高血压病患者胰岛素受体基因第20外显子突变的检测

检测高血压病患者是否存在胰岛素受体基因第 2 0外显子突变。方法　以高血压病患者为观察对象 ,用 PCR- SSCP方法检测胰岛素受体基因突变。结果　在 1 1 6例原发性高血压患者中 ,未发现胰岛素受体基因第 2 0外显子存在突变。结论　高血压患者胰岛素受体基因第2 0外显子突变可能并不常见     

胸腔积液中脱落细胞p53基因突变的检测及其意义

目的　探讨聚合酶链反应 -单链构象多态性分析 (PCR- SSCP)检测胸液脱落细胞 p53基因突变在恶性胸腔积液 (MPE)诊断中的可行性及价值。方法　用 PCR- SSCP分别检测了 1 9例MPE及 1 2例结核性胸腔积液中新鲜脱落细胞标本的抑癌基因— p53基因 5～ 8外显子的突变情况 ,并与正常胸膜组织进行对照。结果　 7例 MPE有 p53基因突变 ,突变率为 36.84%。其中5例发生在第 5外显子 ,2例发生在第 7外显子 ,第 6、8外显子未检出突变 ,有 2例突变检出早于临床病理诊断。结核性胸液无 1例突变。结论　提示 p53基因突变在 MPE脱落细胞中较常见 ;PCR- SSCP分析胸液脱落细胞中 p53基因突变可以作为 MPE的一种辅助诊断方法     

先天性巨结肠症EDN-3及EDNRB基因结构的PCR-SSCP分析

目的　检测中国散发先天性巨结肠症是否有EDNRB基因和EDN 3基因突变 ,以探讨EDNRB及EDN 3与HD发生的关系。方法　 34例中国散发先天性巨结肠症。提取手术组织标本基因组DNA ,聚合酶链反应 (PCR)扩增EDNRB基因第 3、4、6外显子和EDN - 3基因第 1、2外显子 ,单链构象多态 (SSCP)分析上述外显子是否有突变。结果　 1 3例短段型先天性巨结肠症中 ,2例有EDNRB基因突变 ,1例有EDN 3基因突变。普通型及长段型未见EDNRB基因和EDN 3基因突变。结论　中国散发先天性巨结肠症短段型有EDNRB基因和EDN 3基因突变 ,提示EDNRB基因、EDN 3基因与先天性巨结肠症的发生有关     

宫颈癌组织表皮生长因子受体对TKI敏感性相关的基因突变研究

目的研究宫颈癌组织表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因中是否存在与EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)药物敏感性相关的18、19及21外显子突变,为本地区宫颈癌的靶向治疗提供依据。方法收集70例宫颈癌患者的新鲜癌组织标本,提取DNA,以特异性引物PCR扩增EGFR基因外显子18、19及21,进行DNA测序并分析序列相似性。结果 70例宫颈癌组织提取质量良好的DNA中,均未检测到EGFR基因18、19及21外显子突变。结论宫颈癌组织EGFR基因外显子18、19及21突变罕见。     

人促甲状腺激素受体胞外段的体外重组、蛋白高效表达及其与构象功能的关系

目的　TSH受体 (TSHR)是诱发自身免疫性甲状腺病 (autoimmunethyroiddisease ,AITD)的主要自身抗原。TSHR上TSH结合部位、自身抗体及主要的B细胞、T细胞表位均位于其胞外段部分。本研究利用基因重组方法 ,建立人TSH受体胞外段 (hTSHRecd)体外高效表达、纯化系统 ,用于Graves’病的临床及实验研究 ,探索体外表达的重组hTSHRecd蛋白的免疫生物活性与其空间构象的关系。方法　设计 1对hTSHRecd特异性引物 ,自PCRTTM3 hTSHR载体中PCR扩增合成hTSHRecd片段 ,经限制性内切酶BamHⅠ、SalⅠ消化 ,胶回收纯化后 ,重新构建于表达质粒 pQE 30中。用质粒电泳、限制性内切酶消化、PCR 3种方法鉴定重组质粒是否构建正确 ,并于E .coliM15细胞进行诱导表达。所表达的 6×His hTSHRecd融合蛋白经 12 0 g·L-1SDS PAGE ,Westernblotting鉴定。细菌培养产物经超声波破碎、裂解液裂解后利用Ni NTA树脂 ,经金属螯合层析法纯化 ,并经原位再折叠、透析、浓缩等处理。以ELISA、12 5I TSH结合抑制试验检测纯化蛋白与Graves’甲亢患者血清及TSH的结合活性。结果　经鉴定 ,重组质粒中含有以正确方向插入的 12 0 5bp的hTSHRecdcDNA基因片段。hTSHRecd融合蛋白约 4 7kD ,于 12 0 g·L-1SDS PAGE可见深染的特异性蛋白条带 ,可与Graves?     

P~(53)5-8外显子在喉癌中的表达

采用改良玛尼亚法从喉癌患者术后新鲜组织标本中分别抽提全DNA，用PCR－SSCP方法进行扩增和电泳，然后行硝酸银染色，判断喉癌的中心组织、癌旁组织、转移淋巴结中的P535－8外显子的突变。结果表明：35例喉癌组织标本中P535－8外显子的突变率为60％，P53突变与淋巴结转移存在相关关系，P535－8外显子的突变与TNM分期及高中低分化均存在正相关关系，提示P53突变与喉癌的发生发展有密切关系。     

人钠／碘转运体354、395位点基因突变与先天性甲状腺功能减迟症的相关性研究

目的 探讨青岛地区婴幼儿先天性甲状腺功能减退症患者中是否存在人钠／碘转运体(hNIS)基因354、395位点突变及其基因型频率，为婴幼儿先天性甲状腺功能减退症的早期诊断和基因治疗建立理论基础。方法 试验组47例，均为青岛市妇女儿童医疗保健中心确诊的先天性甲状腺功能减退症患儿(年龄0—5岁)，甲状腺显像证实腺体位置及发育基本正常，排除甲状腺异位及缺如的病儿。对照组100例，为在本院门诊及病房就诊的患儿(年龄0—5岁)，排除甲状腺疾病及其他内分泌疾病家族史。采外周血抽提基因组DNA，PCR扩增hNIS基因片段。其中由于T354P基因突变本身并没有形成酶切位点，本实验采用错配的PCR技术，扩增片段长度为202bp，包括完整的外显子9。取PCR产物进行限制性内切酶(HaeⅢ)消化，酶切产物经琼脂糖凝胶电泳观察结果。G395R基因突变的研究扩增片段长度为370bp，包括外显子9、10。扩增产物进行酶切分析(BspPI)，琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果 无论试验组或对照组，在hNIS密码子354位均以纯合子ACA出现，在hNIS密码子395位均以纯合子GGA出现。G354P突变及G395R突变在本研究的147例对象中均末发现。结论 通过对47名先天性甲状腺功能减退症患儿(其中包括1对双胞胎姐妹，另有两名患儿近亲中有先天性甲状腺功能减退症病人)及100名健康对照者进行hNIS基因突变分析表明，hNIS基因T354P、G395R突变不是引起青岛地区先天性甲状腺功能减退症发病的主要原因。     

人钠/碘转运体354、395位点基因突变与先天性甲状腺功能减退症的相关性研究

目的　探讨青岛地区婴幼儿先天性甲状腺功能减退症患者中是否存在人钠 /碘转运体 (hNIS)基因 35 4、395位点突变及其基因型频率 ,为婴幼儿先天性甲状腺功能减退症的早期诊断和基因治疗建立理论基础。方法　试验组 4 7例 ,均为青岛市妇女儿童医疗保健中心确诊的先天性甲状腺功能减退症患儿 (年龄 0～ 5岁 ) ,甲状腺显像证实腺体位置及发育基本正常 ,排除甲状腺异位及缺如的病儿。对照组 10 0例 ,为在本院门诊及病房就诊的患儿 (年龄 0～ 5岁 ) ,排除甲状腺疾病及其他内分泌疾病家族史。采外周血抽提基因组DNA ,PCR扩增hNIS基因片段。其中由于T35 4P基因突变本身并没有形成酶切位点 ,本实验采用错配的PCR技术 ,扩增片段长度为 2 0 2bp ,包括完整的外显子 9。取PCR产物进行限制性内切酶(HaeⅢ )消化 ,酶切产物经琼脂糖凝胶电泳观察结果。G395R基因突变的研究扩增片段长度为 370bp ,包括外显子 9、10。扩增产物进行酶切分析 (BspPI) ,琼脂糖凝胶电泳观察结果。 结果　无论试验组或对照组 ,在hNIS密码子 35 4位均以纯合子ACA出现 ,在hNIS密码子 395位均以纯合子GGA出现。T35 4P突变及G395R突变在本研究的 14 7例对象中均未发现。结论　通过对 4 7名先天性甲状腺功能减退症患儿 (其中包括 1对双胞胎姐妹 ,另有     

甲状腺上皮细胞DR抗原异常表达及影响因素

本文应用单克隆抗体及免疫组化技术对37例自身免疫性甲状腺炎,23例甲亢及13例甲亢伴甲状腺炎甲状腺上皮细胞DR抗原异常表达进行原位研究。结果发现甲状腺上皮细胞DR抗原的异常表达与甲状腺浸润细胞总数、炎性破坏程度及外周血TSH、甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体量呈正相关。     

甲状腺疾病患者血清TGA及TMA的测定及其临床意义

自身免疫性甲状腺疾病，包括craves’病，桥本氏病及特发性甲状腺功能减退症，与自身免疫功能紊乱有关，为研究甲状腺球蛋白抗体（TGA）及甲状腺微粒体抗体（TMA）在自身免疫性甲状腺疾病中的变化及其临床意义，本文对416例自身免疫性甲状腺疾病患者血清TGA及TMA进行了测定，并     

TSH RECEPTOR GENETIC ALTERATIONS IN THE AUTONOMOUSLYFUNCTIONING THYROID ADENOMAS

Objective To determine the relationship between TSH receptor gene mutations and autonomously functioning thyroid adenomas (AY‘]rAs). Methods The thyroid samples from 14 cases of diagnosed AFTAs were analyzed, with normal thyroid specimens adjacent to the tumors as controls. The 155 base pairs DNA fragments which encompassed the third cytoplasmic loop and the sixth transmembrane segments in the TSH receptor gene exon 10 were amplified by Polymerase chain reaction (PCR) and analyzed by the single-strand conformation polymorphism (SSCP). Direct sequencing of the PCR products was performed with Prism Dye Terminator Cycle Sequencing Core Kit.Results 6 of 14 AFTA specimens displayed abnormal migration in SSCP analysis. In sequence analysis of 3 abnormally migrated samples, one base substitution at nucleotide 1957 (A to C) and two same insertion mutations of one adenosine nucleotide between nucleotide 1972 and 1973 were identified. No mutations were found in controls. Conclusion This study confirmed the presence of TSH receptor gene mutations in AFTAs; both one-point substitution mutation and onebase insertion mutation were found to be responsible for the pathogenesis of AFTAs.     

MUTATION OF THE ENDOTHELIN-B RECEPTOR AND THE ENDOTHELIN-3 GENE IN CHINESE SPORADIC CASES OF HIRSCHSPRUNGS DISEASE

Objective To investigate the mutation of endothelin receptor B (EDNRB) gene and endothelin-3 (EDN-3) gene in sporadic Hirschsprung's disease (HD) in Chinese population. Methods Genomic DNA was extracted from bowel tissues of 34 unrelated HD patients which were removed by surgery. Exon 3, 4, 6 of EDNRB gene and Exon 1, 2 of EDN-3 gene were amplified by polymerase chain reaction (PCR) and analyzed by single strand conformation polymorphism (SSCP).Results EDNRB mutations were detected in 2 of the 13 short-segment HDs. One mutant was in the exon 3; the other one was in the exon 6. EDN-3 mutation was detected in 1 of the 13 short-segment HDs and in the exon 2. Both EDNRB mutation and EDN-3 mutation were detected in one short-segment HD. No mutations were detected in the ordinary or long-segment HD. Conclusion The mutations of EDNRB gene and EDN-3 gene are found in the short-segment HD of sporadic Hirschsprung's disease in Chinese population, which suggests that the EDNRB gene and EDN-3 gene play important roles in the pathogenesis of HD. the mutations of EDNRB and EDN-3 lead to the maldevelopment of the enteric nervous system.     

原发性高血压患者氨苯喋啶敏感性钠通道β亚单位基因12外显子的PCR-SSCP分析

为确定原发性高血压患者是否存在氨苯喋啶敏感性钠通道（Ａｍｉｌｏｒｉｄｅｓｅｎｓｉｔｉｖｅｓｏｄｉｕｍｃｈａｎｎｅｌ，ＡＳＳＣ）β亚单位基因第１２外显子ＤＮＡ片段突变，本研究采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术对１４８例确诊型高血压病患者的ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子进行了分析。结果在原发性高血压患者中检出了３例有ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子突变的个体。提示原发性高血压的发生与ＡＳＳＣβ亚单位基因第１２外显子突变有关，它可能是原发性高血压发生的分子基础之一。     

Foxp3在自身免疫性甲状腺病患者外周血和病变组织中的表达

目的检测自身免疫性甲状腺病(AITD)患者Foxp3的表达,探讨调节性T细胞(Treg)与AITD发病的关系。方法采用Real-time PCR检测AITD患者及健康对照者外周血及甲状腺组织中Foxp3mRNA的表达;免疫组织化学方法检测甲状腺内Foxp3蛋白的表达;Western blot方法检测外周血单个核细胞Foxp3蛋白的表达。结果与对照组相比,AITD患者外周血单核细胞Foxp3mRNA表达显著降低(P<0.05);桥本甲状腺炎(HT)患者外周血单个核细胞Foxp3蛋白表达下降(P<0.05),Graves病(GD)患者外周血单个核细胞Foxp3蛋白表达与对照组相比无差异(P>0.05)。与对照组相比,HT患者甲状腺组织Foxp3mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),而GD患者甲状腺组织Foxp3mRNA和蛋白表达水平与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论 CD4+CD25+Foxp3+Tregs的减少和/或功能的减退可能是诱导AITD尤其是HT发生的因素。     

IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY OF ESTROGEN AND PROGESTERONE RECEPTOR IN THYROID TISSUES OF AUTOIMMUNE THYROID DISEASE

ＳｈｉＢｉｎｇｙｉｎ（施秉银）；ＺｈａｎｇＸｕｃｈｉｎ（张学斌）；ＧａｏＨｕｉ（高慧）；ＭａＸｉｕｐｉｎｇ（马秀萍）；ＷａｎｇＭｉｎ（王敏）ＩＭＭＵＮＯＨＩＳＴＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳＴＵＤＹＯＦＥＳＴＲＯＧＥＮＡＮＤＰＲＯＧＥＳＴＥＲＯＮＥＲＥＣＥＰＴ...     

PD-1基因多态性与自身免疫性甲状腺病的相关性

目的探讨PD-1基因多态性在西安地区汉族人中的分布及与自身免疫性甲状腺病(AITD)的关系。方法应用PCR-RFLP方法检测127例健康人、125例Graves病(GD)患者、117例桥本氏甲状腺炎(HT)患者PD-1基因三个单核甘酸多态性位点PD-1.1、PD-1.3、PD-1.5的基因型。结果发现西安地区汉族人PD-1.3位点不存在多态性;健康人、GD患者与HT患者PD-1.1、PD-1.5基因型、等位基因频率无显著性差异。结论PD-1.1、PD-1.3和PD-1.5基因型不能作为PD-1基因与AITD相关的遗传标志。     

人ECK基因外显子3的实验研究

目的　建立人eck基因外显子 3(exon 3)的克隆与鉴定方法 ,研究其在ZR 75 1细胞系中的突变情况。方法　设计一对eck基因exon 3特异性引物 ,提取人正常皮肤组织和乳腺癌细胞系ZR 75 1基因组DNA ,并以此作为模板 ,采用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增eck基因exon 3片段 ,克隆入中介载体pUCm T中构建重组质粒 ,转化JM10 9大肠杆菌 ,扩增后经酶切、PCR初步鉴定后 ,进行序列分析。结果　①从正常皮肤组织上皮细胞、ZR 75 1细胞系基因组DNA中 ,经PCR扩增 ,获得了人eck基因exon 3片段 ;②建立了正常皮肤组织、ZR 75 1细胞系eck基因exon 3片段的克隆 ;③ZR 75 1细胞系中eck基因exon 3片段存在突变。结论　从人组织与细胞系基因组DNA中 ,成功地构建了人类eck基因exon 3的克隆 ,并证实eck基因exon 3在ZR 75 1乳腺癌细胞系中有突变 ,为进一步研究eck基因exon 3在肿瘤形成中的作用奠定了基础