他克莫司联合窄谱中波紫外线对黑素细胞黑素合成的影响

目的 评价他克莫司联合窄谱中波紫外线(NB-UVB)对人表皮黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成的影响.方法 用MTT法筛选他克莫司最佳作用浓度,根据对黑素细胞不同干预方法分为:他克莫司组、NB-UVB组、他克莫司+ NB-UVB组,未处理组为对照组.NB-UVB的照射剂量为25 mJ/cm2,以左旋多巴为底物测定酪氨酸酶活性,NaOH法测定黑素合成的影响.结果 他克莫司(10、102、103 nmol/L)对黑素细胞增殖无明显影响(P＞ 0.05),104 nmol/L他克莫司明显抑制黑素细胞增殖(P＜0.05),故选择103 nmol/L为最佳浓度用于后续实验;他克莫司(103 nmol/L)、NB-UVB(25 mJ/cm2)、他克莫司+NB-UVB三组酪氨酸酶活性及黑素合成均明显高于对照组(P＜0.05);他克莫司+NB-UVB组酪氨酸酶活性及黑素合成高于他克莫司组及NB-UVB组(P＜0.05).结论 他克莫司联合NB-UVB可以协同增加黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成.     

全反式维甲酸对TGF-β1刺激的肝星状细胞COL1α2、MMP-2、TIMP-1以及信号通路的影响

目的观察全反式维甲酸对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖,以及经转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激后Ⅰ型胶原α1链蛋白基因(COL1α2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)及Smad 2/3的表达变化,探讨其对肝纤维化的作用及其分子机制。方法不同浓度的全反式维甲酸(0.1、1、10μmol/L)分别作用HSC-T612、24、48h,采用噻唑蓝(MTT)比色实验检测HSC-T6增殖活性;另外,经TGF-β1(5ng/mL)刺激后的HSC-T6用不同浓度全反式维甲酸干预24h后,利用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定COL1α2、MMP-2及TIMP-1mRNA的表达,细胞免疫化学染色法检测smad2/3蛋白的表达。结果全反式维甲酸能够抑制HSC-T6的增殖,而且具有浓度依赖性(P<0.05);受外源TGF-β1 5ng/mL刺激后,HSC-T6中COL1α2、MMP-2、TIMP-1 mRNA及Smad2/3蛋白表达较对照组明显增强(P<0.05),而全反式维甲酸干预能够有效降低HSC-T6受TGF-β1刺激后COL1α2、MMP-2、TIMP-1mRNA及Smad2/3蛋白的表达(P<0.05)。结论全反式维甲酸能够抑制HSC-T6的增殖,下调HSC-T6受TGF-β1刺激后COL1α2、MMP-2、TIMP-1mRNA的表达,并且可能通过抑制HSC-T6中TGF-β1的下游信号蛋白Smad 2/3的表达,影响TGF-β1/Smad信号通路,发挥其抗肝纤维化作用。     

去甲肾上腺素对胰腺癌细胞株MiaPaCa-2侵袭能力的影响

目的 探讨经典神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)对人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2侵袭能力的影响及其作用机制.方法 取人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2为研究对象,实验分为空白对照组、0.1μmol/L NE干预组、1μmol/L NE干预组和10μmol/L NE干预组.干预48h后,采用Transwell侵袭实验检测各组中MiaPaCa-2细胞侵袭能力的变化;RT-PCR法检测细胞中MMP-2、MMP-9和VEGF mRNA的表达;免疫细胞化学法检测细胞中MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白的表达.结果 1μmol/L NE干预组和10μmol/L NE干预组MiaPaCa-2细胞的侵袭能力均高于空白对照组(P<0.01);1μmol/L NE干预组和10μmol/L NE干预组MiaPaCa-2细胞中MMP-2、MMP-9和VEGF mRNA和蛋白表达水平均高于空白对照组(P<0.05).结论 NE可以通过上调MMP-2、MMP-9和VEGF的表达从而促进胰腺癌细胞发生远处侵袭转移.     

寻常型银屑病皮损中肿瘤坏死因子-α、基质金属蛋白酶9及其抑制剂-1的表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在寻常型银屑病发病机制中的作用及其相关性。方法采用免疫组织化学SABC法检测40例寻常性银屑病皮损组织、20例非皮损组织以及20例正常皮肤组织中TNF-α、MMP-9和TIMP-1的表达分布情况。结果TNF-α、MMP-9在银屑病皮损组织中阳性表达率明显高于非皮损组织和正常皮肤组织(P<0.05);TIMP-1在皮损组织中的阳性表达率与非皮损组织和正常皮肤组织中的表达差异无显著性(P>0.05)。在银屑病皮损中,TNF-α与MMP-9表达呈正相关(r=0.471,P<0.01);MMP-9与TIMP-1表达呈负相关(r=-0.589,P<0.01);TNF-α与TIMP-1表达呈负相关(r=-0.6,P<0.01)。结论TNF-α、MMP-9和TIMP-1可能在寻常型银屑病发病机制中起相互协同作用。     

IL-1α和MMP-9在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的研究白介素-1α(interleukin-1α,IL-1α)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达,探讨二者与胆脂瘤侵袭破坏能力的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测了IL-1α、MMP-9在21例后天继发性胆脂瘤上皮与10例胆脂瘤患者外耳道皮肤表皮中的表达。结果IL-1α和MMP-9在胆脂瘤上皮的阳性表达率明显高于外耳道皮肤表皮,差异具显著性(P<0.01,P<0.01);胆脂瘤上皮IL-1α、MMP-9表达均与胆脂瘤的侵袭破坏程度正相关(P<0.05,P<0.05);胆脂瘤上皮中IL-1α、MMP-9表达存在正相关性。结论IL-1α、MMP-9是介导胆脂瘤侵袭破坏行为的重要细胞因子。在体内IL-1α可能对MMP-9表达具有上调作用。     

尾加压素Ⅱ促进血管外膜成纤维细胞表达肿瘤坏死因子α及其机制

目的研究尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)对大鼠血管外膜成纤维细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响和可能的细胞内信号转导机制。方法贴块法培养大鼠胸主动脉血管外膜成纤维细胞,取3～5代细胞于无血清DMEM培养基中加入不同浓度UⅡ(10-10～10~(-7) mol/L)孵育1～24h,观察UⅡ促进TNF-α分泌的浓度、时间曲线。在培养的细胞中加入不同信号转导通路抑制剂,处理30min后,加入UⅡ(10~(-7) mol/L)共孵育6h。提取上清,采用酶联免疫吸附测定法检测TNF-α分泌水平。结果 !UⅡ呈浓度、时间依赖性促进外膜成纤维细胞中TNF-α分泌,10~(-7) mol/L、6h达高峰(P<0.01)。(2)UⅡ促进外膜成纤维细胞分泌TNF-α的作用能被UⅡ受体阻断剂SB710411(10~(-7) mol/L)、蛋白激酶C抑制剂H7(10~(-5) mol/L)、ERK1/2抑制剂PD980959(10~(-5) mol/L)所抑制(P <0.01)。结论 UⅡ呈时间依赖性及浓度依赖性方式促进血管外膜成纤维细胞TNF-α表达,该作用通过激活UⅡ受体、蛋白激酶C和ERK1/2等信号通路来实现。     

盐酸小檗碱调节大鼠实验性牙周炎牙龈组织MMPs/TIMP表达变化及其机制

目的探讨盐酸小檗碱对牙周炎基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制物(MMPs/TIMP)的调控及其机制。方法采用丝线结扎+菌液注射法建立大鼠牙周炎模型后,给予150mg/(kg·d)盐酸小檗碱或生理盐水干预。显微X射线断层计算机扫描(μ-CT)和苏木素-伊红(HE)染色观察牙周组织学改变,Western blot检测大鼠牙龈组织MMP-2、MMP-9、TIMP-2的蛋白表达及P38 MAPK/NF-κB磷酸化水平,ELISA测定牙龈组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的含量。结果牙周检查发现牙周炎组大鼠牙龈红肿明显,触之易出血,牙周袋较深,μ-CT显示牙槽骨吸收明显,牙龈组织TNF-α和IL-1β含量显著增加,MMP-2和MMP-9表达增多,并伴有磷酸化P38 MAPK/NF-κB上调。盐酸小檗碱治疗后可明显改善牙周情况,减少牙槽骨吸收,降低牙龈组织TNF-α和IL-1β含量,抑制P38 MAPK/NF-κB磷酸化,最终降低MMP-2和MMP-9的过度表达并提高TIMP-2的表达。结论盐酸小檗碱可能通过抑制P38 MAPK/NF-κB磷酸化,降低牙龈组织TNF-α和IL-1β,调节牙龈组织MMPs/TIMP的过量表达而发挥对大鼠牙周炎的治疗作用。     

低氧对人支气管上皮细胞气道重塑相关因子表达的影响

目的研究低氧刺激对人支气管上皮细胞(16HBE)中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和转化生长因子-β_1(TGF-β_1)表达的影响及其相关信号机制。方法将细胞分组,低氧组用20mL/L O2培养16HBE细胞,培养时间分别为6、12、24h;对照组于常规条件下培养。选择MMP-9和TGF-β_1表达较高的时间组予以表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478、低氧诱导因子(HIF-1α)抑制剂Lificiguat(YC-1)干预。CCK-8法检测各组细胞活力,实时荧光定量PCR检测MMP-9和TGF-β_1的转录水平,Western blot检测HIF-1α、MMP-9和TGF-β_1的蛋白相对表达水平。结果低氧组MMP-9和TGF-β_1转录及蛋白水平均高于对照组(P均<0.05),AG1478、YC-1可抑制低氧引起的上述改变(P<0.05);AG1478能降低在低氧诱导时高水平表达的HIF-1α。结论低氧刺激可能通过EGFR诱导HIF-1α表达,进而促进气道重塑相关因子MMP-9和TGF-β_1的表达。     

IFN-γ对MMP-2、-9和TIMP-1在HL-60细胞中表达的影响

目的研究白血病细胞株HL-60中基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)和基质金属蛋白酶天然抑制剂-1(TIMP-1)的表达及细胞因子干扰素(IFN-γ)对MMP-2、MMP-9和TIMP-1转录水平的调节。方法分别在HL-60细胞生长的不同时期(1-5d)收集细胞,采用半定量RT-PCR方法,分析白血病细胞株HL-60中MMP-2、MMP-9和TIMP-1mRNA的表达水平;以不同浓度的IFN-γ作用于HL-60细胞,24、48h后RT-PCR检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1mRNA水平的变化。结果细胞接种后24hMMP-2和MMP-9的mRNA水平最高,但TIMP-1表达相对恒定。IFN-γ各个浓度组对MMP-2和MMP-9mRNA表达均有抑制作用(P<0.05),且随着作用浓度的增高mRNA表达减少;TIMP-1对其调节不敏感。结论明确了白血病HL-60细胞株在转录水平表达MMP-2、MMP-9和TIMP-1;IFN-γ对MMP-2、MMP-9mRNA表达有明显的抑制作用,而对TIMP-1转录无明显作用。     

苏子油干预血管内皮细胞miR-21靶向调控MMP-9的机制

目的探讨不同浓度苏子油干预人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)miR-21和基质金属蛋白酶MMP-9的表达,为苏子油改善动脉粥样硬化提供依据。方法体外培养HUVEC,以TNF-α诱导细胞进行造模,将细胞分为空白组、模型组及苏子油高、中、低剂量组。MMT法检测各组细胞A值;PT-PCR检测细胞miR-21、MMP-9基因水平;脂质体转染法将miR-21模拟物转入HUVEC细胞,Western blot检测转染后MMP-9蛋白的表达。结果苏子油高、中、低剂量能明显改善TNF-α诱导的HUVEC损伤,且苏子油对内皮细胞的保护作用呈剂量依赖关系;RT-PCR结果显示,模型组miR-21及MMP-9的表达高,苏子油干预后,miR-21及MMP-9基因的表达逐渐减弱,且二者分别与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);细胞转染miR-21后,MMP-9蛋白的表达显著增强;miR-21与MMP-9 mRNA3′UTR区经生物信息学软件预测存在靶向结合位点。结论苏子油可能通过干预miR-21靶向调控MMP-9的表达对血管内皮细胞发挥保护作用,从而发挥抗动脉粥样硬化作用。     

大肠腺癌中基质金属蛋白酶-2、9及其抑制剂-1、2的表达

目的 探讨人大肠腺癌组织中基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、-9)及其抑制剂-1、-2(TIMP-1、-2)的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学SP法检测MMP-2、MMP-9和TIMP-1、TIMP-2在30例大肠腺癌组织及相应切缘正常组织中的蛋白表达.结果 大肠腺癌组织中MMP-2、MMP-9及TIMP-1的阳性表达明显高于正常切缘组织(P<0.05),并与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期以及淋巴结转移呈正相关(P<0.05);TIMP-2在大肠腺癌组织中低表达(P<0.05),并与浸润深度、Dukes分期以及淋巴结转移呈负相关(P<0.05),与肿瘤分化程度无明显相关性(P>0.05);MMP-9和TIMP-1表达明显相关(r=0.4924,P<0.05).结论 MMP-2、MMP-9及TIMP-1的过度表达与大肠腺癌的侵袭、转移有密切关系,其联合检测有助于评估大肠腺癌的恶性生物学行为及预后.     

EZH2、MMP-2及MMP-9在肝癌侵袭转移中的作用及关系

目的检测果蝇zeste基因增强子的人类同源物2(EZH2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在原发性肝癌组织中的表达,分析三者表达的相关性,并明确三者表达与肝癌临床病理参数间的关系;探讨EZH2在肝癌细胞侵袭迁移中的作用以及对MMP-2和MMP-9表达的影响。方法 qRT-PCR检测EZH2、MMP-2和MMP-9在肝癌组织中的表达;肝癌组织中三者表达的相关性采用Pearson相关分析;采用小干扰RNA转染构建EZH2表达下调的SMMC-7721肝癌细胞系;Transwell小室观察EZH2对SMMC-7721细胞侵袭、迁移的影响;qRT-PCR检测肝癌细胞中EZH2对MMP-2和MMP-9表达的影响。结果原发性肝癌组织中EZH2、MMP-2和MMP-9呈高表达,且其高表达与不良的临床病理因素相关;在肝癌组织中EZH2与MMP-9表达呈正相关;干扰EZH2表达抑制肝癌细胞侵袭、迁移和MMP-9表达。结论 EZH2、MMP-2和MMP-9与肝癌的发生发展密切相关,可成为肝癌的潜在生物标记物和治疗靶点。     

川芎嗪对体外培养兔关节软骨细胞MMP-1、MMP-13和TIMP-1表达的影响

目的研究川芎嗪对IL-1β诱导的兔关节软骨细胞损伤的影响。方法体外分离培养兔关节软骨细胞,并以其为实验模型;将实验分为正常对照组、白介素组、川芎嗪+白介素组;MTT法检测细胞增殖情况;Real-time PCR检测MMP-1、MMP-13和TIMP-1的mRNA表达量。结果 MTT检测结果显示,川芎嗪+白介素组细胞增殖情况显著高于正常对照组和白介素组(P<0.05);Real-time PCR结果显示,川芎嗪+白介素组MMP-1和MMP-13的mRNA表达量显著低于白介素组(P<0.05),而TIMP-1的mRNA表达量则显著高于白介素组(P<0.05)。结论川芎嗪可抑制IL-1β对软骨细胞的炎症损伤,具有保护软骨细胞,延缓软骨基质降解的作用,临床上可作为OA的治疗用药。     

基质金属蛋白酶-9在宫颈癌中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白在宫颈癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测MMP-9蛋白在18例正常宫颈上皮、20例宫颈原位癌、55例宫颈浸润癌中的表达。结果MMP-9在宫颈浸润癌中的表达率明显高于正常宫颈组织和宫颈原位癌(P<0.05),而正常宫颈组织和宫颈原位癌组织之间无显著性差异(P>0.05)。MMP-9的表达与宫颈鳞癌不同临床分期、肿瘤大小、病理分级无显著性差异(P>0.05),而在宫颈浸润不同深度间及有无淋巴转移的差异有显著性(P<0.05)。结论MMP-9在宫颈浸润癌中呈高表达,MMP-9可能通过降解破坏细胞外基质(ECM)和基底膜(BM)而发挥促进宫颈癌发生、发展、浸润转移的作用。     

基质金属蛋白酶-2及其抑制因子TIMP-2 在脑胶质瘤中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制因子TIMP-2的表达及其与脑胶质瘤恶性程度之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测并比较了67例不同级别胶质瘤组织和10例正常脑组织中MMP-2和TIMP-2蛋白的表达情况。结果随着肿瘤恶性程度的增加,MMP-2蛋白表达增高而TIMP-2蛋白表达降低。结论MMP-2及TIMP-2对胶质瘤恶性程度的评估有重要的意义。     

基质金属蛋白酶7在肾细胞癌中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶7(MMP-7)在肾细胞癌组织中的表达及其与临床病理因素及预后的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测78例肾细胞癌组织及相对应的癌旁肾脏组织中MMP-7的表达情况。结果 MMP-7在癌旁肾脏组织中几乎不表达,在肾细胞癌组织中MMP-7阳性表达率为55.1%。MMP-7的异常表达在患者的不同性别、年龄、肿瘤大小和病理组织学类型及有无血尿、腰痛、肾盂浸润、肾静脉癌栓无显著性差异(P>0.05),与肾细胞癌包膜浸润、淋巴结转移有显著性差异(P<0.05),并与病理组织学分级、临床分期相关(P<0.05),有包膜浸润、淋巴结转移以及病理组织分级高、临床分期晚的肾细胞癌MMP-7表达率高于无包膜浸润、淋巴结转移和病理组织分级低、临床分期早的肾细胞癌(P<0.05)。MMP-7表达阳性病例术后生存时间显著短于阴性表达病例(P<0.05)。结论 MMP-7在肾细胞癌中有较高程度表达,并与肾细胞癌的浸润、转移及生存时间有一定的关系,检测MMP-7可作为判断肾细胞癌恶性程度及预后的指标。     

MMP-9及glypican-3在肝癌组织中的表达及其临床病理价值

目的探究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3)在肝癌组织中的表达及临床病理价值。方法选取2014年3月至2016年7月于福建医科大学附属第一医院经病理学诊断为原发性肝癌的患者97例为肝癌组,60例健康志愿者入选对照组。免疫组织化学法检测所有研究对象的肝组织取材标本的MMP-9及glypican-3表达,并分析表达变化与肝癌临床特征间的关系。结果肝癌组的MMP-9阳性率和表达评分分别为47.42%、(1.95±1.61)分,远远大于对照组的0(P<0.05)。肝癌组的glypican-3阳性率和表达评分分别为59.79%、(2.21±1.71)分,明显高于对照组的8.33%、(0.83±1.23)分(P<0.05)。肝癌组的MMP-9及glypican-3表达与性别、年龄、肿瘤直径、肝癌分化情况、有无肝癌癌栓,不具有统计学相关性(P>0.05)。结论 MMP-9可用做为肝癌患者早期检测指标,glypican-3在肝癌组织中高表达也有一定的检测意义。     

The expressions and significance of MMP-2 and TIMP-2 in human pancreatic carcinoma

Objective To study the expressions of MMP-2 and TIMP-2 in pancreatic carcinoma and their relationship with tumor invasion, local metastasis and prognosis of the carcinoma. Methods The expressions of MMP-2 and TIMP-2 were examined in 32 patients with pancreatic carcinomas by S-P immunohistochemical technique and the correlation with pathological tumor parameters were analyzed. Survival analysis was made by using the Kaplan-Meier method. Results The positive rates of MMP-2, TIMP-2 in 32 patients with pancreatic carcinoma were 56.25% and 75.00%, which were significantly higher than those of the controls（P〈0.05）. Expressions of MMP-2 and TIMP-2 were independent of sex, age, histological grading and type, but well correlated with the lymph node metastasis and TNM clinical staging （Ⅰ and Ⅲ, Ⅱ and Ⅲ ）. There was a significant association between MMP-2, TIMP-2 and prognosis in pancreatic carcinoma. Conclusion MMP-2 and TIMP-2 might be useful markers for biological aggressiveness of this malignancy and might contribute to the invasive properties of pancreatic carcinoma, which can be used to evaluate the prognosis of patients.     

克拉霉素对肺癌细胞VEGF、MMP-9表达的影响

目的　研究克拉霉素 (CAM)对人小细胞肺癌细胞VEGF、MMP 9蛋白表达的影响 ,探讨CAM抗血管生成的机制。方法　采用免疫组化和图象分析技术 ,观察不同浓度的CAM作用下人小细胞肺癌细胞VEGF、MMP 9蛋白表达的变化。结果　人小细胞肺癌细胞存在VEGF、MMP 9的高表达 ,CAM到达一定浓度后对其表达具有抑制作用 ,CAM对MMP 9的表达存在剂量 效应关系。结论　CAM对人小细胞肺癌细胞MMP 9的蛋白表达有明显的抑制作用 ,对VEGF的表达也有一定的抑制作用 ,这种抑制作用可能是CAM抗肿瘤血管生成的分子基础     

CD147和MMP-9在喉鳞癌中的表达及意义

目的探讨细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在喉鳞癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学染色法对36例喉鳞癌组织、癌旁组织及15例喉息肉组织中CD147和MMP-9的表达进行检测。结果①喉鳞癌组织中CD147的阳性率为83.3%(30/36),高于喉息肉(33.3%,5/15)和癌旁组织(16.7%,6/36);CD147的表达与喉癌病理分级、临床分期以及淋巴结转移状况有关(P<0.05)。②喉鳞癌组织中MMP-9的阳性率为72.2%(26/36),高于喉息肉(13.3%,2/15)和癌旁组织(5.6%,2/36);MMP-9的表达与喉鳞癌病理分级、T分级、临床分期以及淋巴结转移状况有关(P<0.05)。③CD147和MMP-9在喉鳞癌组织中的表达呈正相关(r=0.721,P=0.000)。结论 CD147和MMP-9在喉鳞癌中有较高的阳性表达,并可能与喉鳞癌的发展和转移有关。