正常SD大鼠血清及组织内源性哇巴因的含量及其意义

探讨正常 SD大鼠血清及组织内源性哇巴因 ( EO)的含量 ,为 EO生理及病理作用的进一步研究提供理论及实验依据。方法　制备高度特异性的哇巴因抗体 ,应用酶联免疫吸附试验 ( ELISA)的方法 ,对正常 SD大鼠血清及组织标本测定其 EO含量。结果　血清、肝脏、肾脏、肾上腺、垂体及下丘脑内 EO含量分别为 ( 1 .1 2± 0 .1 7) μg/ L、( 1 .79± 0 .44) μg/ kg组织、( 1 .0 8±0 .63)μg/ kg组织、( 1 .73± 0 .81 )μg/ kg组织、( 2 7.54± 6.91 )μg/ kg组织、( 1 .83± 0 .54)μg/ kg组织、( 1 0 .1 0± 3.0 8) μg/ kg组织。肾上腺内 EO含量明显高于其它组织及血清 EO含量。结论　确定了正常 SD大鼠血清及多种组织内源性哇巴因的含量 ,提示肾上腺有可能是 EO的主要来源     

人和鼠脊髓中的P物质阳性结构—PAP法

本文用免疫组织化学技术,研究了人和大鼠脊髓内P物质阳性结构的分布。结果显示,在后角的Ⅰ～Ⅲ层和李氏束有密集的P物质免疫反应阳性神经纤维和终末,排列呈点线状或密网状,染为黄色、褐色或暗褐色。在中央管周围也有较密的P物质阳性纤维;而脊髓的腹侧角,这类阳性纤维较为稀疏。此外,在大鼠脊神经节中,我们观察到P物质免疫反应的阳性神经元胞体,属于小型细胞。     

慢性盐缺乏、盐负荷对血清内源性哇巴因水平的影响

目的观察慢性盐缺乏和盐负荷对内源性哇巴因(EO)分泌的影响,探讨在慢性盐缺乏或盐负荷状态下EO对SD大鼠钠代谢和血压的调节作用。方法以含0.02%(低盐)、0.5%(普食)及8%(高盐)的普通加碘盐饲料喂养SD大鼠8周,原子吸收分光光度法检测尿液中钠离子、钾离子浓度,酶联免疫吸附法(ELISA)检测EO水平。结果高盐组SD大鼠血压较同期普食组和低盐组显著性升高(P<0.01)。高盐组24 h尿钠排泄量较普食组和低盐组显著增加(P<0.01)。高盐组24 h尿钾排泄量显著低于对照组和低盐组(P<0.01)。高盐组与普食组比较血清EO水平无统计学差异,低盐组于第4周开始血清EO水平高于普食组和高盐组,有统计学差异(P<0.01)。结论慢性盐缺乏时SD大鼠EO水平升高,提示其为慢性盐缺乏状态下维持血压的调节因子;而慢性盐负荷时血压明显升高,但未发现EO显著升高。     

哇巴因多克隆抗体对两肾一夹肾血管性高血压大鼠血流动力学的影响

为探讨哇巴因多克隆抗体的降压作用及哇巴因与高血压发病的关系 ,给“两肾一夹 +盐 ( 2 k1 c+盐 )”、“两肾一夹 ( 2 k1 c)”肾血管性高血压大鼠随机静注哇巴因多克隆抗体、硝普钠、正常兔免疫球蛋白 ( Ig G)及生理盐水 ,颈动脉插管观察注射后 3h内血压动态变化。结果表明 :哇巴因多克隆抗体对“两肾一夹 +盐”肾血管型高血压大鼠具有明显的降压作用 ,而对“两肾一夹”高血压模型降压作用不明显。正常兔免疫球蛋白对各种高血压模型均无降压作用。提示内源性哇巴因 ( EO)升高可能是高血压的发病因素之一 ;高盐引起血压升高的机制之一可能是通过刺激 EO的分泌增加。     

瘦素受体在大鼠中枢神经系统的免疫组织化学定位研究

目的　观察瘦素受体在SD大鼠中枢神经系统的组织学定位。方法　采用高度特异的抗瘦素受体血清 ,用免疫组织化学ABC法观察瘦素受体在大鼠脑的分布。结果　在SD大鼠的前脑 (包括嗅球 )、皮层Ⅳ、Ⅴ层、海马、下丘脑、杏仁核、丘脑等可以观察到瘦素受体免疫反应阳性物质 (LR IR) ,其中下丘脑弓状核、视上核、视交叉上核、杏仁基底外侧核、孤束核有较强的LR IR ,而下丘脑外侧视前区、杏仁中央核有较弱的LR IR。结论　瘦素受体广泛存在于大鼠中枢神经系统 ,包括下丘脑、杏仁核等与味觉和摄食调节密切相关的核团     

哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位基因表达的影响

目的　对比研究哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵 (Na+ ,K+ ATP酶 )α亚单位基因表达的影响 ,探讨内源性哇巴因 (EO)的生物学效应以及洋地黄类药物药理作用的分子机制。方法　长期给予大鼠注射小剂量哇巴因 (2 0 μg·kg- 1·d- 1)与地高辛 (32 μg·kg- 1·d- 1) ,动态观察大鼠血压变化 ;分别应用分子生物学RT PCR及免疫组织化学技术 ,研究各组大鼠肾脏皮质钠泵α1、α2及α3亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果　哇巴因与地高辛对大鼠血压的影响存在着明显差别 ,长期给予大鼠注射小剂量哇巴因可使大鼠血压升高 ,而地高辛对大鼠血压无影响。但哇巴因与地高辛对大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位基因表达的影响是相同的 ,在mRNA水平均可使α1亚单位表达增强 ,α2与α3亚单位表达无改变 ;而在蛋白水平α1亚单位表达减弱 ,α3亚单位表达增强 ,α2亚单位表达无改变。结论　哇巴因在高血压发病中可能起着重要作用 ;哇巴因与地高辛可导致相同的肾脏皮质钠泵基因表达改变 ,提示这种表达的改变在哇巴因导致血压升高的过程中可能并不起着关键性作用。     

哇巴因对大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响

目的 观察哇巴因对大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响.方法 28只SD大鼠随机分为2组,即哇巴因组[27.8μg/(kg·d)哇巴因腹腔注射]和对照组(生理盐水1mL/d腹腔注射),每周测量鼠尾动脉血压,共5周.于第3、5周后分2批处死动物,应用分光光度法测定各组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性,同时采用实时定量PCR(real-time PCR)观察肾皮质中多巴胺D1受体mRNA表达的变化.结果 大鼠腹腔注射哇巴因3周后,两组血压无显著性差异,但哇巴因组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性高于对照组(P<0.01),多巴胺D1受体mRNA表达低于对照组(P<0.01).5周后,哇巴因组大鼠血压与对照组相比有显著性差异(P<0.01),哇巴因组大鼠肾皮质Na+-K+-ATP酶活性进一步增高(P<0.01),多巴胺D1受体mRNA表达进一步减低(P<0.01).结论 长期小剂量外周注射哇巴因可使SD大鼠血压持续升高,这一作用与肾近曲小管Na+-K+-ATP酶活性增加引起水钠潴留有关,多巴胺D1受体可能参与了这一过程.     

哇巴因与地高辛对大鼠血压影响的对比研究

通过给予大鼠外源性哇巴因，观察其对血压的影响，并同地高辛进行对比研究，发现长期给予小剂量哇巴因可引起大鼠血压明显升高，而地高辛无此作用，间接证明了内源性类洋地黄物质即是哇巴因而非地高辛，同时说明哇巴因是导致血压升高的原因之一，而非其继发性的结果，并为哇巴因与高血压的研究提供了一种新的动物模型：哇巴因-高血压鼠。     

Gαq/11在哇巴因信号转导中的意义

目的观察不同浓度哇巴因对SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞Gαq/11表达的影响,并探讨其在哇巴因信号转导中的作用。方法采用贴块法原代培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,进行传代和纯化。分别给予生理浓度以及病理浓度的哇巴因干预48 h,免疫细胞化学染色观察平滑肌细胞Gαq/11蛋白的表达。结果生理浓度哇巴因干预后,平滑肌细胞有增殖现象;而病理浓度组细胞发生凋亡。生理浓度组Gαq/11表达(111.21±30.47)显著高于病理浓度组(68.70±6.21)以及对照组(58.81±4.51,P<0.01);病理浓度组和对照组相比无显著变化。结论①Gαq/11介导了生理浓度哇巴因引起细胞增殖的生物学效应;②病理浓度哇巴因引起细胞凋亡的生物学效应与Gαq/11无关;③哇巴因在不同浓度下,可能通过不同的信号转导通路产生相应的药理学作用或生物学效应。     

嗜铬细胞瘤组织中内源性哇巴因表达的意义

目的　探讨内源性哇巴因 (EO)在肾上腺嗜铬细胞瘤组织中表达的意义。方法　采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 过氧化酶连接法 (SP法 )检测EO在嗜铬细胞瘤组织中的表达。结果　血压与EO在嗜铬细胞瘤组织中的表达呈现相关关系。伴有血压升高的嗜铬细胞瘤患者 ,其瘤组织中EO呈弥漫性强阳性表达 ;而EO在不伴有血压升高的嗜铬细胞瘤患者则呈现阴性表达。结论　EO与嗜铬细胞瘤所致的高血压关系密切 ,为其进一步研究提供了有价值的形态学依据。     

EXPRESSION OF ENDOGENOUS OUABAIN IN MULTIPLE ADRENAL TUMORS

Ａｄｒｅｎａｌｓ ,ｗｈｉｃｈｃａｎｋｅｅｐｔｈｅｂａｌａｎｃｅｏｆｉｎｎｅｒｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ,ａｒｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｎｄｏｃｒｉｎｅｓ ,ａｎｄｌｏｔｓｏｆｄｉｓｅａｓｅｓａｒｅｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｉｒｆｕｎｃｔｉｏｎ .ＴｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆａｎｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓＮａ ,Ｋ - ｐｕｍｐｉｎｈｉｂｉｔｏｒｉｎｍａｍ ｍａｌｓ ,ｗｈｉｃｈｃａｎａｆｆｅｃｔｒｅｎａｌＮａ ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ ,ｖａｓｃｕｌａｒｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｉｔｙ ,ａｎｄｎｅｒｖｏｕｓｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ,ｈａｓｂ…     

哇巴因、地高辛与高血压发病关系的研究

目的　观察哇巴因、地高辛对组织钠泵α亚单位基因表达的不同影响 ,探讨哇巴因与高血压发病的可能关系。方法　给予大鼠哇巴因 30 μg·kg-1·d-1,地高辛 4 0 μg·kg-1·d-1腹腔注射 7周。用免疫组化及原位杂交方法检测心脏、肾脏、肝脏、腹主动脉和肾上腺组织钠泵α亚单位蛋白水平及mRNA水平的表达。结果　哇巴因与地高辛对上述组织尤其是动脉及肾脏的钠泵α亚单位表达的影响不同 ,哇巴因增强动脉的α2 表达 ,地高辛则抑制其表达 ;哇巴因使肾脏α1表达增强 ,地高辛则使其减弱。结论　哇巴因导致组织钠泵α亚单位基因异常表达 ,这可能在高血压的发病中有重要意义     

THE CHARACTERISTICS OF ENDOGENOUS OUABAIN SECRETIONFROM CULTURED BOVINE ADRENOCORTICAL CELLS

Endogenousouabain(Eo)hasbeenconsideredasacirculatingfactorthatregulatesthebodyfluidvolumebalance,urinesodiumextractionandvaso-contrictivetone,whichplaysanimportantroleinpathogenesisofhypertensionandsomecardiovas-culardisorderst12.Sinceitwasdiscoveredandiden-tifiedbyHamlynin199lt,i,severallinesofevi-dencesindicatethattheadrenalcortexisthemajorsourceofEO.Thepurposeofthisstudyistocom-parethecharacteristicsofEOsecretionwiththewell-knownadrenocorticalhormonesaldosteroneandcortisol,determinetheeff…     

哇巴因对大鼠心脏内皮素系统表达的影响

目的探索哇巴因对大鼠心脏内皮素系统表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为哇巴因组和生理盐水对照组,每周测量收缩压,分别于实验24、、6周放免法测定两组大鼠血浆及心脏组织中内皮素的含量,并用免疫组化法检测大鼠左心室内皮素A、B两种受体的表达。结果大鼠腹腔注射哇巴因4周后收缩压开始上升,6周后哇巴因组大鼠血压与对照组相比有显著性差异。大鼠腹腔注射哇巴因2周后,血浆及心脏组织内皮素水平升高,4周时左心室内皮素A型受体表达增强,而B型受体的表达在整个实验过程中均无显著变化。结论哇巴因可以引起血浆及心脏组织中内皮素质量浓度增加,左心室内皮素A型受体表达增强,这种效应可能是其升高血压及损害靶器官的机制之一。     

内源性哇巴因在原发性肾病综合征发病中的作用

采用敏感性、特异性均较高的特异性抗哇巴因抗体酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ法）对２０例肾功正常的原发性肾病综合征患者血清内源性哇巴因（Ｅｎｄｏｇｅ－ｎｏｕｓｏｕａｂａｉｎ,ＥＯ）水平进行测定。发现肾功正常的原发性肾病综合征患者血清ＥＯ水平显著高于正常对照组,有高血压的肾病综合征患者血清ＥＯ水平显著高于无高血压组。结果表明ＥＯ在原发性肾病综合征的发生发展及肾性高血压的产生和维持中起一定作用。     

内源性哇巴因的研究与展望

围绕着“一种新的激素———内源性哇巴因(endogenous ouabain,EO)”,从“生物学特性和生理学研究”、“病理生理学和临床意义研究”、“检测方法”及“应用研究”四个方向展开对内源性哇巴因历时17年的系列研究,结果显示:EO是一种新的肾上腺皮质激素;EO的异常分泌与高血压等疾病的发生发展密切相关;对高EO的病理生理学作用的干预,有可能成为新的诊断和治疗方法。