通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。     

SD大鼠Atoh1基因CDS区的克隆及序列分析

目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1 cDNA编码序列并测定分析其克隆序列。方法采用非对称互补引物/模板法,制备Atoh1 cDNA的编码序列,将其克隆入PMD-19T载体中并测序。结果经酶切鉴定、测序分析表明,扩增得到的大鼠Atoh1基因CDS区全长为1 056 bp,编码351个氨基酸;测定序列与GenBank中公布的参考序列对比,有2处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致。这两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP)位点,突变为无义突变,不影响蛋白的表达。结论成功克隆了Atoh1 cDNA编码序列,为进一步对感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础。     

“单纯型”慢性化脓性中耳炎患者中耳乳突病变状态分析

目的 观察临床被诊断为单纯型慢性化脓性中耳炎患耳的中耳乳突状态.方法 对63例(71耳)单纯型慢性化脓性中耳炎高分辨率CT(HRCT)和手术中中耳腔病变情况详细观察记录.结果 71耳根据中耳腔病变的情况大致可以归纳为两组.A组29耳(40.8%),中耳乳突腔很少阴影存在.B组42耳(59.2%),中耳乳突腔有不同程度阴影存在,手术证实系渗出液及肉芽组织等顽固性病变在中耳乳突腔不同部位积存.结论 "单纯型"慢性化脓性中耳炎中耳腔病变并不一致,部分患者中耳腔有顽固性病变存在,应该根据中耳腔不同病变情况区别对待.     

210例耳廓假性囊肿浅层X线治疗分析

对210例耳廓假性囊肿患者进行浅层X线照射治疗，照射剂量及疗程依不同病例而异，当照射剂量在750～2600R时，囊肿消失痊愈，并经1年随访未有复发，提示此法是治疗耳廓假性囊肿的一种理想疗法。     

脉冲声镫骨肌反射

脉冲声镫骨肌反射试验经我们证实对各种耳聋有鉴别诊断价值,临床检查15例耳鸡、39例感音神经性聋和17例美尼尔氏综合症的声反射松驰指数与正常人相比有显著性差异,而15例蜗后病变患者的脉冲声反射曲线异常。     

外生性面神经雪旺氏细胞瘤的形成

为探讨外生性面神经雪旺氏细胞瘤的病理来源及病因 ,对 152 6耳颞骨连续切片进行组织病理学观察。结果发现 :39耳在面神经骨性管裂处显示神经外膜先天性缺损 ,神经主干由此疝出。其中31耳 ,在疝出面神经凸面有明显的雪旺氏细胞增生。这 31耳中 ,有 12耳在卵圆窗上方 ,1耳在面神经第二膝部形成小的外生性雪旺氏细胞瘤。提示 :管裂处神经外膜的先天性缺损是面神经由此疝出的组织解剖学原因。面神经疝出可能是刺激雪旺氏细胞增生 ,以致形成外生性面神经雪旺氏细胞瘤的直接原因。     

豚鼠分泌性中耳炎动物模型建立的研究

目的　研究建立分泌性中耳炎豚鼠动物模型的方法 ,为渗出性中耳炎的动物实验研究提供一种有用的动物模型。方法　采用灭活的肺炎链球菌悬液制备豚鼠分泌性中耳炎动物模型 ,了解渗出性中耳炎对听阈及中耳炎黏膜的病理改变。结果　听阈升高者 16耳 ,以低频为主 ,鼓膜呈浅黄色 ,病理改变主要在中耳腔 ,有不同程度的渗出 ,以浆液性为主。结论　细菌的分解产物———内毒素 ,导致中耳黏膜的炎症反应及中耳腔渗出 ,为进一步研究SOM提供动物模型     

内听道—桥小脑角池造影术临床应用25例分析

本文总结25例内听道桥小脑角池造影检查资料,确诊为听神经瘤者6例,4例为道内小型肿瘤,2例属中型。8例同时作空气造影CT与之对比。初步体会:此法安全、客观、分辨率很高、诊断可靠,显示道内肿瘤和微细结构较空气造影CT法更为清晰,是早期听神经瘤诊断中十分准确和极为实用的一种检查法,并能为其他内听道疾病的临床诊断提供更多的信息。     

TRANSFORMATION OF EFFUSION AND FORMATION OF GRANULATION TISSUE IN PATHOLOGIC PROCESS OF OTITIS MEDIA WITH EFFUSION

Exceptforinaminorityofthecaseswithearlystageotitismedia (OM)orsequelae ,effusionisthemostcommoninflammatoryproductamongthevar iousOMtype .Itisnotclearwhetheruntreatedef fusionresultsinchronic ,irreversible pathologicchangesinthemiddleearcleftandmastoid[1 -4 ] .Chronicotitismedia (COM)ismainlyindicatedbytheformationofgranulationtissue .Granulationtis sueisthemostcommon [5,6] andsignificantrepresenta tivepathologictissueofCOM .Studiesonthefac tors promoting granulationtissueformation ,thepat…     

胎儿内耳外淋巴锌、铜、钙定量分析

采用阳极溶出法和化学发光法分别对胎儿内耳外淋巴锌、铜、钙含量及铜／锌比值进行定量分析，初步提出人体内耳外淋巴锌、铜、钙含量及比值的正常参考值，并建立了一种测定外淋巴的微量分析方法，此法用量少、灵敏度高、结果可靠，为耳聋的诊治提供参考依据。