铁路临平货场迁址方案研究

随着铁路的发展和杭州城市空间结构调整及经济的快速增长,铁路临平货场已不适应发展的要求。从货场的发展定位、与城市规划的协调、交通集疏运,以及地区铁路和市域轨道交通发展等角度,提出临平货场迁址的比选方案,并对将货场调整为市级客运交通枢纽对于实现城市"一主三副六组团"规划蓝图的战略作用进行展望。     

高耸结构的风振反应特点及分析方法

本文首先简介了高耸结构的分类及特点。在此基础上讨论了高耸结构上的风荷载特别是脉动风荷载所引起的风振效应的特点和分析方法,具体阐述了结构分针反应分析的频域法和时域法的特点。分析总结了该类结构的静动力响应特性。     

印度加快汽车工业发展步伐

印度政府和私营企业正在共同努力以确保在全球汽车工业霸主争夺战中处于领先地位。     

人B7.2(CD86)胞外区原核表达及其工程菌发酵培养的实验研究

目的　利用原核系统表达人B7.2 (IgV +C)并对工程菌发酵培养条件进行优化。方法　用聚合酶链反应 (PCR)技术从B7.2cDNA全长中克隆B7.2 (IgV +C) ,将PCR产物克隆入表达载体 pGEX 4T 3从而得到重组体 pGEX 4T 3 /hB7.2 (IgV +C) ,SDS PAGE及Westernblot用于检测目的蛋白的表达 ,同时对目的蛋白诱导表达时间及诱导剂浓度进行优化 ,对重组质粒的遗传稳定性进行鉴定。结果　Westernblot结果显示相应分子质量 5 5kD处有hB7.2 (IgV+C)与GST融合蛋白的高效表达 ,表达量占菌体总蛋白的 3 0 %左右。对工程菌进行发酵培养研究的结果表明 ,所构建的重组质粒在工程菌DH5α中传代稳定 ,未见质粒丢失 ,目的蛋白的表达不受影响 ,且在 3 7℃诱导 5h、IPTG终浓度为 4mmol·L- 1 时其表达量最多。结论　证明了利用原核系统表达人B7.2 (IgV +C)的可行性。     

免疫渗滤法实验中非特异性染色封闭方法的改进

目的 选择理想的非特异性抗原封闭方法以适应基于免疫渗滤法的蛋白芯片制备.方法 以杆状病毒-昆虫表达系统制备的人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白抗原为例,采用脱脂奶粉、小牛血清、牛血清白蛋白及不同组合等5种方法对非特异性抗原进行封闭,检测其在免疫渗滤实验中对消除非特异性染色的效果,寻找最佳封闭非特异性染色的方法.结果 经过多次重复试验,并以PBS代替血清作空白试验,结果显示,目前常用的先固相然后封闭的几种方法,其封闭效果的稳定性和重复性不佳,且空白对照易出现假阳性;同时发现使用脱脂奶粉做封闭剂封闭后,由于奶粉颗粒易堵塞NC膜的孔径,影响NC膜的渗滤速度;使用小牛血清做封闭剂封闭后,由于NC膜对小牛血清的吸附而产生背景,影响结果判读;而采用20g/L BSA先封闭后固相的方法,在实验中得到满意的结果.结论 先封闭后固相的方法,在免疫渗滤实验中对非特异性抗原封闭的效果理想、结果稳定、重复性好,为一种理想的新的封闭方法.     

杭州市“错峰限行”交通需求管理措施实践

为全面科学地评价杭州市"错峰限行"交通需求管理措施的实施效果并总结实施经验,对措施的决策、实施与效果评估等进行研究。首先,介绍各项措施的具体内容和出台背景。然后,阐述决策过程中的考量和组织实施特色,再根据半年来的实时监测和动态评估,分析"错峰限行"措施实施后的市区交通运行状况变化和市民感受。最后指出,由于在决策和实施过程中最大限度地考虑了市民感受,"错峰限行"措施实施后不仅交通拥堵改善效果明显,更得到了大多数市民的支持。     

LT-B转基因烟草植株的建立

目的　构建大肠杆菌热不稳定肠毒素B亚单位 (LT B)基因的植物表达载体 ,并建立LT B转基因烟草植株。方法　用PCR从pMMB6 8扩增LT B编码基因 ,将其克隆于 pUCmT和 pBI12 1载体 ,进而构建植物表达双元载体pBI LTB ,LT B基因由CaMV 35S启动子控制表达 ;将pBI LTB用电穿孔法导入根瘤农杆菌LBA4 4 0 4 ;采用叶盘共培育法经根瘤农杆菌介导转化烟草 ,获得转基因烟草植株 ;用PCR、Southern、Westernblot和ELISA检测转基因植株。结果　经PCR及Southern杂交分析 ,共发现 12株烟草的基因组中有LT B基因整合 ;Westernblot和ELISA分析表明有 9株转基因烟草能有效表达LT B蛋白 ,其表达量为烟草叶片总可溶蛋白的 3.36～ 10 .5 6 μg·g-1TSP。结论　建立的LT B转基因烟草植株可成功表达LT B ,并具有五聚体结构 ,为进一步生产预防婴幼儿大肠杆菌腹泻可食用疫苗及黏膜免疫佐剂奠定了基础。     

PRELIMINARY STUDY OF A NOVEL HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16L1／E6-E7 CHIMERIC RECOMBINANT DNA VACCINE

Objective Preparations of HPV16 L1/E6 and L1/E7 prophylactic and therapeutic DNA vaccines. Methods The nucleotides within HPV16 E6 and E7 genes, which are responsible for viral transforming activity, were mutated by mage primer site-directed mutagenesis method. The correctly mutated E6 and E7 fragments were separately cloned into an eukaryotic expression vector pVAX1, together with HPV16 L1 gene, generating chimeric recombinants plasmids 1MpVAX1-L1E6, 2MpVAX1-L1E6, 1MpVAX1-L1E7, 2MpVAX1-L1E7 and 3MpVAX1-L1E7. CHO cells were transiently transfected with the individual DNA vaccines by calcium phosphate method. Target protein expressions in the extracts of the transfected cell lines were measured by ELISA and immunohistochemistry, with HPV16 L1 and E6 specific monoclonal antibodies. Results ELISA assays showed the P/N ratios in the cell extracts transfected with L1E6 and L1E7 plasmids were more than 2.1. Immunohistochemistry revealed brownish precipitant signal in cytoplasm and nuclei of the transfected cells. Conclusion Successful constructions of prophylactic and therapeutic DNA vaccine plasmids lay solid foundation for future animal experiment and clinical trial.     

HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 16 L1 PROTEIN CAN BE EXPRESSED IN LIVE ATTENUATED SHIGELLA FLEXNERI 5A STRAIN SH42

Cervicalcanceristhesecondmostcommon canceramongwomenworldwide,anditaccountfor thehighestmortalityindevelopingcountries.There areabout600000newcasesdiagnosedanditcauses aboutaquartermillionwomendeathperyear[1]. Highrisktypehumanpapillomavirusinfection (suc…     

沙眼衣原体D型MOMP基因的克隆和序列分析

目的　从D型沙眼衣原体培养物中克隆主要外膜蛋白(MOMP)基因。方法　利用细胞培养法扩增沙眼衣原体后,提取基因组为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增全长MOMP基因,并用酶切、PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。结果　成功扩增了MOMP基因,并插入克隆载体 pUCmT中。结论　MOMP基因的克隆为进一步开展沙眼衣原体的疫苗研究奠定了基础。