shRNA干扰LGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(LGR5)基因在HeLa细胞增殖及耐药性中的作用及可能机制。方法采用shRNA技术干扰LGR5表达,构建LGR5干扰(shLGR5)的HeLa细胞,并设对照组(shCon)。采用细胞计数、平板克隆以及MTT实验观察shLGR5对HeLa细胞增殖及耐药性的影响;采用Western blot检测LGR5、β-catenin在HeLa细胞中的表达。结果成功构建了LGR5干扰的HeLa细胞系;与shCon组相比,shLGR5组细胞生长速度及克隆形成率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01);shLGR5组与shCon组HeLa细胞对顺铂的耐药性差异亦具有统计学意义(P<0.01);且干扰LGR5抑制HeLa细胞中β-catenin蛋白的表达。结论 LGR5基因在HeLa细胞增殖及耐药性中有重要作用,且与Wnt/β-catenin通路有关。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米对MC3T3-E1细胞成骨分化和增殖的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对于小鼠MC3T3-E1细胞系成骨分化、增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度梯度的硼替佐米作用于培养的MC3T3-E1细胞,利用茜素红染色检测成骨分化,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期和凋亡,Western blot分析细胞周期相关蛋白变化。结果①硼替佐米剂量依赖性地抑制MC3T3-E1细胞的增殖活力[IC_(50)=(7.37±0.34)nmol/L];②低浓度硼替佐米能够诱导MC3T3-E1细胞发生成骨分化;③高浓度硼替佐米对于MC3T3-E1细胞表现出明显的毒性,诱导细胞凋亡发生;④低浓度硼替佐米所诱导的MC3T3-E1成骨分化进程中,伴随有明显的G_0/G_1期细胞周期阻滞。Western blot检测发现,G_0/G_1期细胞周期阻滞与细胞周期素依赖性激酶CDK2和CDK4表达水平降低,以及细胞周期蛋白内质网应激活化引起的细胞周期抑制蛋白p21Cip1和p27Kip1的表达上调有关。结论低剂量蛋白酶体抑制剂硼替佐米能够诱导成骨前体细胞MC3T3-E1发生成骨分化,并引起G_0/G_1期细胞周期阻滞介导的增殖抑制。     

Genistein通过上调Cyclin D1和CDK4的表达促进卵巢癌OVCAR-5细胞的增殖

目的探讨Genistein对卵巢癌细胞增殖和细胞周期调控的效应。方法 Genistein处理卵巢癌OVCAR-5细胞后,通过细胞计数和MTS检测明确细胞增殖和活性的变化,Real-time PCR及Western blotting检测重要细胞周期调节因子表达的变化。结果 Genistein显著促进了OVCAR-5细胞的增殖和活性,引起PCNA、Cyclin D1、CDK4等细胞周期活化因子mRNA和蛋白表达升高,p21和p27等细胞周期抑制因子等表达下降。结论 Genistein能够促进卵巢癌OVCAR-5细胞的增殖以及G1-S期的转变。这种差异可能是由不同的实验条件和/或细胞株不同的雌激素表达模式引起的。本研究结果可为深入分析Genistein在卵巢癌细胞中的作用和机制提供基础信息。     

EZH2抑制剂对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用

目的探讨EZH2(enhancer of zeste homolog 2)抑制剂对宫颈癌HeLa细胞增殖与转移能力的抑制作用。方法将EZH2抑制剂GSK343作用于体外培养的人宫颈癌HeLa细胞,用MTT及克隆形成率实验检测细胞生长和增殖的变化,细胞划痕实验测定细胞迁移能力的变化,Western blot检测上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达;同时以等体积GSK343溶剂DMSO为对照。结果 MTT结果显示,GSK343对HeLa细胞的生长具有明显抑制作用,呈时间依赖性;克隆形成和细胞划痕实验显示,GSK343能显著抑制HeLa细胞的增殖及迁移能力;Western blot结果显示,GSK343处理后细胞上皮标志蛋白E-cadherin表达明显增高,间质标志蛋白N-cadherin表达明显减低。结论 EZH2抑制剂GSK343可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖与迁移,其机制之一可能是通过抑制HeLa细胞上皮间质转化过程来实现的。     

Gαq/11在哇巴因信号转导中的意义

目的观察不同浓度哇巴因对SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞Gαq/11表达的影响,并探讨其在哇巴因信号转导中的作用。方法采用贴块法原代培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,进行传代和纯化。分别给予生理浓度以及病理浓度的哇巴因干预48 h,免疫细胞化学染色观察平滑肌细胞Gαq/11蛋白的表达。结果生理浓度哇巴因干预后,平滑肌细胞有增殖现象;而病理浓度组细胞发生凋亡。生理浓度组Gαq/11表达(111.21±30.47)显著高于病理浓度组(68.70±6.21)以及对照组(58.81±4.51,P<0.01);病理浓度组和对照组相比无显著变化。结论①Gαq/11介导了生理浓度哇巴因引起细胞增殖的生物学效应;②病理浓度哇巴因引起细胞凋亡的生物学效应与Gαq/11无关;③哇巴因在不同浓度下,可能通过不同的信号转导通路产生相应的药理学作用或生物学效应。     

绞股蓝总皂甙对体外培养肺癌细胞的抑制作用

利用绞股蓝总皂甙(GP)对5株不同的体外培养实体癌细胞株增殖的影响,发现GP的抑瘤作用随细胞株来源不同有明显的差异。当GP浓度为1～10mg/L时,对肺癌细胞株A549、Calu 1、592/9的抑制作用明显强于宫颈癌Hela S_3及结肠腺癌Colo 205,而同样浓度的GP却能促进正常人的混合淋巴细胞反应。     

靶向下调Cep55表达水平对肝癌细胞增殖能力的影响

目的通过siRNA干扰技术下调中心体相关蛋白Cep55的表达水平,并检测对肝癌HepG2和Hep3B细胞增殖能力的影响,为原发性肝癌的基因靶向治疗提供理论依据。方法应用Cep55特异性siRNA转染肝癌HepG2和Hep3B细胞,采用Real-time PCR和Western blot方法分别从mRNA和蛋白质水平检测Cep55siRNA对Cep55基因的干扰效果,MTT法检测下调Cep55表达水平时细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测细胞周期分布变化。结果与阴性对照组比较,干扰siRNA组Cep55的mRNA及蛋白表达水平均出现明显降低(P<0.05);MTT检测结果显示下调Cep55表达水平能够显著抑制肝癌细胞增殖(P<0.05);流式细胞仪检测显示下调Cep55表达水平能够增加G1期细胞的比例,同时降低G2-M期细胞的比例,出现明显的G2期阻滞。结论下调Cep55表达水平能够显著抑制肝癌细胞的增殖能力,并出现G2期阻滞,提示Cep55可能成为原发性肝癌的有效治疗靶点。     

血红素加氧酶-1基因修饰的骨髓间质干细胞抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的实验研究

目的 探讨骨髓间质干细胞携带的血红素加氧酶-1(HO-1)基因于体外共培养体系中抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的效果及机制.方法 采用核转染技术将HO-1质粒转染至骨髓间质干细胞,共培养肺动脉平滑肌细胞和骨髓间质干细胞,评估5-羟色胺刺激后的平滑肌细胞增殖情况,检测5-羟色胺刺激后平滑肌细胞中RhoA的活性.结果 5-羟色胺可刺激肺动脉平滑肌细胞增殖,使单纯培养的平滑肌细胞总数较对照组增加2.40倍(P<0.01).野生型骨髓间质干细胞与肺动脉平滑肌细胞共培养并不能抑制平滑肌细胞的增殖,而携带HO-1基因的干细胞则可明显抑制5-羟色胺刺激的平滑肌细胞增殖,使平滑肌细胞总数降至对照组的1.56倍(P<0.05);5-羟色胺可引起肺动脉平滑肌细胞中RhoA活性增加2.90倍,野生型干细胞与肺动脉平滑肌细胞共培养并未能改变5-羟色胺刺激的RhoA激活,但在携带HO-1基因的干细胞共培养体系中5-羟色胺诱发的RhoA活性明显降低.结论 骨髓间质干细胞携带的HO-1基因可以旁分泌的形式抑制平滑肌细胞的增殖,其作用的机制可能与其产生的CO通过激活cGMP信号通路进而抑制RhoA的激活有关.HO-1可作为外源基因导入体内治疗肺动脉高压.     

苦参碱对SGC-7901和ECV304细胞增殖活性的影响

通过体外实验研究苦参碱对人胃癌细胞株(SGC-7901)及人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖活性的影响,进而研究苦参碱的抗肿瘤活性。     

青藤碱对家兔血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究青藤碱对血管平滑肌细胞增殖作用及 DNA合成的影响。方法　采用内皮素刺激的离体家兔血管平滑肌细胞增殖模型 ,细胞计数 ,氚 -胸腺嘧啶核苷掺入方法。结果　青藤碱明显抑制血管平滑肌细胞增殖反应及 DNA合成 ,呈剂量依赖关系。结论　表明青藤碱具有抗血管平滑肌细胞增殖作用