型、M2型巨噬细胞,并用CD16和CD163进行鉴定;利用Transwell共培养法将胃癌细胞SGC-7901和AGS与M1、M2型巨噬细胞和单核细胞共培养,锥虫蓝(台盼蓝)染色进行计数来检测细胞增殖、侵袭迁移能力变化。结果进展期胃癌患者脾脏中M2型巨噬细胞比例增加,M1型巨噬细胞比例降低;单核细胞经GM-CSF和M-CSF体外培养,可分别诱导为M1型、M2型巨噬细胞,其阳性率分别为(95.46±4.21)%和(94.67±4.97)%;M2型巨噬细胞和单核细胞可促进胃癌细胞增殖侵袭迁移,M1型巨噬细胞则抑制胃癌细胞增殖侵袭迁移。结论本研究鉴定出进展期胃癌患者脾脏组织中不同巨噬细胞的比例,证实了不同类型巨噬细胞对胃癌细胞的影响不同,M2型巨噬细胞起促进胃癌细胞进展,而M1型巨噬细胞则对胃癌细胞起抑制作用,进一步揭示了脾脏在胃癌进展中的作用,为临床制订进展期胃癌的治疗方案提供了研究基础。     

姜黄素促进RAW264.7源性M1巨噬细胞向替代激活M2表型极化

目的观察姜黄素对LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)极化的影响及机制。方法不同浓度姜黄素(6.25、12.5、25μmol/L)干预LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)12h,同时再加入20μmol/L GW9662与25μmol/L姜黄素共同干预LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)12h,采用Real-time PCR、ELISA及Western blot方法检测IL-1β、IL-6和M2表型标志分子KLF4、FIZZ1、MGL1、PPARγ的表达,及阻断PPARγ后KLF4和FIZZ1的表达。结果不同浓度姜黄素均能上调LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)的M2标志分子的表达,并且抑制炎症因子IL-1β和IL-6的分泌;阻断PPARγ后,RAW264.7巨噬细胞源性M1表型巨噬细胞表达M2标志分子下调。结论姜黄素通过活化PPARγ促进LPS和IFNγ诱导的RAW264.7巨噬细胞(M1)向M2表型极化。     

白藜芦醇的免疫调节作用

目的　探讨白藜芦醇对免疫系统的调节作用。方法　通过建立免疫抑制模型鼠来观察不同剂量的白藜芦醇对机体免疫功能的影响。结果　不同剂量的白藜芦醇均能显著提高免疫抑制模型鼠的巨噬细胞吞噬率、血清半数溶血值、机体抗体形成细胞数量、淋巴细胞转化率及抑制小鼠耳片肿胀度即正常小鼠的Ⅳ型超敏反应。结论　白藜芦醇可对免疫功能低下和免疫缺陷小鼠发挥免疫调节作用 ,并可抑制正常小鼠的Ⅳ型超敏反应。     

白藜芦醇对急性胰腺炎治疗作用的研究现状与展望

关于急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病机制的研究,一直是国内外学者探讨的热点.对于AP发病的机制,目前主要有胰酶自身消化学说、微循环障碍学说、炎症因子与细胞介质学说、细胞内钙超载学说、肠道细菌易位与"二次打击"学说、氧化应激与NO作用学说等.白藜芦醇因具有抗炎、抗氧化、抑制血小板凝集、改善微循环等药理作用而受到临床工作者的广泛关注,是一种具有良好应用前景的天然药物.近年来,本课题就白藜芦醇对重症急性胰腺炎的治疗作用进行了大量深入的研究并做了系统的文献分析,认为白藜芦醇可以从多个环节发挥作用,从而起到缓解AP造成的胰腺损害及由此引发的多器官功能损伤.     

T_3核受体各亚型mRNA在不同甲状腺功能患者外周血白细胞中的表达

目的　T3对细胞的代谢调节作用是通过甲状腺激素核受体 (T3R)介导的 ,细胞中T3R量与细胞对T3的反应性有关。本文探讨了T3R表达与人体不同甲功状态的关系。方法　应用半定量RT PCR法 ,研究了Graves 甲亢、桥本甲炎甲功正常、桥本甲炎甲减患者外周血白细胞中T3R各亚型mRNA表达量的变化 ,并与正常对照进行比较。结果　外周血白细胞中T3Rα1 、T3Rα2 、T3Rβ2 mRNA表达在Graves 甲亢患者降低 ,在桥本甲炎甲减患者升高 ,而桥本甲炎甲功正常者有升高倾向 ;T3Rβ1 mRNA在不同甲功状态中变化不大。结论　在外周血白细胞中 ,T3RmRNA各亚型表达与甲功状态密切相关 ,T3对其受体亚型mRNA表达水平有下调作用 ,但T3Rβ1 mRNA表达不受甲功状态影响。     

RUNX3基因对RAW264.7巨噬细胞极化的调控作用

目的探讨RUNX3对巨噬细胞极化过程的调节作用和可能机制,为巨噬细胞参与的免疫炎症性疾病提供新的治疗思路。方法 (1)分别用IFN-γ、LPS和IL-4刺激RAW264.7细胞,使用RT-PCR方法检测刺激后细胞表面标志物arginase-1、iNOS的表达变化,观察刺激后RAW264.7细胞是否向M1或者M2方向极化;设定IFN-γ和LPS共刺激的细胞为M1组,IL-4刺激的细胞为M2组;另设正常对照组为M0组;(2)使用免疫荧光、RT-PCR方法检测各组细胞(M1、M2、M0)RUNX3表达情况;(3)建立RUNX3沉默的载体,沉默RAW264.7细胞系RUNX3基因,经G418选择性培养基筛选得到稳定表达的细胞系,RT-PCR检测细胞表面标志物iNOS和CD86变化,用ELISA法检测细胞分泌物TNF-α变化。结果 (1)用IFN-γ和LPS刺激RAW264.7细胞可使RAW264.7细胞向M1亚型极化,RT-PCR检测M1组细胞iNOS表达较M0组升高(P=0.002);而使用IL-4刺激RAW264.7细胞可使RAW264.7细胞向M2亚型极化;RT-PCR检测结果显示,M2组细胞arginase-1表达较M0组升高(P=0.021);(2)RUNX3mRNA在M1组细胞与M0组相比,表达增高(P=0.001),而在M2组细胞中表达降低(P=0.041);(3)沉默RUNX3后,CD86、iNOS mRNA表达较M0组降低(P=0.005),并且细胞分泌TNF-α减少(P<0.001)。结论 RUNX3转录活化可能促进巨噬细胞向M1型极化。     

小鼠抗人T淋巴细胞表面抗原噬菌体抗体库的构建及筛选

目的　构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法　以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以人T淋巴细胞为靶抗原 ,对该库进行了 3轮淘洗 ,ELISA方法鉴定噬菌体抗体。结果　成功构建了最大实际库容量为 1 .75× 1 0 6的小鼠抗人静息T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库和小鼠抗人活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库。结论　所构建的抗体库可进一步用于对T淋巴细胞表面蛋白抗原的差异显示分析及构建基因工程抗体。     

恶性肿瘤患者胸腹水中巨噬细胞的功能观察——细胞毒性作用、白细胞介素1产生的能力

为探讨人肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在肿瘤发展中的作用,在体外研究了20例癌性胸、腹水中巨噬细胞(Mφ)的功能,包括 IL-1的产生和对人肺癌细胞系PGT 的细胞毒作用,用12例结核性胸水中之 Mφ作为对照。实验表明:TAM 的IL-1产生能力及细胞毒作用均较结核性胸水 Mφ为低;LPS、IFN 或消炎痛可增强 TAM 的此等功能;患者自身胸、腹水于高浓度时(≥12.5%)抑制而于低浓度时(6.35%)增强此等 TAM 功能。实验提示 TAM 中抑制性 Mφ增多、一些 TAM 处于未活化状态和癌性积液中存在的某些其它抑制因子均可能与 TAM 功能降低有关.     

L-精氨酸对实验性结肠癌的作用与机理

目的　研究L 精氨酸在Wistar大鼠实验性结肠癌中的作用及其机制。方法　用致癌物1 ,2 二甲基联苯 (DMH)每周 1次皮下注射 2 0周建立大鼠结肠癌模型 ,给予L 精氨酸溶液口服 ,对照组皮下注射EDTA ,大鼠共分为 6组 ,每组 1 8～ 2 0只。 2 2周后处死动物 ,研究肿瘤特性、全血淋巴细胞对有丝分裂素PHA的反应、T细胞亚型 (CD2 ,CD4,CD8)及血浆胃泌素浓度变化。结果　精氨酸可明显降低结肠癌的体积 ,而对结肠腺瘤则无明显差异。早期全程应用精氨酸明显减少侵犯到粘膜下层的腺癌数量 ,刺激淋巴细胞对有丝分裂素的反应并提高T细胞亚型的分布。但精氨酸不改变CD4/CD8比率以及胃泌素的浓度。结论　精氨酸降低实验性结肠癌的生成可能与其非特异性刺激机体淋巴细胞免疫功能有关 ,这种作用在肿瘤发生早期更显著。     

银屑病患者初发皮损中单个核细胞的观察

用单克隆抗体、ABC法对10例寻常型泛发性进行期银屑病患者初发皮损中单个核细胞进行分析,发现初发皮损内增多的单个核细胞以T淋巴细胞为主,巨噬细胞次之,并且大部分呈DR~+,未见B淋巴细胞,表皮内DR~+树枝状细胞和DR~+角朊细胞常与其周斟DR~+T淋巴细胞位置很接近,说明银屑病的发生与细胞免疫紊乱密切相关。     

褪黑素的免疫调节作用

目的　研究褪黑素对机体免疫功能的调节作用。方法　在同一时间内通过检测巨噬细胞吞噬率、血清半数溶血值 ,体外抗体形成细胞数量 ,MTT法淋巴细胞转化率及小鼠耳片肿胀度测定机体的非特异性和特异性免疫功能。结果　褪黑素能提高小鼠巨噬细胞吞噬率 ,血清半数溶血值 ,体外抗体形成细胞数量 ,淋巴细胞转化率及小鼠耳片肿胀度。结论　褪黑素可对免疫功能低下和免疫缺陷鼠发挥免疫上调作用。     

过敏性哮喘对小鼠动脉粥样硬化斑块发生发展及稳定性的影响

目的观察过敏性哮喘对apoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)病变发生及发展不同时期的影响。方法取6周龄的apoE-/-小鼠,以卵清蛋白(OVA)致敏后给予雾化吸入,激发哮喘发作以建立过敏性哮喘模型,激发2周后检测小鼠肺部病理改变判断造模是否成功。造模成功后分别于激发2周、4周、8周及16周时处死小鼠,取主动脉根部进行冰冻切片,油红O染色并计算AS斑块相对面积,CD68荧光染色检测斑块内巨噬细胞含量,天狼星红染色检测斑块内胶原含量。结果与对照组相比,过敏性哮喘apoE-/-小鼠主动脉根部在激发2周时就有明显的斑块形成和巨噬细胞浸润,并且随着激发时间的延长,斑块面积和斑块内巨噬细胞含量始终高于对照组,同时斑块内胶原含量下降。结论过敏性哮喘促进apoE-/-小鼠AS斑块的形成和发展,并导致其稳定性降低。     

一氧化氮对自发性高血压大鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨一氧化氮(NO)对调节外周血T淋巴细胞亚群的比值和促炎因子的影响及其对高血压造成的靶器官损伤的作用。方法选取12周龄SHR和WKY大鼠,随机分为WKY组、SHR组和SHR+NO干预组,每组6只,SHR+NO干预组按10μg/(kg·d)腹腔注射硝普钠(NO供体)4周,WKY组和SHR组用等量生理盐水腹腔注射4周。测量尾动脉血压后,采用HE染色法观察脑基底动脉和肾脏病理学改变;流式细胞术检测外周血CD4~+/CD8~+和CD4~+CD25~+T细胞比值;ELISA检测外周血血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果与WKY组比较,SHR组大鼠出现脑基底动脉内皮细胞受损、血管壁增厚、肾小球萎缩和炎性细胞浸润,SHR+NO干预组较SHR组大鼠炎性损伤程度减轻;与WKY组比较,SHR组大鼠外周血CD4~+/CD8~+的比值升高(P<0.01),CD4~+CD25~+的比值下降(P<0.01),SHR+NO干预组较SHR组CD4~+/CD8~+的比值降低(P<0.01),CD4~+CD25~+的比值升高(P<0.05);SHR组大鼠血清中TNF-α表达较WKY组升高(P<0.01),SHR+NO干预组较SHR组TNF-α表达降低(P<0.05)。结论 NO通过调节外周血T淋巴细胞亚群的比值,减少促炎因子的释放,进而改善高血压造成的靶器官损伤。     

自身免疫性甲状腺炎和甲亢原位免疫电镜研究

利用ABC免疫酶技术和一组淋巴细胞亚群、巨噬细胞,HLA-DR抗原的单克隆抗体及免疫电镜技术观察了10例甲状腺炎,7例甲亢伴甲状腺炎,6例甲亢。结果发现甲状腺内有大量活化T淋巴细胞浸润。引人注目地是甲状腺上皮细胞可异常表达DR抗原,且随着淋巴细胞浸润的增多,炎性破坏加重,甲状腺上皮细胞DR抗原的异常表达亦增多。I_2~+、T_8~+、T_4~+细胞、M_5~+细胞和Leu7~+细胞均可与甲状腺滤泡上皮细胞接触并侵入上皮细胞内。免疫活性细胞的直接杀伤作用,可能是甲状腺上皮细胞受损的重要因素。     

熊果酸免疫调节作用的初步研究

目的观察熊果酸(UA)对正常小鼠及免疫抑制小鼠的免疫调节作用。方法用MTT染色法检测淋巴细胞转化功能,用溶血分光光度法检测抗体形成细胞功能,用巨噬细胞吞噬实验检测非特异免疫功能,用ELISA方法检测小鼠血清中Th1型细胞因子白介素-2(IL-2)和Th2型细胞因子白介素-6(IL-6)质量浓度的变化。结果UA对于正常小鼠的细胞免疫功能为小剂量促进,大剂量抑制,对体液免疫功能表现出剂量依赖性抑制作用。对于免疫抑制的小鼠,UA可以全面改善免疫功能,各个剂量组与对照组相比均有显著性差异(P<0.05),其中以中剂量组效果最为显著。结论UA具有免疫调节作用,对于正常的机体表现出使免疫功能向Th1漂移的特点。UA能够显著增强环磷酰胺致免疫低下小鼠的免疫功能。     

ACSL1促进肝脏脂质积累与炎症发生并参与疾病发展的研究进展

长链脂酰辅酶A合成酶(acyl-CoA synthetase long-chain, ACSL)属于多基因家族编码的酶,位于内质网和线粒体外膜上的ACSL主要催化脂肪酸形成脂酰辅酶A(acyl-CoA),参与脂肪酸代谢、膜修饰等多种生理过程。ACSL家族在不同细胞的脂肪酸代谢中发挥不同作用,其功能异常可导致如脂肪肝、动脉粥样硬化和糖尿病的发生。ACSL家族成员1(ACSL family member 1,ACSL1)作为ACSL家族在肝脏中的主要亚型,主要参与维持胆固醇稳定、脂肪酸活化以及胆汁酸代谢,同时与某些肝脏疾病如肝细胞癌、非酒精性脂肪肝的发生发展密切相关。本文综述了ACSL家族各成员的生理功能、作用特点,并阐释了ACSL1对脂质代谢、调节细胞铁死亡的影响以及在相关疾病如肝纤维化、肝细胞癌、恶病质、非酒精性脂肪肝、甲状腺癌以及乳腺癌发展中的作用机制的研究进展。     

Toll样受体参与类风湿性关节炎发病机制的研究进展

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)作为一种自身免疫性疾病,其病情迁延,是造成我国人群劳动力丧失与致残的主要病因之一。因此,对其病因和发病机制的阐明就显得尤为重要。近年来,Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)在RA和实验性关节炎中的作用机制受到了广泛关注。已经发现RA患者的滑膜组织(细胞)、免疫细胞等都存在某些TLR表达的改变。这些TLR可介导滑膜成纤维细胞的细胞因子、趋化因子、基质金属蛋白酶等的产生,同时参与巨噬细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞等免疫细胞的功能调节,也能通过对血管内皮细胞及软骨细胞的功能调节,促进血管生成和软骨破坏,从而参与RA及实验性关节炎的进展。总之,多种TLR在不同细胞中协同或拮抗发挥作用,共同参与并影响了关节炎的发病过程,相关的研究为RA的早期预防、诊断、治疗及特异性药物的开发提供了实验依据。     

黄芪蛰虫口服液对氢化可的松免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用

目的研究黄芪蛰虫口服液对氢化可的松免疫抑制小鼠免疫功能的影响。方法50只昆明小鼠随机分为5组,每组10只。除正常对照组外其他4组建立氢化可的松(HC)免疫抑制动物模型,建模成功后用药3组分别按0.2、0.1、0.05mL/10g体重每天灌胃1次,10d后检测小鼠腹腔巨噬细胞活性、脾脏T淋巴细胞增殖转化能力、脾脏NK细胞活性、脾细胞产生抗体能力和IL-2的能力。结果不同剂量黄芪蛰虫口服液不同程度地提高HC免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬活性、脾脏T淋巴细胞增殖转化能力、脾脏NK细胞的活性、脾脏产生抗体能力及IL-2能力的作用。结论黄芪蛰虫口服液具有提高HC免疫抑制小鼠的某些免疫功能。     

蛋氨酸—脑啡肽改变缺锌小鼠脾淋巴细胞的增殖反应

本试验检测蛋氨酸—脑啡肽(M—EnK)在缺锌(Zn)组、配对组和对照组小鼠脾细胞对促细胞分裂原和混合淋巴细胞培养(MLC)反应上的效应。试验数据显示M—EnK能抑制以上3组淋巴细胞对ConA的反应,但对缺Zn组的抑制作用较小。M—EnK也能增进所有各组对美洲商陆(PWM)以及减少对脂多糖(LPS)的反应。对ConA、PWM和LPS增殖反应的改变可以被10μmol/L纳络酮所逆转。提示M—EnK在细胞增殖反应上的效应是通过阿片受体介导而实现的。在MLC增殖反应中,在缺少M—EnK时,缺Zn小鼠淋巴细胞的反应增加,M—EnK能抑制这种增加的反应。试验结果表明M—EnK能改变有丝分裂反应方式,Zn缺乏又能影响这种改变。     

心肌炎患者T淋巴细胞亚群改变

本文应用淋巴细胞单克隆抗体检测了两型心肌炎患者外周血淋巴细胞亚群,发现心肌炎心力衰竭组患者的T_8亚群明显低于心肌炎心律失常组及正常人,而T_4/T_8比值明显升高。同时用短寿命细胞法发现心肌炎心力衰竭组患者的抑制性T淋巴细胞功能明显降低,并与射血分数之间存在明显的正相关。免疫调节异常在心力衰竭型心肌炎的发病中起重要作用。