血红素加氧酶-1在胃癌顺铂化疗敏感性中的作用

目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)及其抑制剂在胃癌顺铂(CDDP)化疗中的作用,为胃癌化疗敏感性提供潜在的增敏靶点。方法 MTT法检测锌原卟啉IX(ZnPPIX)及CDDP对胃癌细胞株SGC7901增殖能力的影响;Western blot和Real-time PCR分别检测胃癌细胞中HO-1蛋白和mRNA的表达;构建裸鼠皮下种植瘤模型并进一步观察ZnPPIX及CDDP对胃癌成瘤能力的影响。结果 CDDP联合ZnPPIX干预胃癌细胞明显抑制肿瘤细胞的增殖率(P<0.05);同时,CDDP胃癌细胞中HO-1mRNA水平和蛋白的表达增加(P<0.05)。而CDDP联合ZnPPIX干预细胞组的HO-1的表达较对照组明显降低(P<0.05)。荷瘤实验结果显示,CDDP可抑制胃癌皮下种植瘤的生长,肿瘤体积和质量明显降低。结论 HO-1抑制剂ZnPPIX可增强CDDP对胃癌的化疗敏感性,有可能成为潜在的胃癌CDDP化疗方案的增敏剂。     

人脑胶质瘤中RSUME的SUMO化与HIF-1α/VEGF通路的相关性

目的探讨人不同病理级别脑胶质瘤组织中RWD结构修饰增强子(RWD containing sumoylation enhancer,RSUME)、泛素样小分子修饰因子(small ubiquitin-like modifier,SUMO)-1、缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其相关性。方法应用RT-PCR法检测63例不同级别人脑胶质瘤组织及9例正常脑组织中RSUME mRNA、HIF-1αmRNA、VEGF mRNA的表达,免疫组化检测组织中SUMO-1、HIF-1α、VEGF表达情况,分析与胶质瘤分级的关系以及表达的相关性。结果脑胶质瘤组织中RSUME、HIF-1α、VEGF mRNA较正常脑组织中表达明显增高(P<0.01),并随胶质瘤恶性程度的增高而表达增高(P<0.01),RSUME与HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平呈正相关;脑胶质瘤组织中SUMO-1、HIF-1α、VEGF的蛋白表达较正常脑组织明显增高(P<0.01),并随胶质瘤恶性程度的增高而表达增高(P<0.01),SUMO-1与HIF-1α蛋白表达呈正相关(r=0.857,P<0.01);Kaplan-Meier生存分析及Log-rank检验显示低表达RSUME患者的PFS明显长于高表达组(χ2=36.032,P<0.01)。结论 RSUME可能通过SUMO化增强HIF-1α/VEGF通路表达,预示RSUME可能与脑胶质瘤血管新生及肿瘤的侵袭、进展有关,预示RSUME可作为胶质瘤治疗的新靶点。     

竹叶提取物通过调控Akt/HIF-1α通路抑制低氧条件下人乳腺癌MCF-7细胞的恶性生长

目的探究竹叶提取物对低氧条件下人乳腺癌MCF-7细胞恶性生长的影响及分子机制。方法将培养的人乳腺癌MCF-7细胞随机分为正常组、低氧组以及0.2、0.4、0.8μg/mL竹叶提取物组和0.8μg/mL竹叶提取物组+IGF-1组。CCK-8法检测各组细胞的增殖活性变化,RT-PCR和Western blot检测细胞增殖标记蛋白PCNA、Ki-67和MCM2表达,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和survivin表达;并探讨Akt/HIF-1α通路在竹叶提取物抑制癌细胞生长中的作用。结果竹叶提取物处理后,低氧下MCF-7细胞的增殖活性和PCNA、Ki-67和MCM2的表达显著性降低并呈现剂量依赖性(P<0.01);而细胞G2/M期比例增加(P<0.01);此外,竹叶提取物处理后细胞凋亡率明显增加,同时Bax和caspase-3表达上调,Bcl-2和survivin表达下调(P<0.01);此外,竹叶提取物组Akt/HIF-1α通路中p-Akt和HIF-1α的表达下调(P<0.01),Akt/HIF-1α通路激动剂IGF-1可逆转竹叶提取物对低氧下MCF-7恶性生长的抑制作用。结论竹叶提取物可通过下调Akt/HIF-1α信号通路抑制低氧条件下人乳腺癌MCF-7细胞恶性生长。     

姜黄素对裸鼠人ACHN肾癌移植瘤的放射增敏作用

目的探讨姜黄素对裸鼠人ACHN肾癌移植瘤的放射增敏作用及其机制。方法建立人ACHN肾癌裸鼠皮下移植瘤模型;筛选合适的姜黄素浓度和放射性剂量进行实验;随机分组进行药物或放射线干预,观察不同处理组裸鼠移植瘤生长情况,确定姜黄素对裸鼠移植瘤的放射增敏作用;采用流式细胞仪检测不同组移植瘤细胞凋亡;Western blot检测不同组DNA损伤修复相关蛋白DNA-PKcs和NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果细胞悬液接种法可成功建立人ACHN肾癌移植瘤模型,成瘤率85.7%;采用总剂量10 Gy放射剂量和25 mg/kg姜黄素进行实验;移植瘤生长曲线显示姜黄素组、放射组和实验组的抑瘤率分别为7.93%、49.20%、71.42%,实验组对移植瘤生长抑制效果明显高于姜黄素组及放射组(P<0.05),放射增敏率(E/O)值=1.64>1.4;与放射组相比,实验组的凋亡率显著升高(P<0.05),DNA-PKcs和NF-κB P65蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),I-κB蛋白的表达显著升高(P<0.05),NF-κB下游调控蛋白VEGF、COX_2和Bcl-2蛋白的表达水平亦显著降低(P<0.05)。结论姜黄素对人ACHN肾癌裸鼠移植瘤具有放射增敏作用;姜黄素的放射增敏作用与其诱发肿瘤细胞凋亡、抑制DNA损伤修复和抑制NF-κB信号通路的激活密切相关。     

低氧对人支气管上皮细胞气道重塑相关因子表达的影响

目的研究低氧刺激对人支气管上皮细胞(16HBE)中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)表达的影响及其相关信号机制。方法将细胞分组,低氧组用20mL/L O2培养16HBE细胞,培养时间分别为6、12、24h;对照组于常规条件下培养。选择MMP-9和TGF-β_1表达较高的时间组予以表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478、低氧诱导因子(HIF-1α)抑制剂Lificiguat(YC-1)干预。CCK-8法检测各组细胞活力,实时荧光定量PCR检测MMP-9和TGF-β_1的转录水平,Western blot检测HIF-1α、MMP-9和TGF-β_1的蛋白相对表达水平。结果低氧组MMP-9和TGF-β_1转录及蛋白水平均高于对照组(P均<0.05),AG1478、YC-1可抑制低氧引起的上述改变(P<0.05);AG1478能降低在低氧诱导时高水平表达的HIF-1α。结论低氧刺激可能通过EGFR诱导HIF-1α表达,进而促进气道重塑相关因子MMP-9和TGF-β_1的表达。     

铁碳纳米粒介导顺铂对肺癌细胞化疗敏感性的影响

目的观察铁碳纳米粒搭载顺铂对肺癌细胞的抑制作用及对肺癌细胞Caspase 3和Survivin mRNA表达的影响。方法将肺癌细胞分为对照组、药物组、微粒组和药物微粒组,MTT法检测细胞生长活性,RT-PCR法检测肺癌细胞Caspase 3及Survivin mRNA的表达。结果药物微粒组和药物组肺癌细胞的生长明显受抑制,尤其药物微粒组的抑制作用更为突出,且出现凋亡征象。药物组和药物微粒组肺癌细胞Caspase3mRNA表达水平高于对照组,而Survivin mRNA表达减弱,并且药物微粒组的作用较药物组更为显著(P<0.05)。结论铁碳纳米粒搭载顺铂能够显著增加肺癌细胞对顺铂的敏感性,增强药物的化疗效果。     

低氧诱导因子在肝肺综合征大鼠肺组织中的表达及其与糖调节蛋白78的关系

目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在大鼠肝肺综合征(HPS)发病中的作用及其与糖调节蛋白78(GRP78)的关系。方法复合致病因素法制备HPS大鼠模型。Western blotting法检测肺组织HIF-1α、血管内皮生长因子164(VEGF164)及GRP78蛋白表达水平。免疫组化染色法观察肺组织VEGF受体2(VEGFR-2)及CD105的表达。结果模型组动物肺组织HIF-1α蛋白表达水平在第8周显著高于同期正常对照组及4周、6周组;GRP78蛋白表达随病程进展逐渐升高,至第8周达到最高水平,各时间点之间以及与同期正常对照组比较差异均具有统计学意义;VEGF164蛋白表达随病程进展逐渐增加,至6周达到高峰,各时间点均显著高于同期正常对照组,6周和8周表达水平显著高于4周;VEGFR-2及CD105免疫组化染色强度和数量均随HPS进展逐渐增高;GRP78分别与VEGF164、VEGFR-2及CD105的表达水平呈正相关(P<0.05),HIF-1α与GRP78亦呈正相关关系(P<0.05)。结论 HIF-1α可能在HPS发病中起一定作用,与GRP78共同促进了肺微血管重构。     

香菇多糖对培养肝癌细胞索拉非尼耐药的逆转作用及机制

目的初步探讨香菇多糖对索拉非尼(Sorafenib)耐药肝癌细胞BEL-7402/S的作用及机制。方法 CCK-8法检测香菇多糖、索拉非尼对BEL-7402和BEL-7402/S细胞的增殖-毒性作用,以及香菇多糖对索拉非尼的耐药逆转倍数;RT-qPCR及Western blotting法检测香菇多糖对BEL-7402/S细胞中缺氧诱导因子-1(hypoxia-induced factor, HIF-1α)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的mRNA以及蛋白表达的影响。结果香菇多糖组BEL-7402和BEL-7402/S细胞增殖较对照组减弱。16 mg/L的香菇多糖部分逆转BEL-7402/S细胞对索拉非尼的耐药。香菇多糖BEL-7402/S细胞中VEGF和HIF-1α的mRNA和蛋白的表达降低。结论香菇多糖具有部分逆转BEL-7402/S细胞对索拉非尼耐药的作用,其机制可能与VEGF和HIF-1α表达下调有关。     

二氯乙酸通过抑制HIF-1α、激活p53凋亡通路增强替莫唑胺的化疗作用

目的探讨二氯乙酸(DCA)增强替莫唑胺(TMZ)对人脑胶质瘤细胞的抑制作用及机制。方法通过体外实验,观察DCA单药、TMZ单药以及DCA/TMZ联合对人脑胶质瘤细胞的抑制作用;MTT比色法检测细胞增殖;流式细胞技术检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)的变化;激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位(MMP);蛋白质印迹法检测细胞低氧诱导因子(HIF-1α)和p53凋亡通路相关蛋白的表达。结果 DCA/TMZ联合更有效抑制胶质瘤细胞增殖、使MMP降低、细胞内ROS增加、细胞凋亡增加;HIF-1α表达下降、p53表达升高。结论 DCA能增强TMZ对人脑胶质瘤细胞的抑制作用,其机制与抑制HIF-1α、激活p53凋亡信号通路有关。     

chk2反义寡核苷酸对顺铂作用下HeLa细胞凋亡的影响

目的观察宫颈癌HeLa细胞转染chk2反义寡核苷酸后,在顺铂作用下对凋亡的影响。方法采用MTT法检测不同浓度顺铂作用人宫颈癌细胞株HeLa 24、487、2 h后对细胞的生长抑制率。以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞,用Western blot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达,用流式细胞仪和TUNEL法检测顺铂作用后细胞凋亡率。结果顺铂对HeLa细胞有生长抑制作用,并有时间和浓度依赖性;反义chk2转染后可明显抑制Chk2蛋白表达(P<0.01),顺铂作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组(P<0.01)。结论反义寡核苷酸封闭chk2基因可增加HeLa细胞对顺铂的凋亡敏感性。     

己糖激酶2在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的探讨己糖激酶2(HK2)在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖能力的影响。方法采用实时定量PCR法及免疫组化法检测14例正常卵巢组织及27例卵巢癌组织中HK2的表达水平;利用HK2过表达质粒及HK2siRNA瞬时转染SKOV3细胞系,Western blot检测HK2的蛋白表达水平,CCK8法检测各组细胞的增殖情况。结果 27例卵巢癌组织中HK2表达水平显著高于14例正常卵巢组织(mRNA及蛋白水平);临床分期越晚、病理分级越高、远处转移者HK2表达水平更高(P<0.05);过表达HK2后,SKOV3细胞增殖能力增强;敲低HK2后,SKOV3细胞增殖能力受抑。结论 HK2在卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织,其具有促进卵巢癌细胞增殖的作用。     

P-糖蛋白、Survivin蛋白在卵巢上皮性癌中的表达及其与卵巢癌耐药的关系

目的检测抑凋亡蛋白Survivin及多药耐药基因mdr1的表达蛋白P-糖蛋白(P-gp)在卵巢上皮性癌中的表达,分析其在卵巢癌化学治疗耐药中的作用及与临床病理学特征间的关系。方法应用免疫组织化学技术SP法检测8例正常卵巢组织、16例良性上皮性卵巢肿瘤、46例上皮性卵巢癌(浆液性癌28例、粘液性癌12例、内膜样癌6例)组织中的Survivin、P-gp蛋白的表达情况。结果Survivin、P-gp蛋白在卵巢癌组织中阳性表达率分别为60.9%和34.8%,显著高于良性上皮性卵巢肿瘤组织31.3%、0%和正常卵巢组织(阴性)(P<0.05)。Survivin蛋白在Ⅲ-Ⅳ期恶性上皮性卵巢肿瘤组中的阳性表达高于Ⅰ-Ⅱ期肿瘤组(P<0.05);在低分化恶性上皮性卵巢肿瘤组织中的阳性表达高于中、高分化肿瘤组,有显著性差异(P<0.05),但与肿瘤组织类型无关。Survivin与P-gp在恶性上皮性卵巢肿瘤组中存在共同表达,卡方检验P<0.05,呈正性相关。结论卵巢癌存在原发性耐药,而由Survivin高表达引起的凋亡抑制在卵巢癌多药耐药的发生中起一定作用。     

重视与遗传相关的卵巢癌

约20%~25%上皮性卵巢癌的发生与遗传因素相关。遗传相关的卵巢癌包括遗传性卵巢癌和家族性卵巢癌。肿瘤的遗传学特性和基因检测技术的发展,使得人们可以通过家族中的先证者检出与肿瘤相关的致病突变基因,找出其他携带有高危致病突变基因的家族成员,并进行相应的早期干预,实现肿瘤的早期预防和发现。本文对与遗传相关的卵巢癌的遗传基础、疾病特点、突变基因的检测方法、先证者的处理、现阶段面临的问题及高危个体的疾病预防等方面进行综述,强调在临床工作中重视与遗传相关的卵巢癌,找出先证者并对其亲属的患病风险进行综合评估并给出个体化的指导意见,践行精准医学理念。     

Twist和VEGF在上皮性卵巢癌中的表达

目的探讨Twist及VEGF在卵巢癌发生发展中的作用及其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测Twist及VEGF蛋白在80例上皮性卵巢癌组织中的表达情况,并选取10例正常卵巢组织作为对照。结果在80例上皮性卵巢癌组织中,Twist及VEGF蛋白均表达于细胞质中,其阳性表达率分别是85%(68/80)、86.25%(69/80),明显高于正常卵巢组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。Twist和VEGF表达与上皮性卵巢癌临床分期、病理分级、淋巴结转移相关(P<0.01),与年龄、病理类型无关(P>0.05)。在上皮性卵巢癌中,Twist与VEGF蛋白的表达呈正相关(r=0.646,P<0.01)。结论 Twist及VEGF在上皮性卵巢癌的发生、发展和侵袭中有重要作用。     

多囊卵巢综合征的生殖内分泌特征、卵巢形态学改变与克罗米酚疗效间的关系

目的　探讨多囊卵巢综合征 (PCOS)妇女用克罗米酚 (CC)促排卵治疗无效的原因 ,以预测其疗效。方法　 41例PCOS患者均计算BMI ,行F G毛发评分 ,服CC前后测血清生殖激素水平 ,B超了解卵巢形态并监测排卵。结果　与CC治疗有反应组相比 ,无反应组的F G毛发评分、基础A、fT增高 ,卵泡数增多 ,卵巢体积及髓质面积增大 ,卵泡晚期FSH、LH、E2 降低 (P均 <0 0 5) ;相关回归显示平均卵泡数与T、A ,平均髓质面积与A呈正相关。结论　多毛患者对CC治疗的反应性降低。H P O轴功能状态可影响CC疗效 ;一定的激素水平和卵巢超声表现提示CC抵抗 ;卵巢超声形态与T、A间存在正相关     

青春期女性月经失调与卵巢形态学分析

目的研究青春期女性月经失调与卵巢形态学的关系,为青春期多囊卵巢综合征(PCOS)的诊断提供参考。方法收集2014年9月至2015年9月于西安交通大学第一附属医院妇科门诊和妇女保健门诊就诊的、初潮2年后青春期月经失调212例患者的临床资料并进行分析。结果212例月经失调患者中,以月经稀发最为常见(33.96%),其次为闭经(16.51%);不同类型月经失调患者F-G评分及痤疮评分差异均有统计学意义(F值分别为1.39、1.77,P均<0.05),以月经稀发患者的评分最高;月经稀发患者卵巢体积、窦状卵泡数目、卵巢最大面积均显著高于非月经稀发组(t值分别为2.89、5.76、6.23,P均<0.05);正常卵巢组、多滤泡卵巢组、多囊卵巢组的临床表现差异有统计学意义(χ~2=43.25,P<0.05);多囊卵巢组月经稀发的发病率最高(49.30%),其次为多滤泡卵巢组(42.59%);血黄体生成素(LH)、睾酮(T)、LH/血清卵泡刺激素(LH/FSH)差异均有统计学意义(F值分别为3.45、2.43、2.76,P均<0.05),且多囊卵巢组均为最高;3组中诊断为青春期PCOS的病例数差异有统计学意义(χ~2=26.58,P<0.05),同样多囊卵巢组最高,但多滤泡卵巢组也有12例确诊为青春期PCOS(22.22%);212例青春期月经失调患者中共诊断青春期PCOS者45例(21.23%),根据患者体质量指数(BMI)分为肥胖组和非肥胖组,肥胖患者卵巢体积、窦状卵泡数目、卵巢最大面积均显著高于非肥胖者(t值分别为3.42、7.89、4.02,P均<0.05),且空腹和2h稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA IR)均显著升高(t值分别为8.89、10.62,P均<0.05)。结论月经稀发是青春期月经失调最为常见的类型,月经稀发及肥胖患者多数伴卵巢形态学异常,应定期随访。     

P27KIPL蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及意义

目的　探讨P2 7KIPL蛋白在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其与生物学行为和预后的关系。方法　采用免疫组化SP法检测 88例卵巢浆液性肿瘤中P2 7KIPL蛋白的表达水平。结果　 6 1例卵巢浆液性囊腺癌中P2 7KIPL阳性表达率为 4 6 % (2 8/ 6 1例 ) ,明显低于浆液性囊腺瘤 80 % (12 / 15例 )和浆液性交界性肿瘤 75 % (9/ 12例 ) (P <0 0 5 )。P2 7KIPL阳性表达在Ⅰ级癌中表达率最高 73 3% ,Ⅱ级癌 4 6 7% ,Ⅲ级癌表达最低 12 5 %。三组之间差异显著 (P <0 0 5 ) ,P2 7KIPL阳性表达与组织分级呈负相关。早期 (Ⅰ Ⅱ期 )P2 7KIPL表达率 76 % ,明显高于晚期 (Ⅲ Ⅳ期 ) 2 7% (P <0 0 5 )。结论　P2 7KIPL蛋白表达水平可能与卵巢浆液性囊性癌组织分化、临床分期有关。     

宫腔镜手术对卵巢功能的影响

目的观察宫腔镜手术前后性激素水平及卵巢血流的变化,揭示该术式对卵巢功能的影响。方法对患有功能性子宫出血、子宫黏膜下肌瘤和子宫黏膜下息肉的住院患者分为宫腔镜组(79例)及子宫切除组(63例)。测量两组患者术前及术后6个月、12个月性激素水平(FSH、E2、PRO)和卵巢动脉血流值。结果术前两组患者性激素水平无差异。术后子宫切除组两个观察时点FSH值均高于宫腔镜手术组,有显著性差异,两组E2及PRO值无显著性差异。比较手术前后卵巢血流阻力指数(RI)和搏动指数(PI)值,子宫切除组有显著性差异,宫腔镜组无差异。结论宫腔镜手术对卵巢功能短期可能没有明显影响,长期效果有待进一步研究。     

Fas相关磷酸酯酶-1在卵巢癌中的表达及意义

目的　探讨Fas相关磷酸酯酶 1(FAP 1)在卵巢癌发病中的作用。方法　采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶染色法 (SP法 )检测 5 2例卵巢癌及 15例卵巢良性肿瘤组织标本中FAP 1蛋白的表达水平 ,设正常卵巢组织为对照组 (10例 )。结果　FAP 1蛋白在正常卵巢中未见表达 ,良性肿瘤中的表达率为 2 6 % ,而在交界性肿瘤与恶性肿瘤中的阳性表达率分别为 6 9%和 77% ,与前两者相比差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而后两组间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。FAP 1的表达与卵巢癌的临床分期、病理分级相关 (FIGOⅢ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期 ,病理分级Ⅱ～Ⅲ级高于Ⅰ级 ,P <0 .0 5 ) ,而与组织学类型和转移性无明显相关性。结论　FAP 1在卵巢癌组织中有广泛表达 ,且在临床分期晚和病理分级高的组织中表达增高 ,可能对于卵巢癌的发病机制及恶变程度具有重要意义     

卵巢癌细胞系来源外来体的获得及形态特征观察

目的从8910、TC-1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系培养上清液中获得外来体。方法分别培养8910、TC-1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系,收集上清液,通过多步离心和超滤等方法分离出外来体。电镜下进行形态学观察。结果8910和3AO细胞系培养上清液中分离出外来体,置于透射电子显微镜下观察,可见具有明显异质性的圆形或椭圆形小囊泡,直径约30-90 nm,有完整的包膜。TC-1、SKOV3和CAOV细胞系培养上清液中未分离出外来体。结论8910和3AO卵巢癌细胞系可分泌外来体,两种细胞系来源的外来体在形态和大小上无明显差别,有可能作为卵巢癌免疫治疗的潜在抗原。