Anti-CD3 scFv-B7.1真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的初步表达

目的　构建anti CD3scFv B7.1真核表达载体 ,并进行初步表达。方法　采用重叠延伸拼接法 (splicingbyoverlapextention ,SOE)将anti CD3scFv和B7.1(V +C)两个基因片段通过spacer序列连接 ,将融合基因克隆入T载体 ,并测序证实。在此基础上构建真核表达载体pcDNA/anti CD3scFv B7.1,并经脂质体法转染COS 7细胞 ,免疫组织化学法检测表达。结果　获得了序列与预期完全相同的融合基因 ;构建了抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ;在COS 7细胞中获得初步表达。结论　成功构建及表达抗CD3scFv B7.1融合基因真核表达载体 ,为进一步研究抗CD3scFv B7.1双功能分子的生物学活性及用于肿瘤生物治疗奠定了基础     

B7.1胞外编码区的真核表达及其生物活性

目的　真核表达B7.1细胞外编码区以研究其生物学活性。方法　电穿孔法将重组质粒pDisplay/B7.1(V +C)导入人子宫颈癌细胞株 ,免疫组化及核酸原位杂交法分别检测其蛋白及mRNA表达 ,3 H TdR掺入法测定表达物对T细胞的刺激作用 ;MTT法研究转染细胞 T细胞混合培养引发的细胞毒性杀伤作用。结果　B7.1细胞外区在Hela细胞表面表达 ,所表达的B7.1细胞外区在抗CD3单抗存在的情况下具有刺激T细胞活化的特性 ,重组质粒转染的Hela细胞与T细胞混合培养可引起细胞毒性杀伤。结论　真核表达的B7.1(V +C)具有T细胞共刺激活性 ,可用于构建肿瘤免疫治疗之双功能分子。     

共刺激分子B_(7.1)拼接异构体的初步研究

利用B1.7cDNA特异性引物、RT-PCR技术从新鲜淋巴瘤组织中扩增得到一与标准型B7.1片段长度不同的B7.1分子。进一步将该片段插入真核表达载体PSVL中，转染细胞得到了较高水平的表达。免疫组化研究结果证实抗B7.1单抗可与该片段编码的蛋白结合，提示该cDNA片段为B7.1抗原的拼接异构体。     

IN VITRO CO-STIMULATORY ACTIVITY OF HUMAN B7.2(IgV+C)PROTEIN PRODUCED BY ENGINEERED BACTERIA

It was well known that "two signals" wereboth necessary to activate T lymphocytes. The firstsignal was provided by TCR--CD, which was en-gaged with antigen peptide--MHC complex, and thesecond, also named the costimulatory signal, wasprovided by the interaction between costimulatorymolecules B7. l and B7. 2 on antigen presenting celland its counter--receptor CD28/CTLA4 on T cell.The first signal alone without costimulation willlead T cell to anergy or apoptosis['~'2. B7. 2 mayplay a cri…     

THE CONSTRUCTION AND EXPRESSION OF THE MURINE SCFV GENE IN E. COLI AGAINST HUMAN CERVICAL CANCER

Objective To obtain the gene of murine Single chain Fv fragment （ScFv） against haman cervical cancer and to express it in E. coli. Methods The variable region gene fragments of the heavy and light chains, which were amplified respectively using recombinant DNA techniques from CsA125 hybridama cells, were spliced together through a flexible linker to ScFv against human cervical cancer. The ScFv genes were then cloned into expression vector pCANTAB 5E and expressed in E. coli HB2151 and TG1 respectively. The soluble ScFv were characterized by SDSPAGE and Western blot. The antigen-binding activities of the soluble and phage displayed ScFv were assayed by ELISA and cell immunohistochemical analysis. Results The expressed ScFv antibodies were soluble and phage displayed. soluble ScFv secreted and expressed in E. coli HB2151 induced by IPTG were confirmed with SDS-PAGE, Western blot and ELISA. The specific binding capacity of the soluble and phage displayed ScFv to the surface associated antigen of human cervical cancer cell line was further confirmed with immunohistochemical studies. Conclusion The soluble and phage displayed ScFv expressed in E. coll against haman cervical cancer showed high, specific affinity for the cervical cancer cell line surface associated antigen.     

MAPPING EPITOPES OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16 L1 PROTEIN WITH A PHAGE DISPLAY EPITOPE LIBRARY

Theinfectionofhumanpapillomavirus(HPV)isakindofcommonsexuallytransmitteddiseases.Thehigh-riskgroupHPV,especiallyHPV16iscolselyassociatedwithhumancervicalcancer,anditwasindicatedasaninitiationfactorofcervicalcancertl].HPV16FIgenelocatedinlateopenreadingframesoftheviralgenomeencodesthemajorcoatprotein,LIprotein,whichcouldassembleintoviruslikeparticles(VLP)aloneintheinfectiousnucleit23.AbatchofevidencesshowedthattheLIproteincouldinduceantibodieswithhightiterinthehostandtheantibodiesmightp…     

血液系统恶性肿瘤细胞共刺激分子的检测及其临床意义

目的　探讨共刺激分子B7 1(CD80 )在血液系统恶性肿瘤发病学及免疫基因治疗中的重要作用。方法　应用免疫荧光法检测了 76例恶性血液病患者共刺激分子B7 1及MHCⅠ、MHCⅡDR分子的表达 ,并与自体瘤苗主动免疫治疗的疗效进行了相关分析。结果　所有患者MHCⅠ类分子表达均阳性 (10 0 % ) ,MHCⅡDR分子表达阳性率为95 %。B7 1在急性单核细胞白血病 (M5 )及多发性骨髓瘤 (MM)表达阳性率较高 ,分别为 6 9%和 10 0 % ,而在粒细胞起源的白血病几乎无表达。这与自体瘤苗免疫治疗的临床疗效基本符合 ,即疗效好的M5和MM病例 ,其B7 1表达均阳性 ,而B7 1阴性者几乎无疗效。结论　缺乏共刺激分子 (如B7 1)是血液肿瘤细胞逃避宿主免疫监视的重要原因 ,可能是人类血液肿瘤的发病机理之一 ;B7 1介导的免疫基因治疗将成为治疗人类血液系统恶性肿瘤尤其是急性白血病的一种有效方法 ,具有重要的临床应用价值     

戴家沟矿山泥石流内因分析与工程治理

戴家沟是一条潜在泥石流沟,流域面积约1.25×106m2,泥石流物源主要为矿渣,储量约1.2×106m3.利用X衍射光谱分析了黏土矿物试样;根据黏土矿物的结构及物理特征,从微观的角度分析了泥石流的形成原因.分析表明:黏土矿物具有巨大的表面积和亲水性,它的存在会促进泥石流的形成.在对泥石流物源岩土特性、泥石流流量、流速和...     

小鼠抗人T淋巴细胞表面抗原噬菌体抗体库的构建及筛选

目的　构建并筛选小鼠抗人静息 /活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示抗体库。方法　以人静息 /活化T淋巴细胞免疫Balb/c小鼠 ,取脾细胞 ,RT -PCR扩增VH 和VK 基因 ,拼接为ScFv ,插入噬菌粒载体转化大肠杆菌 ,构建了噬菌体展示抗体库 ,以人T淋巴细胞为靶抗原 ,对该库进行了 3轮淘洗 ,ELISA方法鉴定噬菌体抗体。结果　成功构建了最大实际库容量为 1 .75× 1 0 6的小鼠抗人静息T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库和小鼠抗人活化T淋巴细胞表面抗原的噬菌体展示ScFv抗体库。结论　所构建的抗体库可进一步用于对T淋巴细胞表面蛋白抗原的差异显示分析及构建基因工程抗体。     

CLINICAL COMPARISION OF THE TREATMENT OF CERVICAL PROLAPSE OF INTERVERTEBRAL DISC BY USING CAGE OR TITANIUM PLATE

In the past,cervical prolapse of intervertebraldisc,a more common cervical vertebral disease,wasoftentreated withremoval of nucleus pulposus com-bined with autogenous iliac crest graft(AICG)andtitaniumplate.In recent years,cage becomes moreand more popular and is accepted gradually.Goodclinical effects have been achieved in the treat mentof cervical prolapse of intervertebral disc by usingSolis cage.However,at present few reports havebeen available to describe the clinical effects of trea-ti…     

人B7.2 cDNA的克隆及其真核表达

为克隆人 B7.2 c DNA,构建 B7.2真核表达质粒 ,并在哺乳动物细胞中表达。分离正常人淋巴结淋巴细胞 ,经 LPS诱导后 ,以 RT- PCR,克隆 B7.2 c DNA;构建真核表达质粒 p BCMGSNeo- B7.2 ,转染哺乳细胞 ,进行表达。结果成功克隆了 B7.2c DNA,并经测序证实 :所构建的 B7.2抗原真核表达质粒可在哺乳动物细胞中高效表达。表明经 LPS诱导的人淋巴细胞可表达 B7.2 m RNA,所建立的 p BCMGSNeo-B7.2哺乳动物真核表达质粒 ,可供进一步研究 B7.2结构和功能。     

人B7.2(CD86)胞外区原核表达及其工程菌发酵培养的实验研究

目的　利用原核系统表达人B7.2 (IgV +C)并对工程菌发酵培养条件进行优化。方法　用聚合酶链反应 (PCR)技术从B7.2cDNA全长中克隆B7.2 (IgV +C) ,将PCR产物克隆入表达载体 pGEX 4T 3从而得到重组体 pGEX 4T 3 /hB7.2 (IgV +C) ,SDS PAGE及Westernblot用于检测目的蛋白的表达 ,同时对目的蛋白诱导表达时间及诱导剂浓度进行优化 ,对重组质粒的遗传稳定性进行鉴定。结果　Westernblot结果显示相应分子质量 5 5kD处有hB7.2 (IgV+C)与GST融合蛋白的高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 3 0 %左右。对工程菌进行发酵培养研究的结果表明 ,所构建的重组质粒在工程菌DH5α中传代稳定 ,未见质粒丢失 ,目的蛋白的表达不受影响 ,且在 3 7℃诱导 5h、IPTG终浓度为 4mmol·L- 1 时其表达量最多。结论　证明了利用原核系统表达人B7.2 (IgV +C)的可行性。     

流线型列车头部设计制造一体化方法

为了确保流线型列车头部结构与外形一致,分析了流线型头部外形与结构特点,在Auto-CAD的ARX、Ⅰ-deas的OpenⅠ-deas平台上,提出了流线型列车头部外形与结构设计制造一体化方法。它包含三个模块:一是应用非均匀有理B样条(NURBS)曲线曲面造型原理进行外形设计;二是应用NURBS曲面的求交理论和三维几何造型技术进行结构设计;三是采用NURBS曲线的线段拟合理论编制结构平面曲梁数控加工模块。实验表明该方法能按照人们的意志自由、快速地设计复杂的流线型列车头部外形,自动生成以平面曲梁构成的网格状头部结构,并针对不同的数控切割设备,生成相应的平面板梁数控加工文件;将过去传统的由设计、工艺、加工等多部门协作耗时的工作,集中由计算机自动完成,实现了列车头部设计制造一体化的重大变革。     

榆树沟隧道施工监控量测及分析

榆树沟隧道施工监测结果表明,各测试段净空收敛数值均远小于允许收敛值,隧道结构是安全的;围岩压力数值均远小于设计值,但分布不均;喷射混凝土和二次衬砌混凝土应力均较小;格栅钢架轴力绝大部分为压力,而且比较大,表明格栅钢架的作用显著。     

EXPRESSION OF PRE S ROTEIN OF HBV AS A ALKALINE PHOSPHATASE FUSION PROTEINS IN NIH 3T3 CELLS

ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＰＲＥＳＲＯＴＥＩＮＯＦＨＢＶＡＳＡＡＬＫＡＬＩＮＥＰＨＯＳＰＨＡＴＡＳＥＦＵＳＩＯＮＰＲＯＴＥＩＮＳＩＮＮＩＨ３Ｔ３ＣＥＬＬＳＸｉａｏＳｈｅｎｇｘｉａｎｇ；Ｔ．Ｓ．Ｂ．Ｙｅｎ（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＰａｔ...     

2205DSS焊接结构在酸性环境下腐蚀速率研究

试验研究了2205DSS焊接结构的母材区、融合区、热影响区分别在草酸、硝酸和盐酸溶液中的腐蚀速率。研究发现:该结构在草酸和沸腾的硝酸溶液中有较好的耐腐蚀能力,而在盐酸溶液中较差;熔合区腐蚀速率最快,母材区次之;在盐酸溶液中腐蚀速率随着温度的升高而加快,随着盐酸溶液浓度的增加先增加后降低,随着腐蚀时间的进行而降低。建立了腐蚀速率与盐酸溶液的温度、浓度、腐蚀时间之间的数学模型,该模型能快速计算该焊接结构在盐酸溶液中的腐蚀速率。     

B－CELL APOPTOSIS INDUCED BY ANTIGEN RECEPTOR CROSSLINKING IS BLOCKED BY A T－CELL SIGNAL THROUGH CD40

Ｂ－ＣＥＬＬＡＰＯＰＴＯＳＩＳＩＮＤＵＣＥＤＢＹＡＮＴＩＧＥＮＲＥＣＥＰＴＯＲ　ＣＲＯＳＳＬＩＮＫＩＮＧＩＳＢＬＯＣＫＥＤＢＹＡＴ－ＣＥＬＬＳＩＧＮＡＬＴＨＲＯＵＧＨＣＤ４０ＴａｋｅｓｈｉＴｓｕｂａｔａ，ＷｕＪｉｎｇ；ＴａｓｕｋｕＨｏｎｊｏ（Ｄｅｐａ...     

人颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达导致HeLa细胞凋亡

目的　观察诱导表达的颗粒酶B融合蛋白对HeLa细胞形态和生长的作用。方法　用重组PCR法将活性型颗粒酶B基因序列的 5’端连接绿脓杆菌外毒素 (PE)的部分转位肽编码序列。所获融合蛋白基因克隆入pIND诱导表达载体后 ,与辅助质粒pVgRXR共转染HeLa细胞 ,经G4 18和zeocin筛选建系。间接免疫荧光检测蜕皮激素诱导后目的蛋白的表达 ,并通过电镜、TUNEL染色、细胞计数等方法观察细胞的形态和生长速度的变化。结果　建立了可诱导表达人颗粒酶B融合蛋白基因的HeLa细胞系。蜕皮激素诱导后检测到目的蛋白的表达 ,同时观察到细胞出现多核巨细胞的异常形态 ,细胞生长受到抑制。电镜和TUNEL分析表明 ,颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达使部分细胞呈现凋亡的典型特征。结论　颗粒酶B融合蛋白基因的诱导表达导致HeLa细胞凋亡     

水分子在Sn02（110）表面吸附特性的密度泛函计算

根据密度泛函理论,采用广义密度近似,建立了水分子在SnO2（110）面不同吸附位的周期平板模型,研究了水分子在SnO2（110）表面的吸附特性．结果表明：发生在Sn5C吸附位的水分子平行于表面和水分子以H原子向上垂直于表面的两种吸附方式为稳定吸附．对两种稳定吸附方式下电子态密度及电荷转移进行了分析,发现两种吸附方式均使体系费米能向高能量方向移动,同时两种方式下水分子向SnO2表面提供的电子数分别为0．09e和0．08e．提出水分子与CO分子对表面同一吸附点存在着竞争吸附,是湿度影响CO气体传感器电导灵敏度的主要原因．