原代培养乳鼠窦房结细胞的形态学及表面抗原研究

目的 建立乳鼠窦房结细胞(SNC)的体外分离纯化培养方法,了解SNC的形态结构特点,观察表面抗原超极化激活环核苷酸门控阳离子通道基因4(HCN4)和缝隙连接蛋白45(Cx45)的细胞表达特点,为细胞生物起搏的深入研究提供一定实验依据.方法 取新生SD乳鼠的窦房结组织,胰酶逐次消化,并予差速贴壁及5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-BrdU)纯化处理进行原代窦房结细胞的培养.结果 在培养的窦房结细胞中可观察到3种形态的细胞,即梭形细胞、三角形细胞和多边形细胞,其中梭形细胞所占比例最大,搏动频率最快,细胞器不发达,肌原纤维稀少,表达HCN4和Cx45;三角形细胞微量表达Cx45.结论 ①胰酶消化法结合差速贴壁及5-BrdU处理,是可靠的窦房结细胞纯化培养技术;②搏动频率最快、HCN4和Cx45表达阳性的梭形细胞可能系窦房结起搏细胞.     

兔动员外周血间充质干细胞集落形成能力与神经元诱导分化研究

目的研究动员后兔外周血间充质干细胞(PBMSCs)的存在频率,并对PBMSCs进行神经元诱导分化鉴定。方法采用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)皮下注射动员,结合密度梯度离心和贴壁培养法分离、培养兔外周血样品中的PBMSCs,利用集落形成率分析动员兔PBMSCs的存在频率,并对PBMSCs的神经元分化能力进行体外诱导鉴定。结果动员后的PBMSCs原代培养24h后,可见较多短梭形及多角形贴壁细胞,3～4d后出现集落样生长,传代培养的PBMSCs形态均一、呈长梭形漩涡状生长;未动员的外周血样品中的贴壁细胞少,集落形成少,且易老化,无法传代。集落形成率实验显示,动员后的PBMSCs在每百万外周血单个核细胞中有2.8～10.8个;而未动员组PBMSCs仅有0～3个。免疫细胞化学染色显示,PBMSCs经神经诱导7d后其神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经元特性核蛋白(NeuN)染色阳性。结论动员剂可提高兔外周血中的PBMSCs含量,所获取的PBMSCs具备神经元分化能力。     

犬心房室隔内细胞形态学特征

目的　通过观察犬心房室隔内细胞形态学特征 ,探讨其可能的功能意义。方法　利用光学显微镜 ,通过HE和Masson染色对犬心房室隔标本的细胞形态、排列方式、直径和染色深浅进行细致观察 ,通过透射电镜观察证实光镜所见细胞特征。结果　①心房扩展部可见到四条过渡细胞束与房室结相连 :Ⅰ径自冠状窦壁沿锥形间隙或室间隔肌与右房肌之间向前至房室结后端 ;Ⅱ径自冠状窦口周围沿右房心内膜下至房室结浅层 ;Ⅲ径经三尖瓣隔侧瓣与冠状窦口之间向前经心内膜下至房室结右后端并至房室结的浅层 ;Ⅳ径自左侧心房肌向右下沿室间隔肌上缘至房室结左后端。低倍镜下纤维排列较疏松 ,纤细 ,直径约 9.5 μm ,染色浅淡。高倍镜下细胞呈长形 ,核长圆形与细胞长轴方向一致 ,细胞质染色淡。电镜下细胞特征符合过渡细胞特点。②冠状窦周围见到大量T细胞和少量P细胞及浦肯野细胞。结论　犬心房室隔内有过渡细胞构成的新传导径路 ;冠状窦可能是一个重要的潜在起搏点     

交界区逸搏节律的细胞及电生理学基础

目的 探讨交界区逸搏节律的细胞及电生理学基础.方法 组织切片Masson染色;酶解分离单个心肌细胞;单细胞膜片钳技术研究具有自律特性细胞的动作电位特征.结果 组织学研究发现家兔致密结及房室结后延伸细胞组成具有异质性且呈规律性排列;单细胞形态学观察可见不同于普通心房肌细胞的起搏细胞(PC)、过渡细胞α(TCα)和β,且PC和TCα呈现自发规律性收缩.三种细胞相比较,在动作电位波形、最大舒张电位、0期除极速度、动作电位复极至90%时程(APD90)、舒张期自动除极速率(VDD)、动作电位超射值及幅值方面,PC和TCα之间除APD90和VDD外,其他各指标差异无统计学意义(P>0.05).TCβ与PC、TCα分别相比,各项指标差异均有统计学意义(P均<0.05). 结论家兔致密结及房室结后延伸具有自律特性的PC及TCα可能是交界区逸搏节律的细胞学基础.     

大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养与鉴定

目的建立一种简便、实用的大鼠脉络丛上皮细胞的原代培养方法,以便进一步对其进行体外实验研究。方法无菌条件下取1～9d的Sprague-Dawley大鼠脉络丛组织,经机械分离后将细胞种植于含100mL/L胎牛血清的DMEM培养基中进行培养,定期进行形态学观察并摄片。在培养第9天左右,采用电子显微镜及Hematoxylin&Eosin(HE)染色进行形态学观察,免疫细胞化学染色法鉴定并计算脉络丛上皮细胞的纯度。结果培养的脉络丛上皮细胞呈梭形或多角形,电子显微镜下有微绒毛,细胞纯度在95%以上。结论利用机械分散法分离新生大鼠脉络丛上皮细胞,进行原代培养可获得高纯度的脉络丛上皮细胞,该方法简便实用。     

人心窦房结的光镜观察

本文对11例人心窦房结的形态和位置作了连续切片观察。窦房结位于界嵴上部的心外膜深面约1mm 左右,结的长轴与界嵴长轴一致,其形状多种多样。成人结的大小为14×3.6×1.09mm~3;儿童结的大小为6.9×2.3×0.8mm~3.窦房结组织染色淡(HE 染色),组织致密,结中心有较大动脉穿过。结细胞明显较一般心房肌细胞小,其中P 细胞类似原始心肌细胞,核大、胞质肌原纤维少,染色淡.T 细胞为短柱状,核较小染色深浅介于P 细胞和心房肌细胞之间状态.上述两种细胞位于胶原纤维相互交织的网眼内。     

兔心房室束及其束支的形态学和组织化学研究

用光镜和组化法研究了兔心房室束及其束支的形态学(20例)和胆碱酯酶活性(10例)。房室束长3.60mm,其中穿通部0.58mm,穿通前部3.02mm;多为三角形,扁圆形等。房室束的起始部由过渡细胞和起搏细胞组成,前部及其束支的细胞为长形,大小有异。右束支为条索状;左束支起始部较短,分支成片状。房室束的穿通部有很大差异,5例较典型,2例位于右侧心内膜和中心纤维体之间,其余不典型。房室束及其束支胆碱酯酶为强阳性,心肌为弱阳性。     

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及其形态观察

目的　分离和培养大鼠骨髓组织中的间充质干细胞 ,并观察其生长形态。方法　利用造血干细胞和骨髓间充质干细胞不同生长特性 ,采用贴壁法分离并用含 15 % (体积分数 )FBS的低糖型DMEM培养基培养。结果　分离培养得到的细胞中随着换液次数的增加红细胞和造血细胞逐渐减少 ;骨髓组织中贴壁得到间充质干细胞呈梭形、纺锤形和多角形。结论　贴壁法可以分离培养骨髓中的间充质干细胞     

冠状窦口和周围心肌组织的形态学研究

目的通过观察冠状窦口(CSO)及其周围心肌组织的形态学特征,探讨其在射频消融房内折返性心律失常和房室结折返性心动过速(AVNRT)方面的功能意义。方法正常成人心脏15例,其中7例用于大体解剖观察,7例用于光镜观察,1例用于电镜观察。组织连续切片用HE和Mallory染色。光镜对CSO及其周围心肌组织的形态、排列方式和染色深浅进行细致观察,透射电镜观察证实光镜所见细胞特征。结果CSO及窦的大部分均有房肌包绕,CSO处肌纤维向后与界嵴下延伸和右房瓣上肌环的心肌有联系,向前也与房室结(AVN)有联系。CSO上前壁和下前壁均可见P细胞,T细胞以下壁多见,浦肯野细胞以上壁多见。在CSO至AVN的路径中可见主要由T细胞构成的纤维束,该部位可被分为两部分:靠近CSO的一段肌纤维称为右房结束(RANB);靠近AVN的一段肌纤维称结后延伸(PNE)。另外,还在CSO周围心肌中尤其是后壁的脂肪组织中见到大量神经纤维、神经元或神经节。结论①CSO附近心肌参与了房室结双径路(DAVNP)中慢径的组成;②CSO附近心肌参与了房内折返性心律失常和AVNRT环路的形成;③CSO可能是一个重要的结外起搏点。     

人胎胰组织培养实验研究

本文总结了60例中期妊娠水囊引产的人胎胰组织,用Ham′s F_(10)培养基,在37℃恒温箱经闭式培养法培养观察不同的胎龄,不同的培养天数,不同的细胞形态释放胰岛素及C肽的能力。结果表明:细胞培养最佳期为1～6天,圆形细胞比梭形细胞释放胰岛素、C肽能力强(p<0.01),不同胎龄的胰岛组织释放胰岛素、C肽的能力无差异(p>0.05)。     

刀豆蛋白A条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞生长的影响

目的研究刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)条件化培养基对体外培养的兔角膜内皮细胞(rabbit corneal endothelial cells,RCECs)生长的影响。方法采用揭取后弹力层及内皮细胞联合组织块法进行RCECs的体外原代培养,分别用含有体积分数为5%、10%、15%、20%ConA的活化大鼠脾细胞条件上清液的RPMI1640培养基进行RCECs原代培养,并用含10%(体积分数)胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的RPMI1640培养基作为对照。神经烯醇化酶免疫组织化学染色法进行细胞鉴定;噻唑蓝比色法观察各组RCECs生长的状况;SPSS11.0One-way ANOVA及LSD检验进行统计分析。结果成功进行了RCECs的体外培养,培养细胞内神经烯醇化酶阳性表达。ConA条件化培养基各组细胞增殖均高于对照组(P<0.001),且10%、15%ConA条件化培养基组的RCECs细胞数量明显高于其他各实验组(P<0.001)。结论ConA条件化培养基具有促进RCECs生长的作用,可作为培养辅佐剂。     

子宫内膜基质干细胞的体外成骨诱导和成脂诱导分化

目的探讨子宫内膜基质干细胞的多向分化潜能。方法取因子宫肌瘤行全子宫切除术患者的子宫内膜组织,磁珠分选子宫内膜基质干细胞,进行传代培养。传代细胞分别加入成骨诱导剂和成脂诱导剂培养,并通过茜素红和油红O染色对成骨细胞和脂肪细胞形态进行鉴定。结果子宫内膜基质干细胞呈成纤维细胞样贴壁生长,其经成骨、成脂诱导培养3周后形态、体积发生明显改变。茜素红染色显示细胞团中央能形成钙化结节;成脂诱导后油红O染色可见细胞质内出现橙红色脂滴。结论子宫内膜基质干细胞经体外诱导培养后可向成骨细胞和脂肪细胞分化,并具有明显的成骨和成脂细胞形态,表明子宫内膜基质干细胞具有多向分化潜能。     

THE MORPHOLOGICAL CHANGES IN MUSCLE SPINDLES AND ALTERATIONS IN CELL ACTIVITY OF THE RATS'''' RED NUCLEUS AFTER 2 WEEKS'''' SIMULATED WEIGHTLESSNESS

The extensive negative effects induced by zerogravity or microgravity where offer special environ-ment are har mful for cos monauts[1-3].The real spaceenvironment has many characteristics,including mi-crogravity,electromagnetic fields,and radiation,which may have an effect on the function and mor-phology of the CNS[4],but the changes in CNSin-duced by si mulated weightlessness on the groundcaused the corresponding adaptive changes of cere-bral circulation,which made alterations in sensoryper…     

腸易激综合征模型内脏敏感性的脑-肠轴机制研究

目的观察肠易激综合征(IBS)不同亚型大鼠模型脑-肠神经系统c-fos表达变化,探索IBS内脏敏感性的机制。方法采用冰醋酸加束缚应激的方法建立腹泻型肠易激综合征(IBS-D)动物模型,冰水灌胃法建立便秘型肠易激综合征(IBS-C)动物模型。所有大鼠给予直肠内球囊扩张,检测球囊扩张引起腹部收缩反射的最小容量阈值及球囊不同容量扩张时腹部收缩反射的次数;用免疫组化方法检测各组大鼠海马、下丘脑、空肠、回肠、近端结肠、远端结肠组织中c-fos阳性细胞并进行分析。结果 IBS-D组球囊扩张腹壁收缩的阈值明显低于IBS-C组和对照组,不同容量扩张时腹部收缩次数明显高于IBS-C组和对照组,IBS-C的腹壁收缩的最小阈值明显高于对照组。IBS模型组下丘脑c-fos阳性细胞显著多于对照组,且IBS-D组多于IBS-C组。IBS模型组肌间神经丛中c-fos阳性细胞明显多于对照组。结论 IBS模型内脏敏感性的变化与脑-肠轴痛觉高敏感有一定的关系,肠神经丛初级感觉神经元的激活是IBS内脏高敏感的机制之一。     

A GROWTH INHIBITOR SECRETED FROM CULTURED RABBIT SMOOTH MUSCLE CELLS IS DISTINCT FROM TGF-β

Smoothmusclecellproliferationiskeyeventinthepathogenesisofatherosclerosis(l).Growthfactorsreleasedbyarterialsmoothmusc1ecel1smainlyareplate1et-derivedgrowthfactor(PDGF)andfibroblastgrowthfactor(FGF)t'i.ArterialsmoothmusclecellsmaystimuIatesmoothmusclecellproliferationviaautocrineandparacrinethegrowthfactors,vasoconstrictorssuchasendothe-lial-l,thromboxane,prostag1adinH,andan-giotensin1.Incontrast,transformationgrowthfactor8(TGF-6),heparin,nitricoxide(No)andprostacyclin(PGI,)releasedbyart…     

骨髓间质干细胞的分离培养与鉴定

目的建立兔骨髓间质干细胞(MSCs)的体外分离纯化、扩增和鉴定的方法,为MSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。方法抽取兔胫骨骨髓,密度梯度离心,得到骨髓单个核细胞,接种后形成单层贴壁细胞,经胰蛋白酶消化后传代培养扩增,倒置显微镜下观察原代和传代细胞的生长特性。通过免疫荧光组织化学、流式细胞分析和透射电镜鉴定细胞。结果分离培养的骨髓MSCs贴壁、呈梭形,原代细胞呈集落生长,7～10d达到融合,传代后增殖速度加快;骨髓MSCs表达CD90,反复传代后表达效率增高,不表达CD34;透射电镜可见细胞表面有大量的绒毛突起,胞浆中有丰富的粗面内质网和线粒体,核大,形态不规则。结论密度梯度离心结合贴壁法,以及消化传代能有效分离纯化和扩增骨髓MSCs,分离培养的细胞具有骨髓MSCs的基本表型和特性。     

THE EXPERIMENTAL STUDY ON THE EFFECTS OF SIX MYCOTOXINS ON THE CULTURAL CHONDROCYTES

ThisstudywassubsidizedbytheNiationalKeyProjects85-917-01-03and85-917-01-02AsanetiologicalstudyofKashinBeckdisease(KBD),thepoisoningofmycotoxinsisoneoftheimportanttheoriest12.ByfeedingchickenwithfoddercontainingfusariumofgrainfromKBDareas,itwasfoundthatchicken1.-esentedobviousretrogradeaffectioninthegrowthplateofkneeJoint.Thechondrocytesshowedgrowthhindrancewithdegenerativechanges,andtherewasaband--shapednecrosisinthegrowthcartilage">.Thefungiandmycotoxinswererepeatedlyexaminedinthegrainof…     

Effects of Panax notoginseng saponins on hydrogen peroxide-induced apoptosis in cultured rabbit bone marrow stromal cells

Objective To investigate the effects of Panax notoginseng saponins (PNS) on hydrogen peroxide (H2O2)-induced apoptosis in cultured rabbit bone marrow stromal cells (BMSCs). Methods BMSCs from 3-month-old New Zealand rabbits were isolated and cultured by the density gradient centrifugation combined with adherent method. The cultured BMSCs were divided into three groups: normal control, H2O2 treatment (100μmol/L), and PNS pretreatment (0.1g/L). Intracellular reactive oxygen species (ROS) levels as the index of oxidative stress were measured by using 2'7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate. Flow cytometry was used to observe the apoptosis of BMSCs by staining with annexinV-FITC/PI. The protein expression of Bax in BMSCs was analyzed by Western blotting. Activity of caspase-3 enzyme was measured by spectrofluorometry. Results Pretreatment with PNS significantly decreased intracellular ROS level induced by H2O2 (P<0.01). PNS markedly attenuated H2O2-induced apoptosis rate from 38.68% to 19.24%(P<0.01). PNS reversed H2O2-induced augmentation of Bax expression. Furthermore, PNS markedly reduced the altered in activity of caspase-3 enzyme induced by H2O2(P<0.01). Conclusion PNS has a protective effect on hydrogen peroxide-induced apoptosis in cultured rabbit BMSCs by scavenging ROS and decreasing Bax expression and caspase-3 activity.