自身免疫性甲状腺疾病患者血清钠/碘转运体抗体的研究

目的　检测自身免疫性甲状腺疾病患者血清钠 /碘转运体 (sodiumiodidesymporter,NIS)抗体 (NIS Ab) ,探讨其在自身免疫性甲状腺疾病发病机制中的作用及在疾病诊断中的应用价值。方法　选择门诊初发的自身免疫性甲状腺疾病患者 5 4例 ,分为格雷夫斯甲亢 (GD) 2 9例 ,男 8例 ,女 2 1例 ,年龄 13～ 6 4岁 ,平均 ( 38.5± 5 .3)岁和桥本甲减 (HT) 2 5例 ,男 3例 ,女2 2例 ,年龄 10～ 5 8岁 ,平均 ( 34.5± 6 .7)岁两组。选择本院健康体检者 2 6例为正常对照组 (NC)。空腹常规静脉血 ,分离血清后 ,取 1mL于 - 2 0℃冻存待测NIS Ab ,剩余血清同时检测甲状腺激素谱和促甲状腺激素受体抗体 (TRAb)。NIS抗体检测利用选择合成的NIS相关短肽 ,采用间接酶联免疫吸附法 (ELISA)。甲状腺激素谱检测及TRAb采用放免法测定。结果　GD组患者血清中NIS抗体含量明显高于正常对照组和HT组 ;HT组与正常对照组比较血清NIS抗体含量无显著性差异。NIS抗体在GD和HT患者中的阳性率分别为 32 %和 2 0 % ,NIS水平与促甲状腺激素受体抗体 (TRAb)无统计学相关关系。结论　GD患者体内的NIS Ab滴度明显高于HT和正常健康者 ,即GD体内针对NIS产生的NIS抗体量较高 ,其相结合的较多 ,从而抑制NIS的活性 ,因此甲状腺细胞基底膜上的NIS活性降低     

甲状腺刺激性抗体对甲状腺细胞分泌功能的影响

目的　研究甲状腺刺激性抗体 (TSAb)对甲状腺细胞分泌T3 的作用及其机制 ,探讨TSAb致Graves病的分子机制。方法　以原代培养人甲状腺细胞为研究对象 ,应用放免法检测T3 ,信号传导抑制剂阻断各传导通道。结果　 2g·L-1TSAb作用 4 8h可使甲状腺细胞T3 的分泌增加约 4 10 % ;蛋白激酶 (PKA)抑制剂及胞内Ca2 +鳌合剂分别使TSAb作用的T3 分泌增加减少约 6 5 .3% ,32 .0 % (P <0 .0 5 ) ;而木黄酮对T3 分泌无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　TSAb通过激活cAMP/PKA及PIP2 (磷酸酰肌醇 ) /Ca2 +途径导致T3 分泌增加可能是TSAb致Graves病的主要机制之一     

用表达重组TSH受体的CHO细胞测定Graves'甲亢病人血清中的TSAb

用表达重组人ＴＳＨ受体的中国仓鼠卵细胞（Ｃｈｉｎｅｓｅｈａｍｓｔｅｒｏｖａｒｙｃｅｌ,ＣＨＯ）细胞代替传统的ＦＲＴＬ－５细胞测定Ｇｒａｖｅｓ甲亢病人的血清甲状腺刺激抗体（ＴｈｙｒｏｉｄＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＡｎｔｉｂｏｄｙ,ＴＳＡｂ）水平,方法相对简单,特异性强,敏感性高,未治疗的Ｇｒａｖｅｓ病人９２．７％阳性,治疗后迅速下降,恢复期的阳性率为３５％,该方法对Ｇｒａｖｅｓ甲亢的诊断、治疗后效果的判断有重要意义。     

甲状腺刺激性抗体对甲状腺细胞过氧化物酶活性的影响

目的　观察甲状腺刺激性抗体 (TSAb)对甲状腺细胞过氧化物酶活性 (TPO)的影响及该作用所通过的信号传导途径 ,探讨TSAb导致Graves病的分子机制。方法　以原代培养人甲状腺细胞为研究对象。采用生物学法检测TSAb活性 ;应用改良愈创木酚氧化法检测TPO活性 ;同时应用信号传导抑制剂阻断各传导途径 ,分别观察蛋白激酶A(PKA)抑制剂、BAPTA AM(细胞内Ca2 +鳌合剂 )、TPK(酪氨酸蛋白激酶 )抑制剂木黄酮对TSAb作用下TPO活性的影响。结果　①新鲜分离的甲状腺细胞TPO活性最高 ,此后逐渐下降 ,培养第 6天已基本降至最低 ;②TSAb作用 12h可使TPO活性开始增加 ,随时间延长 ( 12～ 4 8h) ,TPO活性逐渐增强 ,高峰时间为 4 8h ,持续 72h仍可见明显的刺激效应。 1mg·mL-1TSAb即可使TPO活性增加 ,以后随剂量增加TPO活性逐渐增强 ,4mg·mL-1作用基本达最大。 4mg·mL-1TSAb作用 4 8h可使甲状腺细胞TPO活性增加约 36 0 % ;③PKA抑制剂阻断cAMP/PKA途径 ,可使TSAb作用的TPO活性增加减少近 79.2 % (P <0 .0 1) ,BAPTA AM阻断PIP2 /Ca2 +(磷酸酰肌醇 /钙离子 )途径及木黄酮阻断TPK途径 ,均对TPO活性无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　TSAb通过激活cAMP/PKA途径导致TPO活性增加 ,甲状腺细胞合成激素功能亢进。这可能是TSAb致Grav     

Graves’病样自然杀伤T细胞缺如小鼠血清TSH受体抗体的水平

目的　探讨自然杀伤T细胞 (naturalkillerTcell,NKT)在Graves’病发病中的作用。方法　用表达有人TSH受体的细胞免疫NKT细胞缺如小鼠和野生型BLAB/c小鼠 ,每两周一次 ,共 6次。在最后一次免疫结束后两周处死小鼠 ,检测血清甲状腺素水平 ,TSH受体抗体。结果　免疫后的NKT细胞缺如小鼠 ,血清TT4和TRAb水平轻度升高 ,并且与对照组比较 ,有显著性差异。但是 ,在经免疫的NKT细胞缺如小鼠和野生型小鼠之间 ,血清平均TT4水平和TRAb水平相似 ,且TSAb与TSBAb水平变化两组之间无显著性差异。结论　NKT细胞可能不参与Graves’病的发生     

IL—1α、IL—4、IL—6、TNFα基因多态性与自身免疫性甲状腺疾病的关系

目的　研究甲状腺功能亢进患者血清中甲状腺刺激性抗体 (thyroidstimulatingantibodies,TSAb)活性对甲亢治疗停药的指导意义。方法　选取 2 0 0 1年至 2 0 0 2年本院内分泌门诊 4 2例具有典型甲亢症状的患者作为研究对象 ,根据病史、甲功检查及甲穿结果确诊后 ,分为Graves病 (Gravesdisease,GD)组 ,桥本氏甲状腺炎 (Hashimoto’sthyroiditis,HT)组和产后甲状腺炎( postpartumthyroiditis,PPT)组。本科内分泌实验室用人工表达重组TSH受体的人胚肾细胞进行连续传代培养 ,并以适当密度种植于 2 4孔板 ,孵育 4 8h后 ,将聚乙二醇制备的患者粗制IgG以 0 .5mmol·L-1IBMX的无NaCl的Hanks液溶解后 ,覆盖细胞进行刺激反应 ,反应后以样本刺激细胞产生的cAMP含量表示TSAb的活性。检测研究对象甲亢治疗后血清中TSAb活性 ,结合临床制定相应治疗方案 ,并对这些病例进行长期随访观察 ,随时记录病情变化情况。结果　GD组 39例病人接受了 ( 32±30 )月的抗甲状腺药物治疗 (最长 12 0月 ,最短 1月 )后 ,TSAb阴性 36例 (占 92 .3% ) ,对临床表现及甲功检查均完全正常的 30例患者 (占 83.3% )给予停药。在 ( 10 4 .0± 6 4 .7)d (最长 10月 ,最短 1月 )的随访期内 ,仅 4例 (占 11.1% )女性病人复发 ,其余病例病情稳定 ;HT组     

甲状腺功能亢进患者TSAb与治疗停药的关系

目的　研究甲状腺功能亢进患者血清中甲状腺刺激性抗体 (thyroidstimulatingantibodies,TSAb)活性对甲亢治疗停药的指导意义。方法　选取 2 0 0 1年至 2 0 0 2年本院内分泌门诊 4 2例具有典型甲亢症状的患者作为研究对象 ,根据病史、甲功检查及甲穿结果确诊后 ,分为Graves病 (Gravesdisease,GD)组 ,桥本氏甲状腺炎 (Hashimoto’sthyroiditis,HT)组和产后甲状腺炎( postpartumthyroiditis,PPT)组。本科内分泌实验室用人工表达重组TSH受体的人胚肾细胞进行连续传代培养 ,并以适当密度种植于 2 4孔板 ,孵育 4 8h后 ,将聚乙二醇制备的患者粗制IgG以 0 .5mmol·L-1IBMX的无NaCl的Hanks液溶解后 ,覆盖细胞进行刺激反应 ,反应后以样本刺激细胞产生的cAMP含量表示TSAb的活性。检测研究对象甲亢治疗后血清中TSAb活性 ,结合临床制定相应治疗方案 ,并对这些病例进行长期随访观察 ,随时记录病情变化情况。结果　GD组 39例病人接受了 ( 32±30 )月的抗甲状腺药物治疗 (最长 12 0月 ,最短 1月 )后 ,TSAb阴性 36例 (占 92 .3% ) ,对临床表现及甲功检查均完全正常的 30例患者 (占 83.3% )给予停药。在 ( 10 4 .0± 6 4 .7)d (最长 10月 ,最短 1月 )的随访期内 ,仅 4例 (占 11.1% )女性病人复发 ,其余病例病情稳定 ;HT组     

成人隐匿性自身免疫糖尿病与甲状腺自身免疫的关系

目的　探讨成人隐匿性自身免疫糖尿病 (LADA)与甲状腺自身免疫的关系。方法　对 90例LADA( 2 3～ 74岁 )、10 4例 1型糖尿病患者 ( 7～ 70岁 )、10 0例 2型糖尿病患者 ( 2 9～ 74岁 )和 10 0例健康对照 ( 5～ 79岁 )进行甲状腺过氧化物酶抗体 (TPO Ab)、甲状腺球蛋白抗体 (TG Ab)的检测。LADA及 1型糖尿病患者还分别进行谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD Ab)的检测。TPO Ab、TG Ab采用放免法检测 ,GAD Ab采用放射配体法检测。结果　①LADA患者TPO Ab的检出率为 16 .7% ( 15 /90 )高于 2型糖尿病患者 ( 7.0 % ,7/10 0 ;P <0 .0 5 )。LADA患者中任一甲状腺自身抗体的检出率为 18.9% ( 17/90 ) ,与 1型糖尿病 2 5 .0 %( 2 6 /10 4 )、2型糖尿病 11.0 % ( 11/10 0 )均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。该抗体阳性率在前二者均高于正常对照 8.0 % ( 8/10 0 ;P<0 .0 5 ) ,而 2型糖尿病与正常对照无显著性差异。②携高滴度GAD Ab(GAD Ab指数≥ 0 .5 )的LADA患者中任一甲状腺自身抗体的检出率为 5 0 .0 % ( 9/18) ,高于 1型糖尿病患者 ( 2 5 .0 % ,2 6 /10 4 ;P <0 .0 5 )和携低滴度GAD Ab的LADA患者 ( 12 .5 % ,8/6 4 ;P <0 .0 5 )。③LADA患者甲状腺功能异常率为 2 7.4 % ( 14 /5 1) ,高于 2型糖尿病患者 ( 9.1% ,3/33;P <0 .     

Graves病自身免疫单链抗体库的构建及抗甲状腺单抗的筛选

目的　Graves病属于甲状腺自身免疫性疾病 (AITD) ,其患者血中存在多种抗甲状腺自身抗体 ,其中包括TGAb、TPOAb以及TRAb。单链抗体 (ScFv)是以连接肽将重链可变区基因 (VH)和轻链可变区基因 (VL)连接起来形成的单链小分子抗体。为了获得人源性抗甲状腺抗体 ,分析其基因结构 ,进一步研究AITD的发病机理 ,我们构建了人源性噬菌体ScFv库。方法　采取Graves病人静脉血 ,用淋巴细胞分层液按常规分离单个核细胞。提取淋巴细胞总RNA逆转录合成cDNA。分别扩增出全套的免疫球蛋白VL 链和VH 链基因 ,利用重叠PCR方法 ,构建ScFv基因。重组到 p3SCMH嗜菌粒中 ,电穿孔转化XL1 Blue大肠杆菌。经适当培养后 ,加入约 10 12 空斑形成单位 (PFU)的辅助噬菌体VCSM13,构建噬菌体抗体库。测定库容 ,鉴定重组率。以固相化的抗原对噬菌体ScFv库进行了 4轮“吸附 洗脱 扩增”的筛选 ,富集特异性噬菌体抗体。用ELISA竞争抑制实验检测富集的噬菌体抗体。结果　以单链cDNA为模板 ,用PCR方法分别扩增VL 链和VH 链的DNA。PCR产物经 15g·L-1琼脂糖电泳检测 ,分别在 380bp和 4 2 0bp左右见到扩增带。将VL 和VH 进行重叠PCR制备ScFv ,琼脂糖电泳显示PCR产物在 80 0bp左右有扩增带。将ScFv基因纯化 ,用SacⅠ+SpeⅠ双酶消化后 ,重组到 p3     

2056例成人血清TSH,TT4,TT3及甲状腺自身抗体检查结果分析

目的　分析血清促甲状腺激素 (thyroidstimulatinghormone,TSH) ,甲状腺自身抗体 (thyroidautoantibody ,TAA )与年龄、性别的关系 ,探讨检测指标间相互关系 ,并且评估该人群甲状腺功能状态。方法　对西安地区某单位全体职工 2 0 5 6人进行血清TSH、甲状腺激素、甲状腺球蛋白抗体和甲状腺微粒体抗体 5项指标检测 ,并由调查员逐一调查以排除总体中已确诊的甲状腺疾病、怀孕、服用性激素及锂剂者。结果　研究总体中甲减患病率为 9.97% ,甲亢患病率为 6 .6 1%。在未知组 (即研究总体中去除已确诊甲状腺疾病、怀孕、服用性激素及锂剂者 )中 ,TSH随年龄增加而增高 ,6 0～ 6 9岁组TSH值达高峰 ,女性和男性的TSH中位数分别为 2 .4 7和 3.31IU·mL-1。当TAA阴性时 ,这种增高趋势仍存在 ,但是TSH始终无性别间差异。TAA阳性率女性 9.76 % ,男性 1.6 9% ,有明显的性别间差异 ,但各年龄组间分布较一致。TAA阳性率与TSH有相关性 ,随TSH变化呈倍数增长。结论　应重视甲状腺功能的筛查 ,尤其是老年人群 ,对男女人群均应进行定期甲功筛查 ,以期早期发现甲状腺疾病 ,最大限度的减少甲状腺疾病危害     

THE CLINICAL SIGNIFICANCE OF TSAb IN GRAVES' DISEASE

ＧａｏＨｕｔ（高慧）；ＪｉｎＳｈｉｘｉｎ（金世鑫）；ＺｏｎｇＪｉａｎｑｉ（宗建奇）；ＬｉＪｉａｎ（李健）；ＭａＸｉｕｐｉｎｇ（马秀萍）；ＳｈｉＢｉｎｇｙｉｎ（施秉银）ＴＨＥＣＬＩＮＩＣＡＬＳＩＧＮＩＦＩＣＡＮＣＥＯＦＴＳＡｂＩＮＧＲＡＶＥＳ＇ＤＩＳＥ...     

PDCD5基因在初诊Graves'病患者PBMCs中表达情况的初步研究

目的探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves'病(GD)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达。方法半定量RT-PCR法检测53例初诊GD患者外周血单个核细胞PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平。结果35例PDCD5 mRNA在GD患者PBMCs中表达呈阳性,阳性率为66.1%,较正常对照者(55.6%)升高;其表达水平(1.01±0.13)显著高于正常对照(0.52±0.13,P<0.05),且GD患者高T3水平组PDCD5 mRNA的表达显著高于低T3水平组(P<0.05)。结论PDCD5 mRNA在GD患者PBMC表达升高,可能与GD淋巴细胞凋亡异常有关。     

Induction of animal model of Graves' disease in BALB/c mice

Objective To construct an animal model of Graves' disease (GD) by immunizing BALB/c mice with hM12 cells co-expressing major histocompatibility complex (MHC) class Ⅱ molecules and human thyrotropin receptor (TSHR) molecules. Methods BALB/c mice in experimental group (H-2d) were immunized with hM12 cells Intraper-itoncally every 2 weeks for six times, while mice in control group were immunized with M12 cells. Five weeks later, the thyroids were histologically examined, and serum samples were tested for thyroid-stimulating antibodies (TSAb) and thyroid hormone levels. Results One BALB/c mouse in experimental group developed Graves'-like disease. Total T4 and T3 levels in this mouse were above the upper limit of normal, TSAb activity was displayed in its serum. The thyroid histologically showed the features of thyroid hyperactivity including thyrocyte hypercellularity and colloid absorption.None of control mice developed Graves'-like disease. Conclusion An animal model with some characteristics of human Graves' disease was successfully induced and the model will facilitate studies aimed directly at understanding the patho-genesis of autoimmunity in Graves' disease.     

直接ELISA法早期诊断肾综合征出血热

联合应用硫酸鱼精蛋白沉淀和蔗糖垫层超速离心,从感染鼠脑中纯化HFRSV抗原,纯化抗原用HRP标记,成功地建立了采用酶标记HFRSV抗原的IgM抗体捕捉ELISA法,即直接ELISA法,检测HFRS患者血清特异IgM抗体。与已报道的采用酶标记HFRSV IgG的IgM抗体捕捉ELISA法相比。二法敏感度相似,但直接ELISA法可减少一步免疫反应,并能完全避免类风湿因子的干扰。应用直接ELISA法检测临床诊断的HFRS患者血清87份,其中早期患者(1～5病日)血清37份,特异IgM抗体阳性检出率分别为96.5%和91.8%。我们认为酶标记抗原直接ELISA法为HFRS的早期诊断提供了更为特异、简便快速的新方法。     

真核表达人乳头瘤病毒16型L_1蛋白在检测宫颈癌患者相应抗体的应用

用真核表达HPV16L1蛋白为抗原，酶联免疫吸附测定64例宫颈癌患者血清和阴道分泌物的相应抗体，并用型特异性聚合酶键反应检测宫颈癌组织HPV16L1基因。结果：宫颈癌组血清HPV16L1抗体阳性年64．1％，对照组20．8％；宫颈癌组阴道分泌物HPV16L1抗体阳性率64.1％，对照组25％；宫颈癌组HPV16L1基因检出率为42．2％，对照组10％。有显著差异（P＜0．01）。结论：高危型HPV感染，宫颈癌患者有明显免疫反应，全身和局部无明显差异，真核表达HPV16L1蛋白可用于宫颈癌患者的抗体测定。     

ABC-ELISA法实验过程中影响因素的研究

本文介绍了用ABC-ELISA法检测HBsAg,较系统地研究了ABC-ELISA法实验过程中的主要影响因素。结果发现:ABC-ELISA法实验过程中的非特异性显色不仅来自抗生物素的非特异性吸附,而且还来自生物素化抗体的非特异性吸附。本文提出了消除ABC-ELISA法实验过程中非特异性显色的切实可行的方法。     

THE ANALYSIS OF HUMAN CYTOMEGALOVIRUS INFECTION DURING PREGNANCY IN QINBA MOUNTAINOUS AREA

Humancytomegalovirus (HCMV )isoneofthemostcommoncongenitalvirusinfectioninhu manandalsousuallythecauseofmentalretardationandhearinglossofchildreninthedevelopedworld .TheactiveinfectionpercentageofHCMVisabout0 .3% - 12 .0 %there ,butwithregardtothedevel opingcountries ,especiallythepovertymountainousareas,the percentageofCMVinfectionisun known .QinbamountainousareainShaanxiisapoverty strikingarea ,wheretheeconomicconditionandtheculturearebackwardandtheincidenceofMRishigh .TostudyCMVinfec…     

大骨节病和腺病毒感染的相关性研究

目的研究腺病毒感染与大骨节病(KBD)发病的关系。方法用巢式聚合酶链式反应(Nest-PCR)检测KBD病区和非病区儿童全血及KBD患者血清接种软骨细胞的腺病毒DNA,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测KBD病区和非病区儿童血清腺病毒IgG抗体。结果KBD病区KBD儿童、病区对照组儿童和非病区儿童全血腺病毒DNA的阳性率分别为33.33%、34.92%和28.57%,腺病毒IgG抗体的阳性率分别为68.29%、65%和68.97%,差异无统计学意义(P>0.05);KBD患者血清培养细胞腺病毒DNA的PCR结果均为阴性。结论KBD病区和非病区儿童腺病毒均有较高的检出率;KBD的发病和腺病毒感染可能无直接病因学关系。