ABC-ELISA法实验过程中影响因素的研究

本文介绍了用ABC-ELISA法检测HBsAg,较系统地研究了ABC-ELISA法实验过程中的主要影响因素。结果发现:ABC-ELISA法实验过程中的非特异性显色不仅来自抗生物素的非特异性吸附,而且还来自生物素化抗体的非特异性吸附。本文提出了消除ABC-ELISA法实验过程中非特异性显色的切实可行的方法。     

纸层析发校法检测结核杆菌PCR扩增产物

目的 建立一种新的快速纸层析杂交技术，用于特异性检测带有生物素标记的合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增产物。方法 将特异性捕获探针固定在聚酯砜膜上，扩增产物置膜一端，经毛细作用，带有生物素标记的特异性ＤＮＡ分子固定于反应区，非特异性分子被洗脱，杂交物通过链霉亲和素硷性磷酸酶偶联物及底物（ＢＣＩＰ－ＮＢＴ）显色后判断结果，结果 这一技术允许在２５ｍｉｎ内交将结核杆菌经ＰＣＲ扩增后的ＤＮＡ１０ｐｇ检出，结论     

LDL-C和non-HDL-C对家族性高三酰甘油血症和家族性混合型高脂血症的鉴别诊断价值的比较

目的比较低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和非高密度脂蛋白胆固醇(non-HDL-C)在家族性高三酰甘油血症(FHTG)和家族性混合型高脂血症(FCHL)鉴别诊断中的应用价值。方法选取9个FHTG家系共94人、24个FCHL家系共94人,根据血脂异常情况将2个家系再分为受累组和未受累组;另设10个对照家系(共57人)。比较各家系血清三酰甘油(TAG)、总胆固醇(TC)、HDL-C、LDL-C、non-HDL-C等血脂指标水平;FHTG家系和FCHL家系按TAG水平分层后,分析non-HDL-C和LDL-C的相关性;最后用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析比较nonHDL-C和LDL-C用于FHTG家系和FCHL家系鉴别诊断的cut-off值。结果 FHTG家系受累组TAG、TC、nonHDL-C水平均高于未受累组和对照组(P<0.01或P<0.05);FCHL家系受累组TAG、TC、HDL-C、LDL-C、nonHDL-C水平均高于未受累组和对照组(P<0.01或P<0.05);FHTG家系受累组TAG水平显著高于FCHL家系受累组(P<0.01),而TC、HDL-C、LDL-C、non-HDL-C水平低于FCHL家系(P<0.01或P<0.05)。FHTG家系和FCHL家系内non-HDL-C和LDL-C均呈正相关,但随TAG水平升高其相关性均呈下降趋势;LDL-C和non-HDL-C用于FHTG家系和FCHL家系鉴别诊断的最佳cut-off值分别为3.575、4.525mmol/L。结论除常规血脂指标外,non-HDL-C可能是鉴别诊断FHTG家系和FCHL家系的新指标;其鉴别诊断价值可能优于LDL-C。     

涎腺肿瘤C—erbB—2癌基因的表达分析

本文应用链霉新合素－生物素－过氧化物酶技术，Ｐ１８５的特殊抗体，旨在检测４０例良恶性涎腺肿瘤标本中是否有Ｐ１８５的过量表达，以及探讨其与临床病理指标之间是否存在着相关关系。     

TNFα增加血管内皮细胞通透性与其激活P38 MAPK和黏附因子重新分布有关

目的　研究肿瘤坏死因子 (TNFα)对血管内皮细胞通透性的影响及其机理。方法　采用生物素标记白蛋白的酶联免疫吸附法测定人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)单细胞层的通透性 ;免疫荧光、激光共聚焦显微镜和蛋白免疫印迹等方法测定血管内皮黏附因子 (VEcadherin)的分布 ;功能性激酶试验测定有丝分裂原激活蛋白激酶 (MAPK)的活性 ,SB2 0 2 190 (P38抑制剂 )与PD980 5 9(ERK抑制剂 )复合物用于其活性的抑制实验。结果　与对照组比较 ,TNFα明显增加血管内皮细胞的通透性、降低细胞膜VEcadherin的表达 ,诱导P38和ERKMAPK的活性 (P <0 .0 5 )。有趣的是SB2 0 2 190明显降低了TNFα对血管内皮通透性和细胞膜VEcadherin表达的作用 ,而PD980 5 9不能阻止TNFα产生的上述作用。结论　TNFα增加血管内皮细胞的通透性是通过激活P38MAPK信号系统进而抑制VEcadherin在细胞膜的表达和重新分布。     

人类OPRM1-EXON1的克隆与探针的制备

目的　克隆、测序人类 OPRM1- EXON1,并用非同位素 生物素标记法对该基因进行标记、制备探针,用于OPRM1- EXON1的表达及功能研究。方法　通过PCR法扩增目的基因片段,并将其连接到pGEM- T载体上,转入感受态细胞中进行重组并克隆,经酶切和基因测序进行鉴定,用非同位素 生物素标记法进行探针的标记与制备。结果　经过PCR扩增的目的基因片段大小(2.2 kb)与理论上片段大小一致,经过测序证实其序列与 NCBI提供的序列相同,用此片段成功的制备了用于研究阿片受体基因的探针。结论　从基因组中成功克隆了人类 OPRM1- EX ON1,并制备了探针,为深入研究吗啡依赖相关基因及基因表达创造了必要的条件。     

嗜铬细胞瘤组织中内源性哇巴因表达的意义

目的　探讨内源性哇巴因 (EO)在肾上腺嗜铬细胞瘤组织中表达的意义。方法　采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 过氧化酶连接法 (SP法 )检测EO在嗜铬细胞瘤组织中的表达。结果　血压与EO在嗜铬细胞瘤组织中的表达呈现相关关系。伴有血压升高的嗜铬细胞瘤患者 ,其瘤组织中EO呈弥漫性强阳性表达 ;而EO在不伴有血压升高的嗜铬细胞瘤患者则呈现阴性表达。结论　EO与嗜铬细胞瘤所致的高血压关系密切 ,为其进一步研究提供了有价值的形态学依据。     

SELEX筛选骨肉瘤HER2适配体方法的建立

目的应用SELEX(system evolution of ligands by exponential enrichment)技术筛选与HER2特异性结合的寡聚核酸适配体(aptamer)。方法体外合成了长度为78个碱基并含有35个随机寡核苷酸的ssDNA文库,通过生物素-链亲和素磁珠系统分离法制备次级ssDNA文库,且经以微孔为介质的SELEX正反筛法获得了与HER2特异性结合的DNA适配体;同时利用生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA与靶蛋白HER2的亲和力,将亲和力最高的适配体群进行克隆、测序。最后利用生物学软件DNAMAN对适配体群进行了一级结构和二级结构的分析,同时将亲和性最高的适配体做了进一步的特异性的检验。结果经过12轮的筛选,获得了与HER2蛋白具有极高亲和力的适配体9号,亲和力从初始的0.18上升至0.86,提高了约5倍。特异性结果显示,9号适配体只与HER2具有较高的特异性。结论经过多轮的筛选,成功获得了特异性识别骨肉瘤HER2蛋白的单链DNA适配体,为骨肉瘤的诊断和治疗奠定了基础。     

黄芪总皂苷对瘦素诱导的HSC增殖和TIMP-1上调的影响

目的观察黄芪总皂苷对瘦素诱导的肝星状细胞(HSC)增殖及组织抑制基质金属蛋白酶-1(TIMP-1)分泌的影响。方法培养HSC,分为溶媒组、溶媒瘦素组和黄芪总皂苷组。磺酰罗丹明B法检测HSC增殖,利用2,7-二氯二氢荧光素二乙酯作为探针检测HSC中的活性氧水平,酶联免疫吸附实验测定HSC培养液中TIMP-1含量。结果黄芪总皂苷50、100、200μg/mL与溶媒瘦素组相比,明显抑制瘦素诱导的HSC增殖(P<0.01),抑制率分别达29.1%、66.7%和86.1%,同时能够抑制瘦素诱导HSC的活性氧产生(P<0.05)以及TIMP-1的分泌(P<0.05)。结论黄芪总皂苷可能通过下调瘦素诱导的氧化应激水平,从而抑制HSC增殖以及TIMP-1的分泌。     

用PCR技术标记双链DNA探针

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果。ＰＣＲ标记法具有经济、快速、简易和标记量大等优点。实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的质量、ｄＴＴＰ和Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。     

Ac-SDKP对炎性因子MRP-14(S100A9)的调节在硅肺大鼠纤维化病变中的作用

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否通过抑制炎性因子髓系相关蛋白14(myeloid-related protein14, MRP-14)以及胶原蛋白的表达,从而阻抑硅肺大鼠纤维化病变中硅结节的形成和胶原蛋白的沉积。方法采用一次性支气管灌注二氧化硅(SiO_2)粉尘的方法制备大鼠硅肺动物模型,60只SPF级健康成年大鼠随机分为对照4周组、对照8周组、硅肺模型4周组、硅肺模型8周组、Ac-SDKP预防治疗组和Ac-SDKP抗纤维化治疗组,每组10只。免疫组织化学技术检测MRP-14蛋白在硅肺模型组织内的定位表达;Western blot法检测MRP-14以及胶原蛋白在硅肺模型组织内的表达。结果与相应的对照组相比,硅肺模型组大鼠硅肺纤维化区域MRP-14和胶原蛋白的表达增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。与硅肺模型8周组相比,给予Ac-SDKP干预后MRP-14和胶原蛋白表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Ac-SDKP可通过抑制炎性因子MRP-14的表达而发挥其抗硅肺纤维化的作用。     

生长抑素2型受体在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与凋亡的相关性

目的检测卵巢癌组织中的细胞凋亡情况,探讨细胞凋亡与生长抑素2型受体(SSTR2)表达的相关性。方法采用链霉素亲生物素-过氧化物酶法(S-P法)进行免疫组织化学染色,SSTR2阳性染色为棕黄色颗粒,定位于细胞膜及细胞浆;采用TUNEL试剂盒检测凋亡细胞,胞核中有棕黄色颗粒散在分布者为阳性细胞。均根据阳性细胞的比例判定结果。结果经统计学处理表明,SSTR2的表达与卵巢肿瘤的病理类型、组织学分级、有无腹水等有显著相关性(P<0.05),上皮性卵巢癌组织中细胞凋亡和SSTR2表达呈正相关(r=0.895,P<0.05)。结论卵巢癌组织细胞中SSTR2的表达可能参与细胞凋亡的调节机制,在卵巢上皮性肿瘤恶变的过程中发挥作用,并与恶性程度关系密切,有可能成为卵巢癌预后评估的参考指标。     

没食子酰基金丝桃甙的抗氧化性及其构效关系研究

目的　通过对没食子酰基金丝桃甙 (Gq)清除氧自由基作用的测定 ,探讨Gq的抗氧化性并对其抗氧化机理与结构之间的关系进行探讨。方法　分别采用黄嘌呤 黄嘌呤氧化酶体系及Fenton反应体系 ,测定Gq对超氧阴离子自由基 (SAFR)和羟基自由基 (HFR)的清除作用 ,得出清除率与浓度之间的相关关系 ,求出IC50 值 ,以表示其抗氧化能力。对比分析Gq及天然抗氧剂槲皮素和芦丁的化学结构 ,探讨抗氧化机理与结构之间的构效关系。 结果　Gq对氧自由基具有明显的清除活性 ,清除SAFR和HFR的IC50 值分别为 4 0 .8μmol·L-1和 33.5 μmol·L-1,远小于阳性对照物槲皮素 (分别为 114 .0 μmol·L-1和 10 0 .8μmol·L-1)及芦丁 (15 2 .0 μmol·L-1和 91.4 μmol·L-1)。结论　Gq具有明显的抗氧化性 ,其抗氧化活性与其分子结构中多元酚结构有关 ,但其抗氧化机理不同于小分子的没食子酰类衍生物     

CB和MMP-9在上皮性卵巢肿瘤中的表达及相关性研究

目的检测组织蛋白酶B(cathepsin B,CB)与基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在人类上皮性卵巢肿瘤中的表达,探讨两者与卵巢癌细胞的分化增殖、侵袭转移的关系。方法采用链霉素亲和生物素-过氧化物酶法(SP)进行免疫组织化学染色,用CB抗体、MMP-9抗体标记上皮性卵巢肿瘤组织标本,综合染色强度和阳性细胞占总体细胞数的百分比进行染色判定,结合有关病理特征进行分析。结果经统计学分析,CB、MMP-9在上皮性卵巢癌中的表达与年龄、病理类型无相关性(P>0.05),而与卵巢癌的临床分期、有无转移及腹水呈正相关(P<0.05);CB与卵巢癌的组织学分级呈正相关(P<0.05);上皮性卵巢癌中CB和MMP-9表达呈正相关(r=0.652,P<0.05)。结论CB、MMP-9与卵巢癌的恶性生物学行为密切相关,两者在其侵袭转移过程中发挥了重要的协同作用。     

用神经网络和分光光度法测定废水中的多元素

为了快速测定工业废水中吸收光谱重叠的Cd与Co和Cr与Fe 2组元素,采用4-（2-吡啶偶氮）-间苯二酚（PAR）-Cd-Co和二苯碳酰二肼-Cr-Fe显色体系,采用分光光度法测定吸光度,用训练过的人工神经网络进行数据处理,建立了不经分离而能同时测定Cd与Co,Cr与Fe含量的方法.用此方法测定合成样品,Cd,Co,Cr和Fe的回收率分别为101%,98%,102%和98%,平均相对误差分别为1.61%,-0.23%,0.00%和-0.08%.     

猪骨胶原蛋白降压成分的提取与生物活性的研究

目的　从猪骨胶原蛋白中提取小肽做为血管紧张素转换酶抑制剂。方法　猪骨胶原蛋白经胰蛋白酶水解 ,阳离子交换树脂层析 ,Sephadex G2 5凝胶过滤 ,反相高效液相层析 (HPLC) ,最终得到一种 9肽 ,其氨基酸组成 :Ile,Ser,His,Gly ,Ala,Pro ,Tyr,Leu ,Asp。结果　以马尿酰 甘氨酰 甘氨酸 (HGG)为底物 ,对从猪肺中提取的血管紧张素转换酶 (ACE)有明显的抑制作用 ,I50为 2 .6× 1 0 - 2 mmol/L。将含此肽 0 .0 1 %的混合物做静脉注射试验 ,对肾性高血压大鼠和自发性高血压大白鼠均有明显降压作用 ;口服给药 1 5d ,对自发性高血压有一定的降压作用。对离体豚鼠回肠平滑肌有收缩作用。结论　胶原蛋白酶解物 9肽的抗高血压效果 ,可能是通过对血管紧张素转换酶的抑制作用。     

携带NT4-AcSDKP融合基因重组腺相关病毒载体的构建

目的构建携带NT4-AcSDKP融合基因的重组腺相关病毒,为探讨AcSDKP(乙酰化-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸)的多样化功能提供基础。方法以质粒载体pGEM-T Easy/NT4为模板,PCR技术获得NT4-AcSDKP基因片段,插入腺相关病毒载体穿梭质粒pSSHG-CMV,构建重组质粒pSSCMV-NT4-AcSDKP。用腺病毒全基因组质粒pFG140、辅助质粒pAAV/Ad和已构建的重组质粒,三质粒磷酸钙共沉淀法转染80%融合的293细胞,包装rAAV-NT4-AcSDKP,RT-PCR方法测定重组腺相关病毒滴度。结果成功合成NT4-AcSDKP基因,构建重组质粒pSSCMV-NT4-AcSDKP,包装获得滴度为3.40×1010 copies/mL的重组腺相关病毒。结论成功获得表达AcSDKP重组腺相关病毒,为抗炎、抗纤维化、器官修复等方面的进一步研究奠定了基础。     

九牛造根中苯丙素类成分的分离及鉴定

目的研究九牛造根中的苯丙素类化学成分。方法采用硅胶柱层析和葡聚糖凝胶柱层析分离纯化技术,通过理化性质和波谱特征分离并鉴定化合物。结果分离并鉴定了3个苯丙素类化合物:3-甲氧基-4-羟基反式苯丙烯酸正十六醇酯(Ⅰ),短叶苏木酚酸乙酯(Ⅱ),3′(S)-当归酰氧基-4′(S)-千里光酰氧基凯林内酯(Ⅲ)。结论以上化合物均为首次从该植物中得到,其中化合物Ⅲ为首次从大戟科中分离得到。     

中青年缺血性脑卒中患者TyG指数与残余胆固醇的关联研究

目的 探讨中青年缺血性脑卒中患者TyG指数与残余胆固醇间的关联。方法 选取2021年4月—2022年5月在我科住院的268例中青年缺血性脑卒中患者,并以TyG指数中位数值为界限将研究对象分为低TyG指数组和高TyG指数组。比较两组患者一般临床资料与代谢危险因素指标间的差异,运用Spearman相关分析明确代谢相关危险因素与TyG指数的相关性,并利用Logistic回归分析探讨残余胆固醇水平对TyG指数的影响。结果 两组患者的年龄、男性占比、吸烟史、饮酒史、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比较差异无统计学意义(P<0.05);体质指数(BMI)、高血压病病史、2型糖尿病病史、收缩压、舒张压、空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、残余胆固醇、血尿酸、TyG指数组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,BMI、收缩压、舒张压、空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油、LDL-C、残余胆固醇、血尿酸水平与TyG指数呈正相关(P均<0.05);HDL-C水平与TyG指数呈负相关(P=0.016)。单因素Logistic回归分析...     

芪丹通脉片对急性缺血再灌注大鼠心肌信号转导系统PI3K/Akt和Erk1/2的影响

目的观察中药芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积、细胞凋亡和细胞信号转导系统中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝(苏)氨酸激酶(Akt)和细胞外信号调节激酶(Erk1/2)的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)和芪丹通脉片预处理组。生理盐水或芪丹通脉片灌胃7 d后,大鼠麻醉开胸,结扎冠状动脉前降支40 min,再灌注4 h。伊文氏兰和TTC染色测定心肌梗死范围,计算梗死面积(IS)与缺血区面积(AAR)的比值(%,IS/AAR);TUNEL方法定性和定量检测心肌细胞凋亡指数;Westernblot测定信号蛋白的表达。结果芪丹通脉片组的心肌梗死范围明显小于模型组[(28.8±8.4)%vs.(49.1±10.3)%,P<0.01];其心肌细胞凋亡指数亦显著低于模型组[(11.6±2.3)%vs.(20.3±4.5)%,P<0.01];而其Akt和Erk1/2的磷酸化表达水平增加,与模型组比较分别增加了2.5倍和1.9倍(P<0.01,P<0.05)。结论芪丹通脉片能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞损伤,并影响生存信号通路PI3K/Akt和Erk1/2的活化水平。