抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体/人p53四价功能域融合基因的构建及空间构象分析

目的　构建抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)重链可变区 (VH)单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因 ,并进行空间构象分析。方法　选用人IgG3上游铰链区作为抗体和人p5 3四价功能域之间连接的linker。利用回归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p5 3四价功能域融合基因 ,并在融合基因 5’端和 3’端引入SalⅠ与HindⅢ酶切位点 ,将融合基因克隆入 pUC1 9载体中构建pUC1 9/IgG3 /p5 3克隆载体。将抗人γ SmVH 单域抗体克隆入 pUC1 9/IgG3 /p5 3载体中 ,构建抗人γ SmVH 单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因。经酶切鉴定及序列测定证实后 ,利用计算机软件进行空间构象分析。结果　获得了抗人γ SmVH 单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因 ,基因全长 5 2 8bp ,可编码 1 76个氨基酸 ,与已发表的抗人γ SmVH 单域抗体、人IgG3上游铰链区和人p5 3四价功能域基因cDNA序列一致。计算机软件分析结果显示 ,融合基因表达产物可自动装配成四聚体抗体 ,并具有四条长的、柔性好的多肽 ,可确保每个抗体空间构象的独立性。结论　构建成功四价抗人γ SmVH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。     

大鼠腰椎小关节肽能神经纤维的分布及其意义

慢性下腰痛是最常见的疾病症状之一。早在 1911年Ｇｏｌｄｔｈｗａｉｔ就已认识到腰椎小关节疾患可以引起腰背部疼痛。由于腰椎间盘突出症的诊断及手术治疗的开展 ,并取得较好疗效 ,因此小关节疾患一直未能得到应有的重视。近年来 ,关于腰椎小关节的报道逐渐增多 ,但大多为大体解剖及临床应用的研究 ,而关于分布于腰椎小关节上神经纤维性质的报道很少 ,且其结果不一。本研究应用免疫组化Ｓ Ｐ法 ,对大鼠腰椎小关节上ＳＰ能和ＣＧＲＰ能神经纤维的分布做了观察 ,以探讨腰椎小关节在腰痛中的作用。1　材料与方法1 1　材料　雄性ＳＤ大鼠 2 0只…     

重组人单链白细胞介素12融合基因(rhscIL-12)的构建和真核表达

克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法　从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1 2 p40和 p35亚单位编码序列的 c DNA,运用重组 PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头 ( Gly4 Ser) 3 DNA序列进行体外基因重组 ,构建 rhsc IL- 1 2融合基因 ,将其插入 pc DNA3.1 ( + )真核表达载体 ,经脂质体转染 COS7细胞进行表达 ,Western blot进行分析。结果　所克隆的 h IL- 1 2 p40、p35c DNA序列和构建的 rhsc IL - 1 2融合基因 DNA序列均经测序得以证实 ,融合基因可在 COS7中表达其产物 rhsc IL- 1 2融合蛋白 ,其分子量为 70 KD,可与鼠抗人 IL - 1 2 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论　本研究结果为进一步探讨 rhsc IL- 1 2融合蛋白的生物学活性和特性奠定了基础 ,也为 rhsc IL- 1 2融合基因在原核细胞中的表达提供了可能性     

母体用药及母体细胞色素P450遗传多态性与新生儿罹患先天性心脏病的相关性分析

目的 研究母亲怀孕早期用药及细胞色素P450 (CYP450)遗传多态性与后代先天性心脏病(CHD)的关联性。方法 选取127名CHD胎儿产妇为观察组,132名非CHD胎儿产妇为对照组。调查双方特征及用药史,检测CYP450多态性。用Logistic回归分析产妇药物使用与CYP450基因变异与后代CHD风险关联。结果 观察组产妇使用促排卵药、降压药、抗生素、抗抑郁药、预防流产药、中药等后代CHD风险高于对照组(P<0.05)。rs1065852基因型中A/T和T/T及rs16947基因型中C/G和G/G相较各自基因型均增加后代CHD风险。母体CYP450基因rs1065852风险基因型(A/T或T/T)及怀孕早期用药可增加后代CHDs风险(P<0.05);CYP450基因rs16947风险基因型(C/G或G/G)同样会增加后代CHDs风险(P<0.05)。结论 母体怀孕早期使用药物可能与后代患CHD有关,CYP450的rs1065852和rs16947位点与子代先天性心脏病风险显著相关。     

陆路交通建设下传统村落空间基因多样性研究

基于陆路交通建设背景,在铁路公路交通网络的基础上分析通道县传统村落可达性空间布局,并进一步以6个侗族传统村落为样本,从“空间基因”视角下识别提取坪坦河流域侗族传统村落空间基因,选取村落空间基因的丰富度、信息度、均匀度和优势度指数展开多样性研究,解析不同村落以及不同类型空间基因的多样性指标差异,结合高速铁路交通建设情况探讨外来空间基因对传统村落的影响,力图从有机整体角度克服传统村落研究的狭隘性。研究结果表明：1)通道县侗族传统村落的可达性呈现为“核心—边缘”圈层式扩展空间布局,其可达性系数与交通路网完备程度有着紧密的联系。2)空间基因多样性指数水平可揭示传统村落目前的保护发展状态,外来文化的影响或者自组织的现代化建设会导致本土空间基因的优势性降低或消亡。3)传统村落交通可达性与空间基因多样性显著相关,结合实际发现陆路交通建设在给传统村落带来的不仅是经济发展、出行便利的同时,还带来了本土基因属性变异、外来基因的同质化入侵。研究成果有助于为交通建设及区域村落空间规划发展提供理论基础与科学参考,为优化传统村落宜居环境拓展研究思路。     

长链非编码RNA LINC00963在喉鳞状细胞癌中的表达及其对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响

目的检测基因间长链非编码RNA 00963(LINC00963)在喉鳞状细胞癌组织及喉癌细胞Hep-2中的表达及其对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响。方法聚合酶链式反应和免疫组化检测喉鳞状细胞癌组织及Hep-2细胞中LINC00963的表达水平;CCK-8及流式细胞术体外水平检测沉默LINC00963表达对细胞增殖及细胞凋亡的影响;荷瘤裸鼠实验检测LINC00963对肿瘤生长的影响;Ki-67及TUNEL染色体内水平检测LINC00963对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响。结果 41例喉鳞状细胞癌组织中LINC00963的表达水平高于癌旁组织。LINC00963在Hep-2细胞中的表达也明显高于永生化鼻咽上皮NP-69细胞。沉默Hep-2细胞中LINC00963的表达后,细胞增殖速度下降,凋亡细胞比例增高(P<0.05)。此外,与LINC00963 NC组相比,LINC00963 shRNA组细胞荷瘤裸鼠肿瘤生长明显受到抑制、Ki-67阳性细胞比例降低、TUNEL阳性细胞比例增高(P<0.05)。结论 LINC00963在喉鳞状细胞癌组织及细胞中异常高表达,并可在体内及体外水平促进Hep-2细胞增殖、抑制细胞凋亡。     

21基因复发风险评分对早期乳腺癌术后治疗决策的影响

目的探讨21基因复发风险评分(recurrence score, RS)对早期激素受体阳性、淋巴结阴性乳腺癌术后辅助治疗的决策导向作用。方法收集自2013年6月至2016年12月在西安交通大学第一附属医院行手术治疗,且术后行21基因检测评分的早期激素受体阳性、淋巴结阴性的乳腺癌患者110例,按21基因复发风险评分标准分为低危组、中危组和高危组,比较其行21基因检测前后治疗决策的改变。结果在行21基因复发风险评分前,共有61例(55%)患者推荐使用辅助化疗+辅助内分泌治疗。行21基因复发风险评分后,32例(29%)患者改为行单纯辅助内分泌治疗(McNemar's test,P<0.001)。其中低危组和中危组行21基因复发风险评分后,分别有24例(39%)和8例(20%)患者由辅助化疗联合内分泌治疗改为仅行术后辅助内分泌治疗(McNemar's test,P<0.001;P=0.008)。结论对于早期激素受体阳性、淋巴结阴性乳腺癌患者,行21基因复发风险评分可以显著避免低危组和中危组患者的过度术后辅助化疗,降低术后化疗率,减少患者化疗副反应。     

乳腺癌BRCA1相互作用蛋白1基因功能区单核苷酸多态性与习惯性流产的相关性

目的探讨乳腺癌易感基因相互作用蛋白1(BRCA1 interacting protein C-terminal helicase 1, BRIP1)基因功能区4个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)位点与习惯性流产的相关性。方法严格按照诊断标准,采集无关习惯性流产患者291例(病例组)、健康对照组281例(对照组)外周静脉血,提取基因组DNA,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对4个SNPs位点进行分型;采用SPSS 20.0及Haploview4.2软件分析位点基因型、等位基因及单倍型频率分布及两组间的差异。结果 BRIP1基因外显子18 rs4986764位点病例组CC基因型频率明显高于对照组(χ~2=6.469,P=0.039);病例组C等位基因频率明显高于对照组(χ~2=4.893,P=0.027,OR=1.330,95%CI=1.033～1.714)。连锁不平衡分析表明,由rs11079454-rs4986763-rs494986764构成的单倍型高度连锁(D'>0.9,r~(2 )>0.8),对照组T-T-T单倍型频率明显高于病例组(χ~2=8.043,P=0.005,OR=0.565,95%CI=0.381～0.840);病例组T-C-C单倍型频率明显高于对照组(χ~2=4.392,P=0.036,OR=1.540,95%CI=1.027～2.310)。结论 BRIP1基因第18外显子rs4986764位点可能与习惯性流产有关,携带有C等位基因的个体可能更容易习惯性流产。     

陕西汉族人群备解素因子B的遗传多态性研究

本文用琼脂糖凝胶高压电泳及免疫固定技术检测了326例陕西汉族人群的备解素因子B(简称Bf)的遗传多态性。在该人群中检出了BfSS、BfFS、BfFF及BfSS 07 4种Bf表型,他们的频率分别为0.7883,0.1687,0.0245及0.01 85。Bf的3个等位基因Bf~*F,Bf~*S和Bf~*S07频率分别为0.8819,0.1089及0.0092。这一结果与大部分已检测的中国汉族人群的Bf分布特点相似,而与白种人和黑种人的Bf多态性分布有所不同。     

Desmin基因exon6 A360P错义突变与克山病的关系

目的探讨Desmin基因exon6的A360P错义突变与克山病心肌损伤发生发展的关系。方法采用临床流行病学方法调查,随机抽取年龄、性别相匹配的慢型和潜在型克山病患者、病区正常组和非病区正常组各30例血样,提取基因组DNA,采用PCR扩增、酶切、电泳等技术比较各组Desmin基因片断酶切位点的变化。结果慢型和潜在型克山病患者与病区正常组未检出Desmin基因exon6的A360P错义突变位点。结论Desmin基因exon6的A360P错义突变可能不是克山病心肌损伤的易感基因突变。