重组人单链白细胞介素12融合基因(rhscIL-12)的构建和真核表达

克隆人 IL - 1 2 ( h IL - 1 2 ) p40和 p35亚单位 c DNA,构建人单链 IL- 1 2 ( rhsc IL- 1 2 )融合基因 ,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法　从经 PDBu刺激的 EBV转化的人 B淋巴母细胞株 NC37中提取 m RNA,经 RT- PCR分别获得 h IL- 1 2 p40和 p35亚单位编码序列的 c DNA,运用重组 PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头 ( Gly4 Ser) 3 DNA序列进行体外基因重组 ,构建 rhsc IL- 1 2融合基因 ,将其插入 pc DNA3.1 ( + )真核表达载体 ,经脂质体转染 COS7细胞进行表达 ,Western blot进行分析。结果　所克隆的 h IL- 1 2 p40、p35c DNA序列和构建的 rhsc IL - 1 2融合基因 DNA序列均经测序得以证实 ,融合基因可在 COS7中表达其产物 rhsc IL- 1 2融合蛋白 ,其分子量为 70 KD,可与鼠抗人 IL - 1 2 p40 /p70单克隆抗体特异性结合。结论　本研究结果为进一步探讨 rhsc IL- 1 2融合蛋白的生物学活性和特性奠定了基础 ,也为 rhsc IL- 1 2融合基因在原核细胞中的表达提供了可能性     

新生大鼠脑白质损害时神经胶质细胞凋亡与Fas、caspase-3蛋白的表达变化

目的探讨Fas、caspase-3在新生大鼠脑白质损害时神经胶质细胞凋亡中的作用。方法实验组和对照组各45只大鼠分别于缺氧缺血后30 min、1 h、4 h、12 h、1 d、3 d、7 d、14 d及21 d处死,免疫组化(SP)法检测Fas、caspase-3蛋白表达,TUNEL法测定细胞凋亡。结果新生大鼠脑白质损害时,细胞凋亡指数在缺氧缺血后4 h开始显著增加,3 d达到高峰(P<0.05)。对照组未检测到Fas,实验组Fas蛋白在缺氧缺血后30 min开始出现,1 h增加,12 h达高峰,并持续至3 d(P<0.05)。实验组caspase-3蛋白表达上调,于缺氧缺血后1 d达到高峰,与对照组相比在1 h、4 h、12 h、1 d、3 d、7 d有统计学意义(P<0.05)。结论新生大鼠脑白质损害时,Fas、caspase-3表达及凋亡指数显著增加,并有明显时序性,提示Fas途径激活caspase-3后引起的细胞凋亡可能是新生大鼠脑白质损害的发病机制之一。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞内皮微粒释放并促进细胞凋亡

目的 探讨高糖对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)内皮微粒释放和细胞凋亡的影响.方法 用不同浓度的葡萄糖(5.5mmol/L、16.7mmol/L和33.3mmol/L)分别作用于培养成功的HUVEC 0、12、24、48、72h,设立正常糖浓度组(5.5mmol/L葡萄糖)和高渗对照组(27.8mmol/L甘露醇)作为对照.应用MTT比色法检测细胞的生存率;采用流式细胞仪分别检测HUVEC内皮微粒的释放水平以及细胞凋亡率.结果 ①MTT检测发现,33.3mmol/L葡萄糖培养12h时HUVEC的细胞数比为93%,24h时为78%,48h时为51%,72h时为40%;与0h组相比,12h组细胞数比下降但无统计学意义(P>0.05);与12h相比,24h组、48h组和72h组细胞数比显著下降,且呈时间依赖性减低(P均<0.05).②设5.5mmol/L正常糖浓度组培养48h时的HUVEC细胞数比为100%,则高渗对照组HUVEC细胞数比为98%,与正常糖浓度对照组比较无统计学差异(P>0.05);16.7mmol/L葡萄糖组和33.3mmol/L葡萄糖组的细胞数比分别为79%和51%,均明显低于正常糖浓度组(P均<0.05),且前两组相比亦存在统计学差异(P<0.05).③33.3mmol/L葡萄糖组作用12h时的HUVEC内皮微粒生成量较正常糖浓度对照组明显增加(P<0.05),24、48、72h时增加更为显著,且呈现时间依赖性(P<0.01);与正常糖浓度对照组相比,高渗对照组12、24、48、72h时其内皮微粒释放水平无统计学差异(P>0.05);④高糖诱导的内皮微粒释放水平与细胞凋亡率呈正相关(r=0.659, P<0.05).结论 高糖刺激诱导人脐静脉内皮细胞内皮微粒释放,促进细胞凋亡.     

反义寡核苷酸转染A375细胞实验条件的优化

目的研究不同的转染条件下,Survivin反义寡核苷酸(ASODN)对体外培养的人恶性黑色素瘤细胞A375生长的影响。方法通过对ASODN进行硫代修饰、脂质体运转及培养条件的改变,用倒置显微镜、台盼蓝计数观察Survivin ASODN对A375细胞增殖的抑制作用。结果硫代修饰ASODN经脂质体包裹对细胞生长抑制作用明显强于未经脂质体包裹组(P<0.01);②细胞培养6 h贴壁后进行转染对细胞的生长抑制率明显高于24 h后进行转染(P<0.05);③转染期间(4 h)无血清存在组与相应对照组比较差异有显著性意义(P<0.01);④ASODN转染后12-72 h,对细胞的抑制效应逐渐升高,72 h达顶峰,之后开始回落;⑤与混杂组(SODN)及错配组(MODN)相比,反义组在各个浓度对细胞生长抑制作用最明显,各浓度组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论许多因素影响ASODN的转运,不同的实验应选择不同的实验优化条件。     

重组人单链白细胞介素12融合基因(rhscIL一12)的构建和真核表达

目的克隆人IL-12(hIL-12)p40和p35亚单位cDNA,构建人单链IL-12(rhscIL-12)融合基因,并在哺乳动物细胞中进行表达。方法从经PDBu刺激的EBV转化的人B淋巴母细胞株NC37中提取mRNA,经RT-PCR分别获得hIL-12p40和p35亚单位编码序列的cDNA,运用重组PCR技术将两段基因通过一疏水性多肽接头(Gly4Ser)3DNA序列进行体外基因重组,构建rhscIL-12融合基因,将其插入pcDNA3.1(+)真核表达载体,经脂质体转染COS7细胞进行表达,Westernb1ot进行分析。结果所克隆的hIL-12p40、p35cDNA序列和构建的rhscIL-12融合基因DNA序列均经测序得以证实,融合基因可在COS7中表达其产物rhscIL-12融合蛋白,其分子量为70KD,可与鼠抗人IL-12p40/p70单克隆抗体特异性结合。结论本研究结果为进一步探讨rhscIL-12融合蛋白的生物学活性和特性奠定了基础,也为rhscIL-12融合基因在原核细胞中的表达提供了可能性。     

急性砷染毒的L-02细胞的基因芯片分析

目的　用基因芯片分析急性砷染毒时人正常肝细胞 (L 0 2细胞 )基因表达谱的变化。方法　亚砷酸钠染毒L 0 2细胞 2、15、2 4h与未染毒的L 0 2细胞作表达谱基因芯片杂交。结果　L 0 2细胞用砷剂染毒后不同时间基因表达谱不同。hCYR6 1基因在细胞染毒 2h后就表达增加 ,而在 15h和 2 4h后均不再升高 ;在细胞染毒后的不同时段 ,细胞金属硫蛋白Ⅳ及金属硫蛋白Ⅲ同源基因的表达均显著增加 ;热休克蛋白 86基因在细胞染毒 2h未增加 ,在 15h和2 4h表达均增加。结论　细胞接触砷毒后进入应激状态 ,合成最必需的与解毒功能相关的蛋白 ,而抑制暂时非必需蛋白的合成     

白细胞介素2诱生和检测的实验条件分析

本文对人外周血单个核细胞(PBMC)诱生白细胞介素2(IL-2)及用ConA 激活的小鼠脾细胞检测IL-2活性过程中的几个实验条件进行了摸索,发现1×10~6 PBMC/ml 经10ug ConA/ml 刺激48h 为诱生IL-2的最佳条件,检测IL-2活性的最佳条件是:2.5×10~4每孔检测细胞/0.1ml/与等量样品共同培养24h.作者认为,小鼠脾细胞经10ug ConA/ml 剌激48h 后.大部分转化为淋巴母细胞,适用于IL-2活性的检测,并具有一定的特异性和重复性。     

多属性决策中属性权重的无偏好赋权方法

针对具有条件属性和决策属性的多属性决策系统在融合主观权重与客观权重时具有人为偏好的缺陷,为实现客观权重与主观权重的无偏好融合,用粗集理论中的属性重要性原理确定各属性的客观权重,再用MATLAB中细胞数组的基本特征和多维空间距离的概念,建立了基于空间距离的二次规划数学模型,确定无人为偏好的主客观权重融合方案.用对流感病人诊断过程的知识决策表说明了本方法的可行性.     

增强型绿色荧光蛋白标记的Hela细胞株的建立

目的构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的Hela细胞系。方法PCR和DNA测序鉴定pEGFP-C1真核表达质粒,采用Qiagen tip 500进行pEGFP-C1真核表达质粒DNA的提取和纯化;cellfectin转染Hela细胞,G418筛选,有限稀释法单克隆培养,荧光显微镜进行荧光检测EGFP的表达,采用激光共聚焦显微镜观测器检测荧光特性。结果PCR和DNA测序证实pEGFP质粒结构正确;在倒置荧光显微镜下,转染24h后,部分Hela细胞可见绿色荧光,转染72h时,大约80%Hela细胞内均可见绿色荧光。加入含G418的选择性培养基进行选择性培养,选择荧光较强的Hela细胞经有限稀释,持续筛选及克隆化培养,获得稳定表达绿色荧光的Hela细胞克隆,扩大培养并传至10代以上,将此细胞株命名为Hela-EGFP。激光共聚焦显微镜观察发现:在蓝光(-395nm)激发时,Hela-EGFP细胞绿色荧光激发波长为395nm,最大发射峰为509nm。结论Hela-EGFP细胞株具备稳定表达EGFP的能力,为实时可视化进行宫颈癌侵袭转移机制的研究奠定了基础。     

IAA与HRP联合作用对人胰腺癌BXPC-3的细胞毒效应

目的　研究吲哚乙酸(IAA)与辣根过氧化物酶(HRP)在体外共同作用于人胰腺癌BXPC 3 细胞所产生的细胞毒效应。方法　MTT法测定IAA/HRP对BXPC 3细胞增殖的影响;流式细胞仪分析BXPC 3 细胞周期时相变化;胎盘兰(曲利本兰)排斥试验,研究IAA/HRP对BXPC 3 细胞死亡率的影响;原位细胞凋亡检测试剂盒检测IAA/HRP作用后BXPC 3细胞的凋亡。结果　IAA/HRP体外对BXPC 3 细胞有抑制生长的效应,且这种效应有浓度和时间依赖性;BXPC 3细胞在IAA/HRP作用48 h后细胞周期被阻滞在G1期和G2期;IAA/HRP作用72 h后对照组和药物组的凋亡细胞数存在着显著性差异,且凋亡细胞数有浓度依赖性。结论　IAA/HRP对胰腺癌BXPC 3 细胞有细胞毒作用,可体外抑制细胞的增殖,诱导凋亡。     

增龄相关听力丧失小鼠耳蜗毛细胞表型与基因突变的关系

目的　观察增龄相关听力丧失 (AHL)小鼠耳蜗毛细胞病理改变的超微结构 ,为老年性聋病理生理及临床表现+基因表型提供形态学改变依据。方法　应用扫描电镜 (SEM)观察BALB/c小鼠耳蜗Corti器毛细胞的超微结构改变 ,测定动物ABR反应阈值。DNA提取PCR扩增分析基因型。结果　 6月龄BALB/c小鼠耳蜗底回内外毛细胞有连续的缺失 ,静纤毛束有融合、散乱、变短和失去劲度。ABR阈值呈中到重度听力损失。证明种系特异的Ahl基因位点和基因功能。结论　耳蜗毛细胞静纤毛束融合、散乱、变短是老年性聋早期的主要病理改变 ,mdfw与Ah1的表现形式是同一基因位点 ,可能与myosin基因突变有关。     

基于提升小波变换的医学图像融合算法

图像融合是将多幅图像的信息综合到一幅图像的技术,它使得融合后的图像包含更为准确、更为全面可靠的图像描述。为了改善传统医学图像融合算法对细节信息的丢失,采用提升小波的方式将源医学图像进行分解,并分别对高低频采用不同的融合规则,最后经小波逆变换得到目标图像。仿真实验结果表明,该算法是有效可行的。     

抗人CD3单链抗体四聚体基因在HeLa细胞中的表达和活性鉴定

目的　将抗人CD3单链抗体 (scFv) /人 p5 3四聚功能域融合基因转染到HeLa细胞 ,进行真核表达和活性测定。方法　将抗人CD3scFv /人 p5 3四聚功能域融合基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果　表达产物经SDS PAGE和Westernblot证实 ,为Mr约35 0 0 0的特异蛋白条带。纯化后经流式细胞仪检测 ,可特异性地结合人外周血单个核细胞 (PBMCs) ,亲和力高于scFv。结论　获得了可与PBMCs特异性结合的抗人CD3scFv四聚体 ,为进一步临床应用奠定了基础     

Fusion of remote sensing images based on nonsubsampled contourlet transform and region segmentation

The purpose of remote sensing images fusion is to produce a fused image that contains more clear, accurate and comprehensive information than any single image. A novel fusion method is proposed in this paper based on nonsubsampled contourlet transform (NSCT) and region segmentation. Firstly, the multispectral image is transformed to intensity-hue-saturation (IHS) system. Secondly, the panchromatic image and the component intensity of the multispectral image are decomposed by NSCT. Then the NSCT coefficients of high and low frequency subbands are fused by different rules, respectively. For the high frequency subbands, the fusion rules are also unalike in the smooth and edge regions. The two regions are segregated in the panchromatic image, and the segmentation is based on particle swarm optimization. Finally, the fusion image can be obtained by performing inverse NSCT and inverse IHS transform. The experimental results are evaluated by both subjective and objective criteria. It is shown that the proposed method can obtain superior results to others.     

Infrared and visible image fusion based on region of interest detection and nonsubsampled contourlet transform

In order to enhance the contrast of the fused image and reduce the loss of fine details in the process of image fusion,a novel fusion algorithm of infrared and visible images is proposed.First of all,regions of interest(RoIs)are detected in two original images by using saliency map.Then,nonsubsampled contourlet transform(NSCT)on both the infrared image and the visible image is performed to get a low-frequency sub-band and a certain amount of high-frequency sub-bands.Subsequently,the coefcients of all sub-bands are classified into four categories based on the result of RoI detection:the region of interest in the low-frequency sub-band(LSRoI),the region of interest in the high-frequency sub-band(HSRoI),the region of non-interest in the low-frequency sub-band(LSNRoI)and the region of non-interest in the high-frequency sub-band(HSNRoI).Fusion rules are customized for each kind of coefcients and fused image is achieved by performing the inverse NSCT to the fused coefcients.Experimental results show that the fusion scheme proposed in this paper achieves better efect than the other fusion algorithms both in visual efect and quantitative metrics.     

重组人白介素2-穿孔蛋白免疫毒素的制备及功能活性

以人白细胞介素2为载体，人Perforin为毒素，利用基因工程技术构建成pBV221／IL2－Perforom表达质粒，在大肠杆菌中成功地表达出IL2－Perforin重组毒素，SDS－PAGE获得分子量的20KD的蛋白条带，细胞毒测定对活化的人T淋巴细胞和IL2依赖株CTLL2有明显的杀伤作用，并且明显抑制同种混合淋巴细胞反应，这是一种性质全新的重组毒素，其杀伤机制不同于以往所用的毒素（PE，DT等）。这种新的重组毒素不仅有益于器官移植，也可能对自身免疫病的治疗带来新的方法。     

设备故障信息融合问题的思考

认为信息融合技术是工程需求和科技发展的必然结果,给出了信息融合前应当去噪的信息熵解释,探讨了对信息融合方法的要求,提出了融合－识别的构架问题并了三类融合识别构架,对现有的一些信息融合的方法进行了回顾和小结。     

融合多源数据预测高速公路站间旅行时间

为精确预测高速公路站间旅行时间,融合收费数据和微波车检数据开展预测. 首先,基于两种数据源的预测结果,采用决策级融合策略;然后,建立了权重分配预测模 型、BP神经网络预测模型;针对神经网络收敛速度慢,易陷入局部最优的缺陷,基于遗传 算法优化BP神经网络预测模型;最后,利用京哈高速公路北京段收费数据和微波检测器 数据对3 种融合模型进行了验证,对比工作日及非工作日2 种交通流状态下3 种模型的性 能指标.试验结果表明,基于遗传神经网络的融合模型相比其他2 种模型,预测精度及稳 定性均得到了较高的提升,相对误差控制在10%以内,能够更好地满足实际需求.     

卵巢癌细胞系来源外来体的获得及形态特征观察

目的从8910、TC-1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系培养上清液中获得外来体。方法分别培养8910、TC-1、SKOV3、CAOV和3AO卵巢癌细胞系,收集上清液,通过多步离心和超滤等方法分离出外来体。电镜下进行形态学观察。结果8910和3AO细胞系培养上清液中分离出外来体,置于透射电子显微镜下观察,可见具有明显异质性的圆形或椭圆形小囊泡,直径约30-90 nm,有完整的包膜。TC-1、SKOV3和CAOV细胞系培养上清液中未分离出外来体。结论8910和3AO卵巢癌细胞系可分泌外来体,两种细胞系来源的外来体在形态和大小上无明显差别,有可能作为卵巢癌免疫治疗的潜在抗原。