通用腺伴随病毒载体的构建及表达报告基因GFP的实验研究

目的构建基因治疗通用型腺伴随病毒(AAV)载体并检测其转染外源基因作用。方法使用限制性内切酶切除pSSV9int质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV。在该质粒MCS插入绿色荧光蛋白(GFP)基因后,使用pSSHG-CMV-GFP、GFP140和pAAV/Ad三种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV。应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度,并将该病毒感染新生大鼠NIH3T3细胞,荧光显微镜观察GFP表达。结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011cfu/mL,浓缩后可达2×1013cfu/mL,表明成功地构建了重组AAV载体。插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV。感染了重组GFP-AAV的大鼠NIH3T3细胞表达了明显的GFP荧光。结论构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV可转染外源基因,这为进一步的基因治疗奠定了基础。     

近全喉切除并发音管再造术7例报道

探讨手术治疗喉癌保护语言及吞咽功能的新的手术方法。方法　参考 Pearson手术的基本方法 ,对我科近 2年来按过去标准需行全喉切除术的 7例患者 ,施行了近全喉切除并发音管再造术 ,观察了不同临床分期的下咽癌、喉癌 ,特别是合并有糖尿病时的恢复过程。结果　除1例患者合并糖尿病伤口延期愈合外 ,6例患者术后 1 0～ 1 4d逐渐恢复吞咽功能 ,术后 1月经再造发音管可达到近距离满意的发音与会话效果。结论　近全喉切除发音管再造对晚期喉癌、下咽癌患者能较好地保留发音功能 ,同时又减少了误咽 ,是一种手术安全、减少无喉残废的好方法     

SD大鼠Atoh1基因CDS区的克隆及序列分析

目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1 cDNA编码序列并测定分析其克隆序列。方法采用非对称互补引物/模板法,制备Atoh1 cDNA的编码序列,将其克隆入PMD-19T载体中并测序。结果经酶切鉴定、测序分析表明,扩增得到的大鼠Atoh1基因CDS区全长为1 056 bp,编码351个氨基酸;测定序列与GenBank中公布的参考序列对比,有2处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致。这两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP)位点,突变为无义突变,不影响蛋白的表达。结论成功克隆了Atoh1 cDNA编码序列,为进一步对感音神经性耳聋的基因治疗奠定了基础。     

豚鼠分泌性中耳炎动物模型建立的研究

目的　研究建立分泌性中耳炎豚鼠动物模型的方法 ,为渗出性中耳炎的动物实验研究提供一种有用的动物模型。方法　采用灭活的肺炎链球菌悬液制备豚鼠分泌性中耳炎动物模型 ,了解渗出性中耳炎对听阈及中耳炎黏膜的病理改变。结果　听阈升高者 16耳 ,以低频为主 ,鼓膜呈浅黄色 ,病理改变主要在中耳腔 ,有不同程度的渗出 ,以浆液性为主。结论　细菌的分解产物———内毒素 ,导致中耳黏膜的炎症反应及中耳腔渗出 ,为进一步研究SOM提供动物模型     

NT4-ADNF-9融合基因原核表达载体的构建

目的　构建神经营养素 (NT4 )与活性依赖性神经营养因子 9(ADNF 9)融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9,为进一步对神经系统退行性疾病基因治疗的研究奠定基础。方法　采用非对称互补引物 /模板法 ,制备两端含有酶切位点的ADNF 9的cDNA ,将其连接到NT的信号肽和前导序列的 3′端 ,组成融合基因NT4 ADNF 9,再将该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建为pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9。结果　经DNA测序 ,限制性内切酶酶切等方法证实已成功地将ADNF 9重组到NT4信号肽和前导序列的 3′端 ,并将融合基因亚克隆于pBV2 2 0内。结论　成功构建了NT4与ADNF 9融合基因的原核表达载体pBV2 2 0 /NT4 ADNF 9。     

THE EFFECT OF EXOGENOUS SURFACTANT ON THE EUSTACHIAN TUBE FUNCTION IN THE GERBIL MODEL OF SECRETORY OTITIS MEDIA

Secretoryotitismedia (SOM )isacommondis easeandasignificantworldhealth problem .Al thoughSOMiswellrecognizedatclinicallevel,itspathogenyispoorlyknown .Theeustachiantubeservesanimportantfunc tioninequalizingpressurebetweenthemiddleearandthenasopharynx .Theeustachiantubeinthenormalstateisclosed ,butintermittentlyopensbytheactionofthetensorvelipalatiniandlevatorvelipalatinimusclesduringswallowing .Absenceofsurfactantoneustachiantubeisoneofimportantreasonsoftheirdysfunction .Thisre searchinject…     

IL-1α和MMP-9在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的研究白介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达,探讨二者与胆脂瘤侵袭破坏能力的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测了IL-1α、MMP-9在21例后天继发性胆脂瘤上皮与10例胆脂瘤患者外耳道皮肤表皮中的表达。结果IL-1α和MMP-9在胆脂瘤上皮的阳性表达率明显高于外耳道皮肤表皮,差异具显著性(P<0.01,P<0.01);胆脂瘤上皮IL-1α、MMP-9表达均与胆脂瘤的侵袭破坏程度正相关(P<0.05,P<0.05);胆脂瘤上皮中IL-1α、MMP-9表达存在正相关性。结论IL-1α、MMP-9是介导胆脂瘤侵袭破坏行为的重要细胞因子。在体内IL-1α可能对MMP-9表达具有上调作用。