CONSTRUCTION OF HUMAN INTERLUEKIN-18 DNA VACCINE AND IT‘S EXPRESSION IN MAMMALIAN CELLS

Ｈｕｍａｎｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ 18(ｈＩＬ 18)ｉｓａｎｅｗｌｙｉｄｅｎ ｔｉｆｉｅｄｃｙｔｏｋｉｎｅｍａｉｎｌｙ ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｍｏｎｏｃｙｔｅｓａｎｄｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ.ＴｈｅｃｙｔｏｋｉｎｅｃａｎｉｎｄｕｃｅＴｈ1ｃｅｌｌｓｔｏｓｅｃｒｅｔｅＩＦＮ γ ,ＩＬ 2ａｎｄＧＭ ＣＳＦ .Ｉｔｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅｃｙ ｔｏｔｏｘｉｔｙｏｆＮＫａｎｄＣＴＬｃｅｌｌ,ａｎｄａｌｓｏｒｅｄｕｃｅｓｔｈｅｌｅｖ ｅｌｏｆＩＬ 10 .Ｔｈｕｓ,ｔｈｅｒｅｉｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｖａｌｕｅｏｆ…     

重组人白介素2-穿孔蛋白免疫毒素的制备及功能活性

以人白细胞介素2为载体，人Perforin为毒素，利用基因工程技术构建成pBV221／IL2－Perforom表达质粒，在大肠杆菌中成功地表达出IL2－Perforin重组毒素，SDS－PAGE获得分子量的20KD的蛋白条带，细胞毒测定对活化的人T淋巴细胞和IL2依赖株CTLL2有明显的杀伤作用，并且明显抑制同种混合淋巴细胞反应，这是一种性质全新的重组毒素，其杀伤机制不同于以往所用的毒素（PE，DT等）。这种新的重组毒素不仅有益于器官移植，也可能对自身免疫病的治疗带来新的方法。     

TUMOR NECROSIS FACTOR－ALPHA SERUM LEVELS AND IN VITRO PRODUCTION IN PATIENTS WITH HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS（HIV） INFECTION

ＴＵＭＯＲＮＥＣＲＯＳＩＳＦＡＣＴＯＲ－ＡＬＰＨＡＳＥＲＵＭＬＥＶＥＬＳＡＮＤＩＮＶＩＴＲＯＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮＩＮＰＡＴＩＥＮＴＳＷＩＴＨＨＵＭＡＮＩＭＭＵＮＯＤＥＦＩＣＩＥＮＣＹＶＩＲＵＳ（ＨＩＶ）ＩＮＦＥＣＴＩＯＮＷａｎｇＹｉｌｉ（王一理）；Ｓ...     

多抗甲素对同种移植物的保护作用

多抗甲素是从甲型链球菌培养物中提取的一种生物反应调节剂（ＢＲＭ），在体外同种混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）中能抑制特异性ＣＴＬ的产生（对照组：ｌ０２±７６溶解单位，实验组：３４±３４溶解单位，Ｐ＝０．００５），而对ＮＫ活性并无显著影响。滴定实验测定，１０ｍｇ／Ｌ时抑制作用尤为明显。同时用ＢＡＬＢ／Ｃ和Ｃ５７Ｂ／Ｌ小鼠间行皮肤移植，结果表明多抗甲素能明显延长移植物存活时间，可望用于临床移植，其作用机理需进一步研究。     

Anti-CD3 scFv-B7.1真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的初步表达

目的　构建anti CD3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti CD3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础上构建真核表达载体pcDNA/anti CD3scFv B7.1,并经脂质体法转染COS 7细胞 ,免疫组织化学法检测表达。结果　获得了序列与预期完全相同的融合基因 ;构建了抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ;在COS 7细胞中获得初步表达。结论　成功构建及表达抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ,为进一步研究抗CD3scFv B7.1双功能分子的生物学活性及用于肿瘤生物治疗奠定了基础     

B7.1胞外编码区的真核表达及其生物活性

目的　真核表达B7.1细胞外编码区以研究其生物学活性。方法　电穿孔法将重组质粒pDisplay/B7.1(V +C)导入人子宫颈癌细胞株 ,免疫组化及核酸原位杂交法分别检测其蛋白及mRNA表达 ,3 H TdR掺入法测定表达物对T细胞的刺激作用 ;MTT法研究转染细胞 T细胞混合培养引发的细胞毒性杀伤作用。结果　B7.1细胞外区在Hela细胞表面表达 ,所表达的B7.1细胞外区在抗CD3单抗存在的情况下具有刺激T细胞活化的特性 ,重组质粒转染的Hela细胞与T细胞混合培养可引起细胞毒性杀伤。结论　真核表达的B7.1(V +C)具有T细胞共刺激活性 ,可用于构建肿瘤免疫治疗之双功能分子。     

人IL-18cDNA克隆及原核表达

目的　从外周血单核细胞中克隆人IL 1 8成熟编码序列cDNA ,对其进行测序并构建原核表达载体 ,进行原核表达。方法　从人外周血单核细胞中分离总RNA ,进行RT PCR获得人IL 1 8cDNA。测序证实其结果正确后 ,构建原核表达载体。E .coli的表达产物通过SDS PAGE、WesternBlot证实。结果　所克隆的人IL 1 8cDNA编码序列经测序证实与GenBank所报道的序列完全一致 ,细菌表达产物经SDS PAGE证实其大小约为 1 8.3KDa,WesternBlot进一步证实了所表达产物的正确性。结论　本研究结果为进一步探讨IL 1 8的生物学活性和特性奠定了基础 ,同时亦为利用人IL 1 8进行免疫基因治疗的研究打下了良好的基础。     

人乳头瘤病毒11型E6基因完整开放阅读框架的克隆和鉴定

目的　为构建人乳头瘤病毒 1 1型 (HPV1 1 )DNA疫苗 ,从尖锐湿疣病变组织中克隆疫苗靶基因E6。方法　利用改良提取染色体外游离DNA的方法制备模板DNA ,采用聚合酶链反应(PCR)技术进行基因克隆。结果　从病变组织中扩增出了全长人乳头瘤病毒 1 1型E6基因完整开放阅读框架 ,并插入中介载体T easy中构建重组质粒 ,转化JM1 0 9扩增后经酶切、PCR及测序分析 ,证实克隆成功。结论　该实验的成功为下一步制备HPV1 1的治疗性疫苗奠定基础。     

人ECK基因外显子3的实验研究

目的　建立人eck基因外显子 3(exon 3)的克隆与鉴定方法 ,研究其在ZR 75 1细胞系中的突变情况。方法　设计一对eck基因exon 3特异性引物 ,提取人正常皮肤组织和乳腺癌细胞系ZR 75 1基因组DNA ,并以此作为模板 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增eck基因exon 3片段 ,克隆入中介载体pUCm T中构建重组质粒 ,转化JM10 9大肠杆菌 ,扩增后经酶切、PCR初步鉴定后 ,进行序列分析。结果　①从正常皮肤组织上皮细胞、ZR 75 1细胞系基因组DNA中 ,经PCR扩增 ,获得了人eck基因exon 3片段 ;②建立了正常皮肤组织、ZR 75 1细胞系eck基因exon 3片段的克隆 ;③ZR 75 1细胞系中eck基因exon 3片段存在突变。结论　从人组织与细胞系基因组DNA中 ,成功地构建了人类eck基因exon 3的克隆 ,并证实eck基因exon 3在ZR 75 1乳腺癌细胞系中有突变 ,为进一步研究eck基因exon 3在肿瘤形成中的作用奠定了基础     

CELLULAR IMMUNITY EFFECT OF LEUKEMIA VACCINE ON TUMOR BURDEN RAT

Atpresent ,chemotherapyisstillimportanttotreatthemalignanthematopoitictumor .Thisthera pyhasnotonlymanysideeffectsbutalsoitssurviv alrateisverylow .Now ,theresearchofactivespe cificimmunotherapyhasbecomearesearchhotspotaftertheprogressofmolecules immunologyandtu mor immunology .Ithasbeenacceptedasanewwaytotreattheleukemiainthe 4 2 ndAmericaHema tologyMeeting .Sotheimmunotherapyofleukemiahasbeenverynoticing .Onthebasisofsometreat menteffectsontreatingsomeleukemia patientswithourleukemiavaccin…